轉(zhuǎn)錄因子陰陽1在多囊卵巢綜合征患者性激素合成中的調(diào)節(jié)作用研究

王婉雪，張加苗，謝易冉，李哲鄖，朱潔茹，歐建平，楊一華,2*

（1．桂林醫(yī)學(xué)院，廣西 桂林 541000；2．廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)研究中心，廣西 南寧 530022；3．中山大學(xué)第三附屬醫(yī)院生殖中心，廣東 廣州 510000）

多囊卵巢綜合征合并胰島素抵抗不僅引起患者內(nèi)分泌調(diào)節(jié)紊亂進(jìn)而不排卵，也是PCOS患者高雄激素血癥的重要因素，被認(rèn)為是多數(shù)PCOS患者病理生理學(xué)紊亂的始因[1]。

YINYANG 1（YY1）作為一個(gè)重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，可以結(jié)合到基因啟動(dòng)子區(qū)域，募集其他協(xié)調(diào)作用因子，通過表觀修飾作用調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄[2]。提示YY1在細(xì)胞中具有廣泛的作用，調(diào)控一個(gè)復(fù)雜的調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)從而在不同的細(xì)胞信號(hào)通路發(fā)揮重要作用[3,4]。之前我們曾經(jīng)研究了YY1在子宮內(nèi)膜腺樣癌發(fā)病過程表觀遺傳調(diào)控，并發(fā)現(xiàn)YY1能結(jié)合在APC基因啟動(dòng)子區(qū)特定靶點(diǎn)，通過募集聚梳蛋白基因家族抑制復(fù)合體2（Polycomb Repressive Complex 2），引起組蛋白H3賴氨酸K27上三甲基化（H3K27me3），后者使得APC表達(dá)沉默，wnt/beta-catenin信號(hào)激活，促進(jìn)細(xì)胞增殖和侵襲，最終導(dǎo)致腫瘤發(fā)生發(fā)展[5]。鑒于YY1轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性的廣泛性和顯著性，我們推測其在PCOS患者內(nèi)分泌及代謝紊亂病理生理過程中發(fā)揮表觀修飾作用，故進(jìn)行本研究。

1　資料與方法

1.1　資料

PCOS診斷標(biāo)準(zhǔn)（2003年鹿特丹）。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）臨床資料不齊全。（2）伴隨其他影響糖代謝疾病的患者，如1型糖尿病等。（3）后續(xù)助孕無可用胚胎移植患者。

1.2　方法

顆粒細(xì)胞及卵泡液收集：本研究收集桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院進(jìn)行IVF-ET助孕患者穿刺取卵術(shù)后丟棄卵泡液60份。在4℃以3000 rpm離心10 min，取上清液凍存于-70℃待檢。YY1濃度采用ELISA法測定。入選標(biāo)準(zhǔn)：對(duì)照組，即非胰島素抵抗PCOS組（30份）：年齡20～40歲，月經(jīng)規(guī)律，因?yàn)槟蟹揭蛩亍⑤斅压芤蛩氐仍蜻M(jìn)行IVF-ET助孕患者，HOMA＜2.7。胰島素抵抗型PCOS患者（30份）：年齡20～40歲，月經(jīng)不規(guī)律，診斷為PCOS患者并進(jìn)行IVF-ET助孕，HOMA≥2.7。所有入選患者均隨訪并簽署研究知情同意書。

1.3　統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，連續(xù)變量采用T檢驗(yàn)，分類變量采用秩和檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié) 果

表1　患者一般情況比較

表2　患者臨床結(jié)局情況比較

YY1在PCOS-IR組平均濃度0.255±0.078 ng/ml，對(duì)照組0.185±0.05 ng/ml，P=0.000，兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。然后我們對(duì)YY1與臨床數(shù)據(jù)進(jìn)行了相關(guān)性分析（皮爾森相關(guān)），發(fā)現(xiàn)有顯著性差異的為AFC（r=0.462，P=0.000），BMI（r=0.285，P=0.027），HOMA（r=0.456，P=0.000），空腹血胰島素（r=0.429，P=0.001）。

3　討 論

目前對(duì)于YY 1在PCOS發(fā)病中研究較少，但部分研究提示其在糖尿病小鼠模型骨骼肌和肝臟細(xì)胞葡萄糖代謝中發(fā)揮重要作用，研究證實(shí)YY1在骨骼肌中表達(dá)沉默，繼而激活insulin/IGF信號(hào)通路，有助于改善mTOR蛋白特異性抑制劑-雷帕霉素誘發(fā)的胰島素樣癥狀[6]。寧光教授的團(tuán)隊(duì)最近在C57BL/6小鼠研究中發(fā)現(xiàn)胰島素抵抗可增加小鼠肝臟細(xì)胞YY1表達(dá)，進(jìn)而YY1可以通過上調(diào)糖皮質(zhì)激素受體促進(jìn)肝細(xì)胞糖異生作用[7]。但關(guān)于YY 1對(duì)PCOS患者類固醇激素合成調(diào)節(jié)的相關(guān)研究鮮有報(bào)道，2002年有研究發(fā)現(xiàn)YY1通過抑制NF-Y與類固醇激素合成急性調(diào)節(jié)蛋白（StAR）啟動(dòng)子結(jié)合，抑制后者的表達(dá)[8]。

至此我們僅進(jìn)行了臨床樣本的表型驗(yàn)證，但YY1在PCOS患者胰島素抵抗的病理生理過程中，究竟怎樣發(fā)揮表觀遺傳調(diào)控的作用尚未知曉，還需要我們進(jìn)一步深入的研究。本課題組后續(xù)正在進(jìn)行動(dòng)物造模，細(xì)胞體外培養(yǎng)模擬胰島素抵抗環(huán)境，高通量測序，染色質(zhì)免疫共沉淀以及雙熒光素酶報(bào)告基因等實(shí)驗(yàn)，這將拓寬我們對(duì)PCOS內(nèi)分泌紊亂發(fā)病分子機(jī)制的認(rèn)識(shí)，為PCOS患者合并胰島素抵抗的治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

4　結(jié) 論

我們推測YY1促進(jìn)PCOS患者胰島素抵抗的發(fā)生發(fā)展；YY1可以作為PCOS患者胰島素抵抗程度的判斷指標(biāo)以及在該病治療上的分子靶標(biāo)。

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