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    18 F-FDG PET/CT顯像評價二甲雙胍對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用

    2018-04-18 06:03:30蘇航田毅朱紫薇李珺奇楊子鶴常智李全牟甜甜李翔張曉麗
    心肺血管病雜志 2018年12期
    關(guān)鍵詞:中心區(qū)比值遠端

    蘇航 田毅 朱紫薇 李珺奇 楊子鶴 常智 李全 牟甜甜 李翔 張曉麗

    急性心肌梗死(acute myocardial Infarction,AMI)是心血管疾病中致死率最高的疾病之一,早期急診溶栓和經(jīng)皮冠狀動脈腔內(nèi)成形術(shù)仍是目前治療MI最有效的臨床手段[1]。然而對缺血心肌的再灌注通常會導(dǎo)致心肌缺血再灌注損傷(myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI)[2],采取積極手段避免MIRI的發(fā)生和發(fā)展,可明顯改善AMI患者的左心室功能,最終改善患者的遠期預(yù)后[3-4]。二甲雙胍(metformin,MF)是常見的降血糖藥,對缺血心肌的保護作用受到廣泛的關(guān)注,其相關(guān)機制尚不明確。核醫(yī)學(xué)分子影像學(xué)技術(shù)從分子水平,動態(tài)、在體實時評價MIRI心肌的血流灌注、心肌細胞代謝和細胞活性等一系列病理生理學(xué)特點,輔以組織病理學(xué)檢測,深入探討MIRI的發(fā)生發(fā)展過程,為此,本研究采用18F-FDG PET/CT心肌代謝顯像,從分子影像學(xué)角度探討MF干預(yù)對大鼠MIRI的作用及其潛在的價值。

    資料與方法

    1.實驗動物 選用雄性,SD大鼠,16只,周齡約4~6周,體質(zhì)量約200~240g,由北京斯貝福生物技術(shù)有限公司提供。主要設(shè)備包括Inveon型Micro-PET/CT掃描儀(德國 SIMENS公司)、Matrx VMR型麻醉機(美國MATRX公司)、LeicaRM2235切片機(北京中儀光科科技發(fā)展有限公司)、免疫組化顯微鏡成像系統(tǒng)(ECLIPSE50i/55i,NICON)。顯像劑18F-FDG由北京原子高科股份有限公司提供提供,放化純>95%。

    2.方法 (1)MIRI模型制備:腹腔注射0.3%戊巴比妥鈉麻醉大鼠,麻醉成功后行氣管插管,機械通氣,而后開胸,于左側(cè)第3肋間切口,在左心耳下緣距肺動脈弓根部2mm處,冠狀動脈前降支面置硅膠管與冠狀動脈一起結(jié)扎,缺血持續(xù)30min后松開結(jié)扎線,建立缺血再灌注損傷模型。結(jié)扎成功標志:結(jié)扎下方心肌顏色變成灰白色。復(fù)灌成功標志:心肌顏色由灰白逐漸恢復(fù)正常。

    (2)動物分組:選取缺血再灌注損傷建模成功的12只SD大鼠(建模死亡率約為25%),隨機分為MF干預(yù)組(n=6)及正常對照組(n=6),其中MF干預(yù)組自建模成功后第1天開始給予50mg·kg-1·12h-1劑量MF灌胃,正常對照組給予等體積的0.9%氯化鈉溶液灌胃。

    3.圖像采集、重建和分析 (1)分別于建模成功后第1天、第7天、第14天、第30天行18F-FDG micro PET/CT門控心肌代謝顯像。每次顯像前稱重記錄大鼠,利用異氟烷-氧氣混合氣體(1.5%)行吸入式麻醉,之后尾靜脈注射18F-FDG約37 MBq,注射30min后行micro PET/CT門控心肌代謝顯像,PET掃描參數(shù)為:層厚 0.78mm,矩陣 128mm×128mm,采集時間20min,采集能窗350~650 keV。CT掃描參數(shù):電壓80kV,電流500A,層厚0.1mm,采集時間10min。掃描結(jié)束后,將掃描的圖像用OSEM3D迭代重建(迭代4次,子集數(shù)為8)。

    (2)重建后利用西門子自帶圖像處理軟件Inveon Research Workplace勾畫感興趣容積(volume of interest,VOI)。分別大鼠心肌心尖部、心尖部周邊、下后壁不同部位手動勾畫VOI,分別代表缺血中心區(qū)、缺血邊緣區(qū)和遠端區(qū),計算不同部位18F-FDG的標準攝取最大值(SUVmax),SUV=局部感興趣區(qū)放射性活度(MBq/mL)/注射放射性活度(MBq)/體質(zhì)量(g)。計算中心區(qū)/遠端區(qū) SUVmax比值(TBR值)。勾畫左心室心腔容積,獲得左心室整體功能參數(shù),包括舒張末期容積(EDV,mm3),收縮末期容積(ESV,mm3)和 LVEF(%)。

    4.組織病理學(xué)分析 于第30d圖像采集后,處死大鼠,用手術(shù)剪沿腹中線剪開腹腔,取出心臟,用0.9%氯化鈉溶液沖洗,濾紙吸干水分,沿冠狀溝剪去心房,再沿室間隔剪去室間隔和右心室,獲取左心室心肌。以4%多聚甲醛固定,石蠟包埋后,以5μm厚度連續(xù)切片,每隔5張取一張,用于HE染色,HE染色采用常規(guī)方法進行。

    表1 兩組不同時間點SUVmax值及左心室功能參數(shù)值(ˉ±s)

    表1 兩組不同時間點SUVmax值及左心室功能參數(shù)值(ˉ±s)

    注:TBR兩組比較,*P=0.010;EDV兩組比較,**P=0.017

    項目 第1天 第7天 第14天 第30天 F值 P值干預(yù)組中心區(qū)/遠端區(qū) 0.83±0.16 0.85±0.05 0.82±0.13 0.81±0.06* 0.133 0.938 ESV/mm3 88.10±15.6 60.10±44.3 92.70±36.5 68.0±8.5 2.274 0.132 EDV/mm3 302.00±70.2 274.60±65.6 387.70±74.6 358.2±22.6** 4.272 0.029 LVEF/% 70.80±2.2 79.60±3.4 76.22±3.12 81.0±1.4 0.719 0.560對照組中心區(qū)/遠端區(qū) 0.90±0.18 0.88±0.14 0.81±0.17 0.65±0.09 4.637 0.037 ESV/mm3 80.50±2.2 68.20±24.6 99.10±30.4 75.4±6.2 19.547 0.000 EDV/mm3 252.10±19.8 315.90±26.6 368.70±46.7 457.5±30.0 8.500 0.003 LVEF/% 67.90±2.3 78.40±2.5 73.10±3.0 83.6±1.1 0.251 0.859

    圖1 TBR值與EDV相關(guān)性分析結(jié)果 A:MF干預(yù)組,B:正常對照組

    5.統(tǒng)計學(xué)方法 統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 18.0軟件。計量資料以均數(shù)±標準差表示,不同時間點比較采用單因素ANOVA分析,兩組比較采用獨立樣本t檢驗。TBR值與心功能參數(shù)之間的關(guān)系采用Pearson相關(guān)分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    結(jié) 果

    1.18 F-FDG microPET/CT門控心肌灌注顯像定量分析 在第1天、7天、14天、30天不同時間點,MF干預(yù)組及正常對照組大鼠的心肌不同部位SUV-max值、中心區(qū)/遠端區(qū)SUVmax比值(TBR值)及左心室功能參數(shù)如表1所示。

    在MF干預(yù)組中,中心區(qū)與遠端區(qū)SUVmax比值在各時間點無明顯變化趨勢,與EDV無明顯相關(guān)關(guān)系(r=-0.218,P>0.05);而在對照組中,中心區(qū)與遠端區(qū)SUVmax比值從再灌注后第1天至第30天逐漸減低,LVEDV逐漸增大,兩者呈負相關(guān)關(guān)系(r=-0.732,P=0.000,圖 1)。

    在缺血再灌注術(shù)后1 d,7d和14d,中心區(qū)與遠端區(qū)TBR值和LVEDV,MF干預(yù)組和對照組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義,而在治療30d后,中心區(qū)與遠端區(qū)的TBR值,MF干預(yù)組較對照組明顯升高[(0.81±0.06)vs.(0.65±0.09),P<0.05],差異有統(tǒng)計學(xué)意義。MF干預(yù)組LVEDV較對照組明顯減小[(358.21±22.62)vs.(457.53±49.91)mm3,P<0.05],差異有統(tǒng)計學(xué)意義(圖2),提示MF干預(yù)治療1個月后,MF減慢了左心室擴大及缺血再灌注損傷的程度;在再灌注術(shù)后不同時間點的左心室LVESV和LVEF,兩組大鼠間比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。

    圖2 建模術(shù)后第30天,中心區(qū)與遠端區(qū)的TBR值和LVEDV 注:兩組比較,P<0.05

    2.組織病理學(xué)結(jié)果 兩組大鼠缺血中心區(qū)組織切片HE染色鏡下均見心肌細胞出現(xiàn)腫脹,胞漿呈顆粒狀凝集而分布不均勻,呈嗜酸性,橫紋模糊不清或者消失,其中正常對照組心肌細胞受損程度較MF干預(yù)組明顯;兩組大鼠缺血中心區(qū)組織切片均示正常心肌組織(圖3)。

    圖3 兩組大鼠心肌不同部位(中心區(qū)×10、遠端區(qū)×20,HE染色比較)

    討 論

    MF是臨床上應(yīng)用最早、最廣泛和安全有效的雙胍類降血糖口服藥,眾多的臨床及基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)其對心血管系統(tǒng)具有保護作用,可降低心血管事件和心力衰竭的發(fā)生率[5-6]。針對MF的研究,最近一篇Meta分析包括27項體外(心肌組織和心臟)和在體研究(動物實驗和人體臨床試驗),發(fā)現(xiàn)MF治療可以減小心肌缺血和心肌梗死面積,減輕心室重構(gòu)程度(收縮及舒張末期容積),改善心功能,提高LVEF[7-8]。 因此,MF作為一個安全、有效和相對便宜的藥物,在治療糖尿病心力衰竭中的地位被得到廣泛認可,并于2014年被美國糖尿病協(xié)會臨床指南列為糖尿病合并心力衰竭患者的首選藥物[9]。

    目前大多數(shù)研究認為MF可通過多種途徑保護心肌細胞,從而阻止和延緩心室重構(gòu)和心力衰竭的發(fā)生和發(fā)展[10]。既往研究報道多采用小鼠、大鼠等MIRI在體和離體模型,評價MF對心血管的保護作用。然而,研究僅在治療終點針對心肌組織進行病理、免疫組化等方法評價MF療效,缺乏系統(tǒng)、連續(xù)的活體影像學(xué)研究。

    本研究通過對大鼠急性灌注模型給予MF干預(yù)治療,分別在建模后急性期(1d,7d),亞急性期(14d),慢性期(30d)行18F-FDG microPET/CT門控心肌代謝顯像,動態(tài)評了MF治療過程中,不同部位(缺血中心區(qū)、周邊區(qū)和遠端區(qū))心肌代謝情況(SUVmax值)隨時間動態(tài)變化的規(guī)律。在正常對照組中,中心區(qū)與遠端區(qū)TBR比值從再灌注后第1天至第30天逐漸減低,LVEDV逐漸增大,提示無MF干預(yù),MIRI程度隨時間延長逐漸加重,左心室重構(gòu)程度不斷增加;而MF干預(yù)組中心區(qū)與遠端區(qū)TBR比值未隨時間延長而減低,EDV無明顯變化,提示MF延緩了缺血再灌注損傷程度和心室重構(gòu)的速度。在建模術(shù)后30d,我們發(fā)現(xiàn)MF干預(yù)組的缺血中心區(qū)與遠端區(qū)TBR比值較對照組明顯升高,MF干預(yù)組LVEDV較對照組明顯減小,提示MF干預(yù)治療一個月不僅對大鼠MIRI中的心肌有保護作用,而且延緩了心室重構(gòu)。但是對于LVEF沒有明顯影響??赡茉颍俟嘧⒅委熀髸r間尚短,缺血再灌注損傷尚沒有導(dǎo)致嚴重的整體收縮功能受損。

    綜上所述,18F-FDG microPET/CT顯像,可以動態(tài)評估大鼠MIRI隨時間變化的規(guī)律,MF干預(yù)對缺血再灌注損傷后大鼠心肌缺血具有一定的保護作用,減輕心肌缺血受損的程度,從而一定程度上延緩心室重構(gòu)的發(fā)生和發(fā)展。

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