豬圓環(huán)病毒2型疫苗臨床免疫效果的評(píng)價(jià)

肖煥星，郭彥輝，王 波，賴慶光

（上海海利生物技術(shù)股份有限公司，上海 201403）

豬圓環(huán)病毒2型(PCV-2)是引起豬圓環(huán)病毒病的首要病原，它主要侵襲豬的免疫系統(tǒng)，干擾和破壞機(jī)體對(duì)抗疾病時(shí)免疫抗體的產(chǎn)生和維持，致使抵抗力下降，從而容易繼發(fā)或并發(fā)其他疾病，可引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）、豬皮炎腎病綜合征（PDNS）、斷奶豬和肥育豬的呼吸道疾病（PRDC）、母豬繁殖障礙（RF）等疾病[1]。豬圓環(huán)病毒2型遍布全球，給世界各國(guó)的養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[2]。目前，豬場(chǎng)普遍采用免疫豬圓環(huán)病毒2型疫苗來(lái)防控豬圓環(huán)病毒病，并取得了令人滿意的效果[3]。盡管圓環(huán)病毒疫苗供應(yīng)商及研發(fā)單位都提供了疫苗免疫評(píng)價(jià)方法（免疫陰性豬后：檢測(cè)血清抗體水平，相對(duì)日增重，圓環(huán)病毒載量，攻毒試驗(yàn)等），但在豬場(chǎng)復(fù)雜的背景條件下，如何來(lái)簡(jiǎn)便、科學(xué)評(píng)價(jià)圓環(huán)疫苗的免疫效果，成為各養(yǎng)殖業(yè)主最為關(guān)心的問(wèn)題。本試驗(yàn)通過(guò)比較豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗免疫組及非免疫組仔豬在10周齡時(shí)的平均增重、14周齡成活率及血清抗體的變化規(guī)律，綜合評(píng)估疫苗的免疫效果，希望能對(duì)豬場(chǎng)在臨床評(píng)價(jià)圓環(huán)疫苗的免疫效果及在選擇適合本場(chǎng)的疫苗時(shí)提供參考。

1　試驗(yàn)方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及分組

試驗(yàn)豬由河北某2000頭種豬場(chǎng)提供，該場(chǎng)未免疫圓環(huán)病毒疫苗但種豬及肥豬血清抗體均為陽(yáng)性。試驗(yàn)隨機(jī)選擇15窩×4頭/窩（14±2 ）日齡的健康仔豬60頭，同窩仔豬隨機(jī)平均分配到試驗(yàn)組及對(duì)照組，每組30頭并做好標(biāo)識(shí)。

1.2 疫苗及檢測(cè)試劑盒

豬圓環(huán)病毒滅活疫苗（商品名：圓畢凈，規(guī)格100 mL/瓶，批號(hào)：20170105）由上海海利生物技術(shù)股份有限公司提供。豬圓環(huán)病毒2型ELISA抗體檢測(cè)試劑盒由韓國(guó)金諾提供。

表1　試驗(yàn)動(dòng)物處理方案

表2　前腔靜脈采血設(shè)計(jì)

表3　各組試驗(yàn)豬2～14周齡成活率

表4　各組試驗(yàn)豬2～10周齡個(gè)體平均增重

圖1　各組不同周齡血清ELISA抗體水平S/P

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物處理及血清樣品采集

試驗(yàn)動(dòng)物按該豬場(chǎng)常規(guī)的管理方式進(jìn)行飼養(yǎng)，按表1進(jìn)行免疫處理、稱重及統(tǒng)計(jì)死亡數(shù)。

試驗(yàn)動(dòng)物血清樣品采集按表2方案執(zhí)行，前腔靜脈采血3～5 mL/頭，將析出的血清轉(zhuǎn)移到1.5 mL離心管備用。

1.4 血清抗體檢測(cè)

將采集的血清樣品按試劑盒公司提供的操作規(guī)程做ELISA 抗體檢測(cè)，抗體水平用S/P值表示。判定標(biāo)準(zhǔn)：樣品S/P值≥0.4判定為陽(yáng)性，樣品S/P值＜0.3判定為陰性。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

增重?cái)?shù)據(jù)、抗體水平用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用SAS軟件進(jìn)行顯著性分析。

2　結(jié)果與分析

2.1 各組死亡率對(duì)比分析

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)試驗(yàn)組的成活率為90.0%高于對(duì)照組的成活率83.3%，盡管差異不顯著（P=0.83，P＞0.05），但在一定程度上仍能表明圓環(huán)病毒2型滅活疫苗的免疫改善了豬場(chǎng)的臨床癥狀，這一點(diǎn)與臨床上豬群的整齊度及健康度提高相吻合。

2.2 各組平均增重對(duì)比分析

從表4可以看出，10周齡試驗(yàn)豬轉(zhuǎn)欄時(shí)的平均增重試驗(yàn)組（22.91 kg）顯著高于對(duì)照組（19.04 kg），表明圓環(huán)病毒2型滅活疫苗免疫豬群能有效抵抗田間野毒的進(jìn)攻，使免疫組的仔豬生長(zhǎng)潛能得以充分發(fā)揮；而對(duì)照組仔豬因受圓環(huán)病毒感染的影響造成生長(zhǎng)緩慢。

2.3 各組血清ELISA抗體變化規(guī)律與分析

通過(guò)圖1我們可以看出，對(duì)照組仔豬母源抗體從2周開始下降，6到8周降到最低，10周齡時(shí)因野毒感染ELISA抗體水平再次上升，并達(dá)到異常高的水平S/P值達(dá)到2.7；試驗(yàn)組仔豬分別于2周、5周齡免疫豬圓環(huán)病毒2型滅活苗后，抗體水平的走勢(shì)較對(duì)照組發(fā)生變化，即：2周齡到6周齡時(shí)母源抗體迅速下降，而自身抗體未完全建立，所以抗體水平呈稍下降的趨勢(shì)，6周齡后伴隨主動(dòng)免疫抗體水平的升高抗體水平逐步上升并維持在2.0左右，呈長(zhǎng)尾的L型。從這種抗體水平的變化趨勢(shì)可以看出疫苗免疫有效阻止了野毒感染過(guò)程。

3　總結(jié)與討論

1）圓環(huán)病毒2型感染豬群后，在不同豬場(chǎng)不同的背景條件下，表現(xiàn)不同的臨床癥狀，對(duì)于臨床癥狀明顯的群體，通過(guò)臨床癥狀的改善（如：成活率、發(fā)病率等），來(lái)評(píng)價(jià)疫苗免疫后的效果是可行的。

2）除了臨床癥狀的改善外，圓環(huán)疫苗的免疫效果會(huì)最終體現(xiàn)在生產(chǎn)成績(jī)的提高方面，所以通過(guò)評(píng)價(jià)生產(chǎn)成績(jī)的表現(xiàn)來(lái)間接評(píng)估疫苗的免疫效果，成為多數(shù)豬場(chǎng)認(rèn)可的方法。

3）因?yàn)樨i場(chǎng)背景復(fù)雜，許多因素及病原都會(huì)造成類似圓環(huán)病毒病的臨床表現(xiàn)，如：高致病性豬藍(lán)耳病、新報(bào)導(dǎo)的圓環(huán)病毒3型[4]，這些因素所導(dǎo)致臨床損失不會(huì)因?yàn)樨i圓環(huán)病毒2型疫苗接種得到改善。因此，特異性的血清學(xué)檢測(cè)是必不可少的，在臨床上使用最多的血清學(xué)檢測(cè)方法是ELISA方法。在使用ELISA方法評(píng)估圓環(huán)疫苗免疫效果時(shí)采樣時(shí)間點(diǎn)至關(guān)重要，建議采集7～8周齡的樣品，因?yàn)榇藭r(shí)母源抗體已降至最低點(diǎn)，而野毒抗體還沒(méi)有起來(lái)，此時(shí)的ELISA抗體水平和疫苗免疫的相關(guān)性最強(qiáng)。

綜上所述，關(guān)于圓環(huán)病毒2型疫苗在臨床上免疫效果的評(píng)估，要結(jié)合臨床癥狀、生產(chǎn)成績(jī)及血清抗體水平進(jìn)行綜合分析。

[1] 呂惠序.豬圓環(huán)病毒2 型的診斷與綜合防制[J].養(yǎng)豬，2014（3）：113-115.

[2] GILLESPIE J， OPRIESSNIG T，MENG XJ， et al. Porcine circovirus type2and porcine circovirusassociated disease[J]. Vet Intern Med，2009，23：1151-1163.

[3] 邢剛，馬濤，邱小伙，等. 商品化豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗臨床免疫效果比較[C].中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第八屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集，2013：406-410.

[4] SHAO-LUN ZHAI， XIA ZHOU，HE ZHANG，et al. Comparative epidemiology of porcine circovirus type3in pigs with different clinical presentations[J]. Virology Journal，(2017)14：222.