參景固本方對(duì)D -半乳糖致亞急性衰老模型小鼠的抗氧化作用

周麗雅，李 欣，柴晶美，楊阿龍

（長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)春 130117）

衰老是隨年齡增加而導(dǎo)致機(jī)體各組織臟器出現(xiàn)退行性改變的一系列過(guò)程[1]。由于人口老齡化的日漸增長(zhǎng)，關(guān)于抗衰老研究已成為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的熱門課題，因此，尋找有效的抗衰老措施使人類保持健康，延緩衰老具有重要意義。參景固本方以人參、紅景天、山楂等中藥組成，人參大補(bǔ)元?dú)猓a(bǔ)脾益肺，生津，安神益智；紅景天健脾益氣，清肺止咳，活血化瘀；山楂散瘀行氣，消食化積[2]?？v觀全方，補(bǔ)中寓清，可用于增強(qiáng)機(jī)體免疫力，抗氧化，更適用于亞健康人群扶正固本，達(dá)到延緩衰老的目的。本研究采用D -半乳糖誘導(dǎo)致亞急性衰老模型小鼠，觀察其學(xué)習(xí)記憶能力、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)及腦組織中相關(guān)指標(biāo)，進(jìn)一步分析參景固本方抗氧化，延緩衰老的作用機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 SPF級(jí)昆明種小鼠70只，雌雄各半，體質(zhì)量18～22 g（許可證號(hào)SCXK[遼]2015－0001）。參景固本湯組成：人參、紅景天、山楂（由安徽易元堂中藥飲片有限公司提供）。按照常規(guī)煎煮藥材方法制成1 g生藥材/mL的藥液，4 ℃冷藏備用。D -半乳糖（源葉生物）；金匱腎氣丸（北京同仁堂），維生素E（天之海藥業(yè)），MOD、SOD、GSH-Px 試劑盒( 南京建成生物制品研究所)

1.2 方法

1.2.1 分組、造模與給藥 將70只小鼠隨機(jī)分為7組，分別為正常對(duì)照組，模型組，參景固本方低（4 g/kg）、中（8 g/kg）、高劑量組（16 g/kg），金匱腎氣丸組（1.5 g/kg）及維生素E組（40 mg/kg），每組10只，雌雄各半，自由飲食飲水。適應(yīng)性喂養(yǎng)2 d后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)前記錄小鼠初始體質(zhì)量。正常對(duì)照組和模型組灌胃等量生理鹽水，參景固本方組灌胃給藥，1 次/d；同時(shí)除正常對(duì)照組外全部小鼠按125 mg/kg劑量頸背部皮下注射D -半乳糖[3]，正常對(duì)照組以等體積生理鹽水注射，灌胃與注射同時(shí)進(jìn)行，連續(xù)42 d。

1.2.2 水迷宮實(shí)驗(yàn) 利用WMT-200小鼠水迷路實(shí)驗(yàn)箱測(cè)定小鼠在水迷宮中進(jìn)入盲區(qū)的錯(cuò)誤次數(shù)和到達(dá)站臺(tái)所需時(shí)間。實(shí)驗(yàn)前將小鼠放置在臺(tái)上適應(yīng) 15 s，然后將小鼠隨機(jī)從不同區(qū)域放入水迷宮內(nèi)，小鼠游上臺(tái) 3 s后記錄所用時(shí)間，最長(zhǎng)時(shí)間不超過(guò) 2 min（若2 min 內(nèi)未能上臺(tái)，幫助小鼠游上臺(tái)適應(yīng)片刻，再將小鼠放回籠）。如此將小鼠置入游泳池，實(shí)驗(yàn)用時(shí)3 d，每天每只小鼠訓(xùn)練3次，共訓(xùn)練9 次。計(jì)算每組小鼠成功尋臺(tái)時(shí)間和錯(cuò)誤次數(shù)的平均值，以評(píng)價(jià)其空間學(xué)習(xí)記憶能力[4-5]。

1.2.3 小鼠各臟器指標(biāo)的測(cè)定 末次給藥后稱量各小鼠體質(zhì)量。小鼠麻醉后，完整剝離胸腺與脾臟，用生理鹽水沖洗2次后濾紙吸干水分，進(jìn)行稱重。計(jì)算增重率、胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)。

1.2.4 腦組織中MDA、SOD和T-AOC值的測(cè)定 頸椎脫臼處死后迅速取腦組織，用冰冷的生理鹽水沖洗后，取部分腦組織低溫環(huán)境下勻漿取上清液備用。按照試劑盒說(shuō)明書的操作步驟，測(cè)定MDA、SOD及T-AOC值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 19.0進(jìn)行分析，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較進(jìn)行t檢驗(yàn)，多組均數(shù)間比較采用方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 行為學(xué)觀察 連續(xù)給藥5周后正常對(duì)照組小鼠精神狀態(tài)良好，食欲較好，毛色亮白，皮膚有彈性，行動(dòng)敏捷；與正常對(duì)照組比較，模型組則進(jìn)食量減少，毛色比較干枯，毛發(fā)稀疏易脫落，喜靜惡動(dòng)，反應(yīng)遲鈍；參景固本方組小鼠在飲食行動(dòng)，毛發(fā)方面均比模型組較好。

2.2 對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響 見表1。

表1 水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果（ ，n = 10）

表1 水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果（ ，n = 10）

注：與正常對(duì)照組比較，## P＜0.01；與模型組比較，△△P＜0.01；與維生素E組比較，▲P＜0.05

組 別 尋臺(tái)時(shí)間/s 錯(cuò)誤次數(shù)正常對(duì)照組 25.59±18.76 2.60±2.04模型組 54.94±22.31## 2.94±0.99低劑量組 30.68±18.57△△ 2.41±1.06中劑量組 26.05±13.41△△ 2.13±1.14高劑量組 23.07±16.21△△ 1.50±0.85△△▲金匱組 29.76±15.01△△ 1.50±1.08△△▲維生素E組 30.25±18.64△△ 2.50±1.09

2.3 小鼠各臟器指標(biāo)比較 見表2。

2.4 對(duì)腦組織中MDA、SOD及T-AOC值的影響 見表3。

表2 各組小鼠增重率、胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)比較（，n = 10）

表2 各組小鼠增重率、胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)比較（，n = 10）

注：與正常對(duì)照組比較，# P＜0.05；與模型組比較，△ P＜0.05，△△ P＜0.01；與金匱組比較，▲ P＜0.05，▲▲ P＜0.01；與維生素E組比較，☆☆ P＜0.01

組 別 增重率 胸腺指數(shù) 脾臟指數(shù)正常對(duì)照組 0.77±0.16 1.50±0.65 4.33±1.14模型組 0.64±0.11# 1.12±0.22# 3.34±0.27#低劑量組 0.63±0.18△▲▲ 1.15±0.25▲ 4.18±0.64▲中劑量組 0.66±0.13△▲▲ 1.40±0.49 4.56±1.41△高劑量組 0.51±0.10△△▲▲☆☆ 1.78±0.19△△ 4.60±0.47△△金匱組 0.74±0.08 1.69±0.55△△ 5.13±1.17△△維生素E組 0.86±0.14△△ 1.32±0.22 4.45±0.52△

表3 各組小鼠腦中MDA含量、SOD、T-AOC活性比較（，n = 10）

表3 各組小鼠腦中MDA含量、SOD、T-AOC活性比較（，n = 10）

注：與正常對(duì)照組比較，# P＜0.05，## P＜0.01；與模型組比較，△ P＜0.05，△△ P＜0.01

組 別 MDA SOD T-AOC

3 小結(jié)

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在連續(xù)42 d的藥物注射后D -半乳糖致亞急性衰老模型的小鼠會(huì)出現(xiàn)記憶障礙，到達(dá)站臺(tái)所需時(shí)間明顯延長(zhǎng)，出錯(cuò)次數(shù)增多，增重率、胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)明顯低于正常對(duì)照組，同時(shí)腦組織中MDA含量顯著增加，SOD、T-AOC活性明顯減低。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，經(jīng)參景固本方治療后，結(jié)果顯示尋臺(tái)時(shí)間明顯縮短，錯(cuò)誤次數(shù)減少，提示對(duì)記憶減退有一定改善作用。胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的增加表明參景固本方對(duì)衰老小鼠的胸腺，脾臟的萎縮有一定的延緩作用[6-12]。用參景固本方干預(yù)后可提高腦組織中SOD活性及T-AOC含量，進(jìn)而減少M(fèi)DA含量，結(jié)果提示，參景固本方可通過(guò)提高抗氧化酶的活力來(lái)減少脂質(zhì)過(guò)氧化物的生成，從而提升機(jī)體抗氧化、抗衰老的作用[13-16]。

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