離子液體超聲輔助提取香葉總黃酮及其抗氧化性研究

鐘方麗，金龍哲,王曉林*，谷月

(1.吉林化工學(xué)院 化學(xué)與制藥工程學(xué)院，吉林 吉林　132022；2.延邊朝鮮族自治州農(nóng)業(yè)科學(xué)院，吉林 延吉　133001)

香葉為植物香葉天竺葵的莖葉，我國各地均有栽培，全草具有清新芳香氣味，香葉含有芳香揮發(fā)油，其主要成分是芳樟醇、丁香油酚、香茅醇、桉葉素等[1,2]。香葉作為調(diào)味料常用于湯類或肉類烹調(diào)時的調(diào)味，也是西餐常用芳香調(diào)味料之一，香葉除了作為調(diào)味品使用外，尚具有祛風(fēng)除濕、行氣止痛、殺蟲之功效[3]。香葉除含有芳香揮發(fā)油外，還含有大量的黃酮類成分[4]，而黃酮類化合物具有清除自由基、提高免疫力、抗衰老等多種生理活性，在藥品、飲料、食品領(lǐng)域應(yīng)用廣泛[5-6]。離子液體是由有機(jī)陽離子和有機(jī)或無機(jī)陰離子組成的在室溫下呈液體的有機(jī)離子體系[7]。由于離子液體具有揮發(fā)性小、性質(zhì)穩(wěn)定、溶解能力強(qiáng)等獨(dú)特的物理化學(xué)性質(zhì)，現(xiàn)已在天然產(chǎn)物活性成分提取領(lǐng)域有所應(yīng)用[8-10]，與傳統(tǒng)的有機(jī)溶劑相比，離子液體具有綠色環(huán)保、熱穩(wěn)定性好、不揮發(fā)、不易燃燒等特點(diǎn)，被認(rèn)為是代替?zhèn)鹘y(tǒng)有機(jī)溶劑更環(huán)保的溶劑[11]。因此，本研究采用離子液體輔助超聲技術(shù)，以香葉總黃酮提取率為評價指標(biāo)，通過單因素和正交試驗(yàn)優(yōu)化了香葉總黃酮的提取工藝條件，并探索了香葉對DPPH·的清除活性，為香葉的深入開發(fā)提供了試驗(yàn)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1　材料與試劑

香葉，購于亳州康民中藥材批發(fā)行；蘆丁，中國食品藥品檢定研究院(供含量測定用)；溴化-1-丁基-3-甲基咪唑、氯化-1-丁基-3-甲基咪唑、1-丁基-3-甲基咪唑硝酸鹽、1-丁基-3-甲基咪唑硫酸氫鹽、1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽，上海成捷化學(xué)有限公司；纖維素酶，北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司；維生素C，天津市永大化學(xué)試劑有限公司；DPPH·，上海如吉生物科技有限公司；硝酸鋁、氫氧化鈉、亞硝酸鈉、無水乙醇(均為分析純)，天津市永大化學(xué)試劑有限公司；水(重蒸餾水)；其余所用試劑(均為化學(xué)純)。

1.2　儀器與設(shè)備

TU-1950紫外可見分光光度計北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上海亞榮生化儀器廠；W5-100SP恒溫水浴鍋上海申生科技有限公司；FA-3204B電子分析天平上海精密科學(xué)儀器有限公司；SHB-ⅢA型循環(huán)水式真空泵鄭州長城科工貿(mào)有限公司；DHG-9076A電熱鼓風(fēng)干燥器上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；KQ118超聲波清洗器昆山市超聲儀器有限公司。

1.3　試驗(yàn)方法

1.3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

稱取干燥至恒重的蘆丁10 mg，精密稱定，置于50 mL容量瓶中，加入50%乙醇水溶液，超聲使其溶解，定容，搖勻，使之成為每1 mL含0.1856 mg的蘆丁對照品溶液，備用。在7個容量瓶中分別放入蘆丁對照品溶液12.0，10.0，8.0，6.0，4.0，2.0，1.0 mL，于30 ℃水浴條件下，分別加入0.3 mL 的5% NaNO2溶液，輕輕振搖2 min，然后靜置6 min，向每個容量瓶中加入濃度為10%的硝酸鋁溶液0.3 mL，慢慢搖晃2 min，然后靜置6 min，再向每個容量瓶中加入濃度為4%的氫氧化鈉溶液2.0 mL，用50%乙醇定容，搖勻，放置15 min，以相應(yīng)對照品溶液為空白，按照紫外可見分光光度法，于510 nm波長處測吸光度[12]。以濃度C(mg/mL)為橫坐標(biāo)，吸光度值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行直線回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，蘆丁的線性范圍為0.007424～0.08909 mg/mL，回歸方程：A=10.3088C-0.04484，R=0.9993。

1.3.2樣品含量測定

精密吸取香葉提取液適量于25 mL容量瓶中，按1.3.1項下所述方法進(jìn)行測定，以相應(yīng)香葉提取液為空白，在510 nm波長處測吸光度，計算出總黃酮提取率，計算公式如下：

香葉總黃酮提取率(mg/g)=總黃酮的質(zhì)量/香葉藥粉的質(zhì)量。

1.3.3離子液體輔助提取香葉總黃酮的試驗(yàn)

取香葉粗粉適量，放入到燒瓶中，加入適量的提取溶劑及離子液體，超聲波頻率設(shè)定為90 W，在一定的溫度下提取，過濾，然后將濾液定容至容量瓶中，按1.3.2節(jié)方法測定香葉提取液中總黃酮含量，以總黃酮提取率為指標(biāo)，分別考察離子液體種類、離子液體濃度、乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取溫度、料液比、提取時間對總黃酮提取率的影響，并在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，對主要影響因素進(jìn)行正交試驗(yàn)。

2　結(jié)果與分析

2.1　單因素提取試驗(yàn)

2.1.1離子液體種類對總黃酮提取率的影響

取香葉粗粉5份，每份2 g，放入圓底燒瓶中，加入濃度為0.5 mol/L的不同離子液體的50%乙醇水溶液，離子液體分別為溴化-1-丁基-3-甲基咪唑、氯化-1-丁基-3-甲基咪唑、1-丁基-3-甲基咪唑硝酸鹽、1-丁基-3-甲基咪唑硫酸氫鹽、1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽，水浴溫度控制在50 ℃，料液比為1∶20(g/mL)，超聲波頻率為90 W，提取30 min，過濾，濾液用50%乙醇水溶液稀釋至適當(dāng)?shù)娜萘科恐?。按“?biāo)準(zhǔn)曲線的制備”中的方法測定提取液的吸光度值，選擇適宜提取香葉總黃酮的離子液體，試驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1　離子液體種類的選擇Table 1 Selection of ionic liquid species

由表1可知，離子液體為氯化-1-丁基-3-甲基咪唑時，香葉總黃酮的提取率最高，所以使用氯化-1-丁基-3-甲基咪唑進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

2.1.2提取溶劑乙醇體積分?jǐn)?shù)對總黃酮提取率的影響

取香葉粗粉6份，每份2 g，放入圓底燒瓶中，加入濃度為0.5 mol/L的氯化-1-丁基-3-甲基咪唑的乙醇水溶液，乙醇體積分?jǐn)?shù)分別為0，10%，30%，50%，70%，90%，其他操作同2.1.1節(jié)，試驗(yàn)結(jié)果見圖1。

圖1　乙醇體積分?jǐn)?shù)的影響Fig.1 The influence of ethanol volume fraction

由圖1可知，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)小于30%時，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的上升，香葉總黃酮提取率不斷增加的趨勢非常明顯，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)達(dá)到30%時，總黃酮提取率也達(dá)到了最高值56.23 mg/g。當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)高于30%時，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的持續(xù)上升，香葉總黃酮的提取率卻表現(xiàn)出不斷下降的趨勢。因?yàn)楫?dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)達(dá)到30%時，香葉總黃酮的提取率達(dá)到最高值，所以選擇30%乙醇水溶液為后續(xù)試驗(yàn)的提取溶劑。

2.1.3離子液體濃度對總黃酮提取率的影響

取香葉粗粉6份，每份2 g，放入圓底燒瓶中，加入濃度分別為0.05，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 mol/L的氯化-1-丁基-3-甲基咪唑的30%乙醇水溶液，其他操作同2.1.1節(jié)，試驗(yàn)結(jié)果見圖2。

圖2　離子液體濃度的影響Fig.2 The influence of ionic liquid concentration

由圖2可知，當(dāng)氯化-1-丁基-3-甲基咪唑的濃度在0.05～0.3 mol/L范圍內(nèi)時，離子液體的濃度越高，香葉總黃酮的提取率越大，在其濃度提高到0.3 mol/L時，香葉總黃酮的提取率達(dá)到了峰值。而其濃度高于0.3 mol/L時，隨著離子液體濃度的增加，香葉總黃酮提取率略有降低的趨勢。由于離子液體濃度為0.3 mol/L時，香葉總黃酮提取率最大，所以選擇離子液體濃度為0.3 mol/L進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

2.1.4料液比對總黃酮提取率的影響

取香葉粗粉7份，每份2 g，放入圓底燒瓶中，加入濃度為0.3 mol/L的氯化-1-丁基-3-甲基咪唑的30%乙醇水溶液，料液比分別為1∶5，1∶10，1∶20，1∶30，1∶40，1∶50，1∶60，然后按照2.1.1節(jié)中的方法進(jìn)行相關(guān)操作，具體試驗(yàn)結(jié)果見圖3。

圖3　料液比的選擇Fig.3 The choice of solid-liquid ratio

由圖3可知，當(dāng)料液比在1∶5～1∶20范圍內(nèi)時，隨著料液比的升高，香葉總黃酮提取率顯著增加，當(dāng)料液比在1∶20～1∶50范圍內(nèi)時，隨著料液比的升高，香葉總黃酮提取率緩慢增加，當(dāng)料液比持續(xù)升高到1∶50時，總黃酮提取率達(dá)到69.11 mg/g，繼續(xù)增加料液比，總黃酮提取率變化很小。分析原因可能是因?yàn)橄闳~的量固定，料液比太小，提取液粘度較大，不利于香葉總黃酮的溶出，難以保證香葉中總黃酮轉(zhuǎn)移到提取液中，提取不完全，總黃酮提取率較低，在一定程度上增加料液比有利于黃酮類物質(zhì)向提取液轉(zhuǎn)移，從而使總黃酮提取率升高，但料液比過高其他非黃酮類物質(zhì)的溶出也就越大，可能干擾總黃酮的含量測定，從而使香葉總黃酮的提取率表現(xiàn)出稍有降低的現(xiàn)象。所以采用1∶50的料液比進(jìn)行后續(xù)的單因素試驗(yàn)。

2.1.5水浴溫度對總黃酮提取率的影響

取香葉粗粉7份，每份2 g，放入圓底燒瓶中，加入濃度為0.3 mol/L的氯化-1-丁基-3-甲基咪唑的30%乙醇水溶液，料液比為1∶50，設(shè)定水浴提取溫度分別控制在30，40，50，60，70，80 ℃，其他操作同2.1.1節(jié)，試驗(yàn)結(jié)果見圖4。

圖4　提取溫度的選擇Fig.4 The choice of extraction temperature

由圖4可知，隨著水浴溫度的升高，香葉總黃酮提取率逐漸提高，當(dāng)水浴溫度達(dá)到60 ℃時，香葉總黃酮的提取率也增加到了最大值74.87 mg/g，繼續(xù)升高水浴溫度，總黃酮的提取率卻表現(xiàn)出不斷降低的趨勢。可能是因?yàn)殡S著水浴溫度的不斷上升，使提取溶劑的運(yùn)動速度及頻率不斷增大，使之更容易滲透到香葉組織細(xì)胞中，加速黃酮類物質(zhì)的溶出，從而增加總黃酮的提取率。但溫度過高，可能會導(dǎo)致部分黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)被破壞，從而使提取率下降。所以選擇水浴提取溫度60 ℃進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

2.1.6提取時間對總黃酮提取率的影響

取香葉粗粉8份，每份2 g，放入圓底燒瓶中，加入濃度為0.3 mol/L的氯化-1-丁基-3-甲基咪唑的30%乙醇水溶液，料液比為1∶50，水浴溫度控制在60 ℃，然后按照2.1.1節(jié)中方法分別提取0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5，4.0 h，其他處理與2.1.1節(jié)中方法一致，試驗(yàn)結(jié)果見圖5。

圖5　提取時間的選擇Fig.5 The choice of extraction time

由圖5的試驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，隨著提取時間的不斷延長，香葉總黃酮的提取率也隨著時間延長而升高，提取時間3.0 h時可使香葉總黃酮的提取率升高到93.03 mg/g，再延長提取時間，香葉總黃酮的提取率開始逐漸降低。其原因?yàn)檠娱L提取時間可以使香葉中的總黃酮的溶出增加，但如果提取時間過長會使黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)被破壞，從而使提取率下降。所以選擇提取時間為3.0 h進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

2.2　離子液體輔助提取香葉總黃酮的正交試驗(yàn)

2.2.1因素及水平的考察

在上述單因素試驗(yàn)中，料液比達(dá)到1∶50后對香葉總黃酮提取率影響很小，所以在正交試驗(yàn)中將料液比固定為1∶50，選擇氯化-1-丁基-3-甲基咪唑離子液體的濃度、提取溶劑乙醇的體積分?jǐn)?shù)及提取時間和提取溫度作為因素進(jìn)行考察，以香葉總黃酮提取率為考察指標(biāo)，進(jìn)行正交試驗(yàn)，進(jìn)一步優(yōu)化香葉總黃酮的提取工藝。按4因素3水平進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計L9(34)，見表2，在此條件下對香葉總黃酮進(jìn)行提取，按1.3.2節(jié)方法測定提取液的吸光度，計算總黃酮提取率。

表2　正交試驗(yàn)因素水平表Table 2 Factors and levels of orthogonal experiment

2.2.2正交試驗(yàn)結(jié)果

取香葉粗粉9份，每份2 g，放入圓底燒瓶中，按正交試驗(yàn)表進(jìn)行試驗(yàn)，每組試驗(yàn)的料液比為1∶50，結(jié)果見表3。

表3　正交試驗(yàn)設(shè)計及試驗(yàn)結(jié)果Table 3 Orthogonal array design arrangement and the experimental data

正交試驗(yàn)結(jié)果表明：離子液體超聲輔助提取香葉總黃酮各因素的影響大小為：提取時間影響最大，其次是提取溫度，然后為離子液體濃度，影響最小的是提取溶劑的乙醇體積分?jǐn)?shù)，最佳離子液體超聲輔助提取香葉總黃酮的最佳工藝條件為A3B3C2D3，即離子液體為氯化-1-丁基-3-甲基咪唑，離子液體濃度為0.35 mol/L，料液比為1∶50，提取溶劑為40%乙醇水溶液，提取時間為3 h，提取溫度為65 ℃。

2.3　離子液體輔助提取香葉總黃酮的工藝穩(wěn)定性驗(yàn)證試驗(yàn)

取香葉粗粉3份，每份4 g，放入圓底燒瓶中，加入200 mL濃度為0.35 mol/L的氯化-1-丁基-3-甲基咪唑的40%乙醇水溶液，水浴溫度控制在65 ℃，提取時間為3.0 h，其他操作同2.1.1節(jié)。結(jié)果香葉總黃酮提取率分別為109.37，111.77，108.23 mg/g，平均為109.79 mg/g，結(jié)果表明優(yōu)選的香葉總黃酮離子液體超聲輔助提取工藝比較穩(wěn)定。

2.4　香葉總黃酮提取的對比試驗(yàn)

2.4.1離子液體對總黃酮提取率的影響

取香葉粗粉3份，每份4 g，放入圓底燒瓶中，加入200 mL的40%乙醇水溶液，水浴溫度控制在65 ℃，提取時間為3.0 h，其他操作同2.1.1節(jié)。結(jié)果香葉總黃酮提取率分別為80.61，81.54，80.17 mg/g，平均為80.77 mg/g。根據(jù)2.3節(jié)試驗(yàn)結(jié)果可知，離子液體的加入使香葉總黃酮提取率提高了35.93%。

2.4.2酶對總黃酮提取率的影響

取香葉粗粉3份，每份4 g，放入圓底燒瓶中，加入200 mL濃度為0.35 mol/L的氯化-1-丁基-3-甲基咪唑的40%乙醇水溶液，然后再加入纖維素酶0.02 g，水浴溫度控制在65 ℃，提取時間為3.0 h，其他操作同2.1.1節(jié)，提取結(jié)束后在90 ℃水浴中30 s滅酶。結(jié)果香葉總黃酮提取率分別為116.52，117.63，118.31 mg/g，平均為117.49 mg/g。由試驗(yàn)結(jié)果可知，體系中加入了纖維素酶使香葉總黃酮提取率進(jìn)一步提高，可能是因?yàn)槔w維素酶破壞了香葉的細(xì)胞壁，從而使細(xì)胞內(nèi)的香葉總黃酮溶出增加，從而提高了總黃酮提取率。

2.4.3脫脂對總黃酮提取率的影響

取干燥的香葉粉10 g，加入50 mL石油醚回流脫脂2次，每次1 h，過濾，濾渣于60 ℃以下干燥至干，取脫脂后的香葉粗粉3份，每份4 g，放入圓底燒瓶中，然后按2.3節(jié)方法進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果香葉總黃酮提取率分別為114.66，113.95，114.08 mg/g，平均為114.23 mg/g。由試驗(yàn)結(jié)果可知，脫脂后除去了香葉中的葉綠素、胡蘿卜素等脂溶性物質(zhì)，結(jié)果使香葉總黃酮提取率有所提高，但提高幅度低于纖維素酶。

2.5　體外抗氧化性研究

稱取香葉干浸膏適量，用50%乙醇水溶液制備成不同質(zhì)量濃度的一系列樣品溶液。在10個10 mL比色管中分別加入2.0 mL上述一系列樣品溶液，然后再加入濃度為0.2 mmol/L 的DPPH·溶液2.0 mL，混合均勻，在室溫條件下暗處放置30 min，用50%的乙醇水溶液為空白對照，于517 nm波長處測定吸光度A樣品。其他條件不變，用2.0 mL蒸餾水代替測定A樣品中的香葉樣品液，其他操作同上，在517 nm處測定吸光度A空白。在10個10 mL比色管中分別加入2.0 mL上述一系列樣品溶液，然后再加入無水乙醇2.0 mL，混合均勻，其他操作同上，在517 nm處測定吸光度A對照。

稱取維生素C適量，制備成一系列與樣品溶液質(zhì)量濃度相同的對照溶液，按照上述方法同樣操作。通過下式分別計算香葉樣品溶液、維生素C對照溶液對DPPH·的清除率[13]。

DPPH·清除率(%)=[(A空白-A樣品+A對照)/A空白]×100。

圖6　樣品溶液和對照溶液對DPPH·的清除活性Fig.6 The scavenging activity of sample solution and reference solution to DPPH·

由圖6可知，隨著香葉提取物與維生素C溶液質(zhì)量濃度的增加，其對DPPH·的清除率均逐漸升高，二者對DPPH·的清除能力均呈現(xiàn)一定的濃度依賴性，在質(zhì)量濃度小于0.4 mg/mL時香葉提取物的清除能力低于維生素C；當(dāng)質(zhì)量濃度高于0.4 mg/mL時香葉提取物的清除能力與維生素C接近；當(dāng)質(zhì)量濃度為0.5 mg/mL時二者對DPPH·的清除率分別為98.92%，99.07%。香葉提取物對DPPH·的清除率與質(zhì)量濃度的線性回歸方程為Y=2.9413+199.4206X，R=0.9903，香葉提取物對DPPH·的清除率的IC50值為0.2360 mg/mL；而維生素C的質(zhì)量濃度與對DPPH·的清除率的線性回歸方程為Y=21.6433+166.5879X，R=0.9861，其IC50值為0.1702 mg/mL。結(jié)果表明香葉提取物對DPPH·的清除能力弱于陽性對照維生素C，但其清除率與質(zhì)量濃度的線性回歸性強(qiáng)于陽性對照維生素C。

3　結(jié)論

本試驗(yàn)對離子液體超聲輔助提取香葉總黃酮的工藝條件進(jìn)行了探索，并采用單因素及正交試驗(yàn)對其進(jìn)行了優(yōu)化。比較適宜的提取工藝條件為：提取溶劑為40%乙醇，料液比為1∶50，水浴溫度控制在65 ℃，提取時間為3.0 h，最佳離子液體為氯化-1-丁基-3-甲基咪唑，離子液體濃度為0.35 mol/L，超聲波頻率設(shè)定為90 W，在此工藝條件下，香葉總黃酮提取率為109.79 mg/g。本文采用的離子液體超聲輔助提取法，其提取率高，與傳統(tǒng)超聲輔助醇提工藝相比，總黃酮提取率提高了35.93%，說明離子液體超聲輔助提取法是一種高效的提取方法?？赡苁且?yàn)閷㈦x子液體用作溶劑時，超聲的空化效應(yīng)能加速離子液體穿透香葉組織細(xì)胞，促進(jìn)香葉組織內(nèi)的黃酮類物質(zhì)溶出，而且離子液體可能對香葉總黃酮具有一定的增溶作用，同時離子液體可能作為一種轉(zhuǎn)運(yùn)載體將黃酮類物質(zhì)從香葉細(xì)胞內(nèi)運(yùn)出，增大了其溶出率，從而提高了香葉總黃酮提取率。本文進(jìn)一步探索了在提取體系中加入纖維素酶對提取率的影響，試驗(yàn)結(jié)果表明由于纖維素酶破壞了香葉的細(xì)胞壁，從而使細(xì)胞內(nèi)的黃酮類物質(zhì)最大限度地溶出，因此可進(jìn)一步地提高總黃酮提取率，與傳統(tǒng)超聲輔助醇提工藝相比，總黃酮提取率提高了45.46%。體外抗氧化活性的試驗(yàn)結(jié)果表明：香葉提取物對DPPH·具有顯著的清除活性，而且隨著其質(zhì)量濃度的增加，清除活性明顯增強(qiáng)，其IC50值為0.2360 mg/mL。上述試驗(yàn)結(jié)果為香葉在食品、飲料、制藥等領(lǐng)域的應(yīng)用提供了基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)：

[1]蕭正春,張衛(wèi)明,張廣倫,等.燃油植物香葉樹的開發(fā)利用與栽培[J].中國野生植物源,2007,26(6):9-12.

[2]李源棟,李先毅,段焰青,等.GC/MS法結(jié)合保留指數(shù)分析香葉油香味成分[J].食品與機(jī)械,2016,32(8):25-28.

[3]黨璇,張曉珍,姚默,等.香葉天竺葵藥學(xué)研究概況[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,39(31):19095-19096.

[4]王向國.香葉黃酮提取工藝研究[J].科技信息,2010(18):104-105.

[5]俞作仁,王文莉,呂娟濤.刺玫果化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].中草藥,2002,33(2):188-190.

[6]曹緯國,劉志勤,邵云,等.黃酮類化合物藥理作用的研究進(jìn)展[J].西北植物學(xué)報,2003,23(12):2241-2247.

[7]Xiao Yao,Zhang Han-qi.Homogeneous ionic liquid microextraction of the active constituents from fruits ofSchisandrachinensisandSchisandrasphenanthera[J].Analytica Chimica Acta,2012,712(27):78-84.

[8]Cao Xiao-ji,Ye Xue-min,Lu Yan-bin,et al.Ionic liquid-based ultrasonic-assisted extraction of piperine from white pepper [J].Anal Chim Acta,2009,640(1):47-51.

[9]史麗娟,彭勝,鄭陽,等.離子液體超聲波輔助法提取杜仲皮總木脂素的工藝研究[J].應(yīng)用化工,2015,44(12):2250-2254.

[10]陳明明,趙思敏,王毅帆,等.離子液體輔助超聲提取黃柏總生物堿[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報,2015,32(11):859-863.

[11]Xiao Yao,Wang Ying,Gao Shi-qian,et al.Determination of the active constituents inArnebiaeuchroma(Royle) Johnst.by ionic liquid-based ultrasonic-assisted extraction high-performance liquid chromatography[J].Journal of Chromatography B,2011,879(20):1833-1838.

[12]王曉林,鐘方麗,于麗穎,等.微波協(xié)同酶法提取玉竹總黃酮工藝研究[J].中國調(diào)味品,2015,40(5):22-26.

[13]王曉林,王文姣,鐘方麗,等.藿香、葫蘆巴總黃酮的體外抗氧化活性研究[J].中國調(diào)味品,2016,41(9):29-35.