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    外泌體參與骨骼肌機(jī)能調(diào)控研究進(jìn)展

    2018-04-14 02:41:24楊東麗蒲紅州張順華
    關(guān)鍵詞:肌管泌體成肌細(xì)胞

    楊東麗,楊 瓊,羅 嘉,譚 婭,4,蒲紅州,張順華*,朱 礪*

    (1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,四川成都 611130;2.成都農(nóng)業(yè)科技職業(yè)學(xué)院,四川成都 6111305;3.四川省南江縣農(nóng)業(yè)局,四川南江 635600;4.貴州省畜牧獸醫(yī)研究所,貴州貴陽(yáng) 550005)

    骨骼肌是動(dòng)物軀體重要的組成部分,也是畜禽生產(chǎn)經(jīng)濟(jì)效益的主要部分,占動(dòng)物體質(zhì)量的40%左右。骨骼肌的生長(zhǎng)發(fā)育與動(dòng)物體健康及產(chǎn)肉動(dòng)物的生產(chǎn)性能有著密切的聯(lián)系。肌纖維發(fā)育過(guò)程首先是中胚層干細(xì)胞分化成為成肌細(xì)胞(myoblast),然后成肌細(xì)胞融合形成肌管(myotube),肌管由多個(gè)細(xì)胞融合形成,因此含有多個(gè)核,并且含有肌原纖維,隨著胚胎肌肉的發(fā)育,肌原纖維在肌管細(xì)胞內(nèi)逐漸增多,最終發(fā)育形成肌纖維和肌肉組織。動(dòng)物骨骼肌肌纖維數(shù)目在胚胎發(fā)育期間基本上就已固定,出生后,由于肌纖維的肥大,肌肉表現(xiàn)出增大增粗。骨骼肌的生長(zhǎng)發(fā)育是一個(gè)非常復(fù)雜的生物學(xué)過(guò)程,受到多種因素的調(diào)控。

    外泌體(exosomes)又稱外泌小體,是一種雙層膜結(jié)構(gòu)的囊性小泡,直徑 30 nm~100 nm,源于細(xì)胞內(nèi)吞系統(tǒng)中的晚期內(nèi)體, 其廣泛存在于各種體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液、精液、乳汁、羊水、腹水、陰道/肺泡灌洗液等[1]。外泌體內(nèi)含豐富的與其來(lái)源細(xì)胞相關(guān)的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、mRNA和miRNA等多種生物成分,可以在細(xì)胞間進(jìn)行物質(zhì)和信息傳遞[2-3]。近年來(lái)的研究表明,外泌體的功能與其來(lái)源細(xì)胞或者環(huán)境的性質(zhì)相關(guān),可以作為一種信息載體對(duì)骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育及疾病狀況起到重要的調(diào)節(jié)作用。本文就外泌體的發(fā)現(xiàn)及作用,外泌體分離與鑒定方法以及外泌體在骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育及相關(guān)疾病中的作用等研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

    1 外泌體的發(fā)現(xiàn)及應(yīng)用

    1.1 外泌體的發(fā)現(xiàn)

    1983年P(guān)an B T等[4]發(fā)現(xiàn)羊未成熟紅細(xì)胞可以分泌囊泡結(jié)構(gòu),1987年Johnstone R M等[5]將其命名為外泌體(exosomes)。外泌體在蔗糖溶液中的密度為1.10 g/mL~1.20 g/mL,直徑為30 nm~100 nm。一直以來(lái)它們?cè)诤艽蟪潭壬媳徽J(rèn)為是細(xì)胞碎片的傳播者和多余的大分子。直到2007年Valadi H等[2]研究發(fā)現(xiàn),外泌體可作為細(xì)胞間基因交流的一種新的機(jī)制,可轉(zhuǎn)移功能性RNA分子,包括mRNA和miRNA。這一發(fā)現(xiàn)激起了人們對(duì)外泌體領(lǐng)域的興趣。外泌體的產(chǎn)生機(jī)制十分復(fù)雜,并且受到多種因子的調(diào)控作用。目前研究者比較認(rèn)同的機(jī)制是:外泌體由細(xì)胞在內(nèi)吞時(shí)形成的多泡體(multivesicular bodies,MVBs)內(nèi)部產(chǎn)生 ,在胞外分泌的過(guò)程中,MVBs包含的腔內(nèi)囊泡(intralumenal vesicles,ILVs) 可以從MVBs的內(nèi)腔釋放到胞外環(huán)境中,這些ILVs就是外泌體[2]。研究表明外泌體存在于各種體液當(dāng)中,包括血液、尿液、乳汁、胸腔積液、唾液、羊水及腹水等幾乎所有體液中,并且外泌體能被多種活細(xì)胞分泌,如間充質(zhì)細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、免疫細(xì)胞、血小板、成肌細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞[6-9]。

    1.2 外泌體的應(yīng)用

    外泌體含有表面分子,當(dāng)其到胞外后能夠有針對(duì)性地到達(dá)受體細(xì)胞,一旦附著至靶細(xì)胞,外泌體可以誘導(dǎo)經(jīng)由受體配體相互作用的信號(hào),或者可以通過(guò)內(nèi)吞作用和/或吞噬作用與靶細(xì)胞膜內(nèi)化,又或與靶細(xì)胞融合將其內(nèi)容物遞送到其細(xì)胞質(zhì)中,由此改變受體細(xì)胞的生理狀態(tài)[10]。大量的研究證實(shí)外泌體在很多生理病理上起著重要的作用,如免疫中抗原遞呈、腫瘤的生長(zhǎng)與遷移、心血管疾病、組織損傷的修復(fù)等[11-12]。因?yàn)椴煌?xì)胞類型分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,所以其可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物,例如Melo S A等[13]發(fā)現(xiàn)細(xì)胞表面蛋白多糖磷脂酰肌醇聚糖-1(glypican 1,GPC1)在胰腺癌個(gè)體血液中,外泌體含量特別豐富,GPC1能夠以100%的準(zhǔn)確率和敏感性診斷出早期和晚期胰腺癌;Alegre E等[14]研究也發(fā)現(xiàn)外泌體中包含有黑色素瘤標(biāo)志基因MIA、S100B及腫瘤標(biāo)志物酪氨酸酶相關(guān)蛋白2(Tyrp2)存在,并證實(shí)了外泌體中的這些標(biāo)記物的潛在臨床應(yīng)用價(jià)值。另外,Ayuko H等[15]研究表明,不同細(xì)胞分泌的外泌體擁有不同的整合素類型,從而靶向不同的器官,影響特定器官轉(zhuǎn)移前微環(huán)境的形成,這一結(jié)果說(shuō)明外泌體的脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),能很好的保護(hù)其包被的物質(zhì),可能成為藥物的天然載體,應(yīng)用于臨床治療。

    2 外泌體的分離與鑒定

    2.1 外泌體的分離

    外泌體的分離純化,常用的方法有差速超速離心法、過(guò)濾離心法、密度梯度離心法等,采用低速離心、高速離心交替進(jìn)行,可分離到大小相近的囊泡顆粒。隨著研究的深入,外泌體的分離方法也越來(lái)越多,免疫磁珠法、色譜法、沉淀試劑盒、差速離心結(jié)合試劑盒、凝膠排阻分離法、膜親和試劑盒等多種手段都可以用來(lái)分離不同來(lái)源外泌體,并通過(guò)它們表面標(biāo)志物和密度特異性進(jìn)一步富集[16]。在以上諸多分離方法中,梯度密度離心法是公認(rèn)的可以得到最高純度的分離方法,但是操作相對(duì)復(fù)雜,使用并不廣泛。然而,就目前的分離方法而言,仍沒(méi)有一種提取方法能同時(shí)保證外泌體的含量、純度以及生物活性,更為關(guān)鍵的是研究者們很難拿到純的外泌體組分,而多是以外泌體為主要組分的胞外微囊泡,所以外泌體分離純化方法和技術(shù)亟待改進(jìn)和完善。

    2.2 外泌體的鑒定

    提取的外泌體的鑒定方式主要是通過(guò)形態(tài)學(xué)、粒子大小以及標(biāo)志蛋白等方式實(shí)現(xiàn)的。目前可以采用原子力顯微鏡(AFM)、透射電子顯微鏡(TEM)、納米顆粒追蹤分析技術(shù)(NTA)等方法檢測(cè)外泌體的形態(tài)大小及分布,外泌體形態(tài)通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形,直徑為30 nm~100 nm[17]。另外,當(dāng)電鏡圖觀測(cè)到的樣品結(jié)構(gòu)不是典型外泌體樣結(jié)構(gòu)時(shí),還需要增加免疫膠體金電鏡進(jìn)行驗(yàn)證[17]。對(duì)于外泌體標(biāo)志蛋白的檢測(cè)可以采用透射電子顯微鏡(TEM)、流式細(xì)胞術(shù)(FMC)、蛋白質(zhì)印跡法(WB)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、質(zhì)譜分析(MS)等對(duì)外泌體特定蛋白質(zhì)包括CD9、CD63、 CD81、MHC、Alix、flotillin、TSG101、HSC70等多種外泌體標(biāo)志蛋白進(jìn)行鑒定[18]。

    3 外泌體與骨骼肌功能調(diào)控

    在外泌體發(fā)現(xiàn)的早期,研究者多把研究重點(diǎn)放在外泌體在腫瘤中發(fā)揮的重要作用。很多研究結(jié)果證實(shí)了多種促進(jìn)腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、黏附分子和細(xì)胞外基質(zhì)蛋白等以外泌體為載體進(jìn)入腫瘤細(xì)胞微環(huán)境,從而在腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移及血管生成等過(guò)程中發(fā)揮重要作用。近年來(lái),隨著對(duì)外泌體研究的深入,已證實(shí)外泌體調(diào)控的細(xì)胞間信息交流過(guò)程也廣泛參與了肌肉的生理及病理過(guò)程,并在肌肉生成、肌肉再生、肌肉萎縮等過(guò)程中起到不可忽視的作用。

    3.1 外泌體與骨骼肌生成

    骨骼肌的生成過(guò)程主要包括成肌細(xì)胞的增殖分化,然后多個(gè)成肌細(xì)胞融合成多核的肌管,最后肌管進(jìn)一步發(fā)育成肌纖維和肌肉。成肌細(xì)胞是指胞漿中含有肌絲的肌組織前體細(xì)胞,具有自我更新和促進(jìn)肌纖維再生的能力,是體外研究骨骼肌發(fā)育調(diào)控機(jī)理的理想載體。2010年Guescini M等[19]第一次發(fā)現(xiàn)成肌細(xì)胞可以分泌外泌體,并且在純化的外泌體中檢測(cè)到多種蛋白質(zhì)及線粒體DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)的存在,進(jìn)一步推測(cè)外泌體可能作為mtDNA的載體將其運(yùn)輸?shù)较噜徎蜻h(yuǎn)處的靶細(xì)胞,在骨骼肌與其他器官和組織之間的信息交流中發(fā)揮作用。Forterre A等[20]對(duì)成肌細(xì)胞外泌體(MB exosomes)和肌管外泌體(MT exosomes)進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析發(fā)現(xiàn),在分化過(guò)程中肌肉分泌的外泌體攜帶不同的蛋白質(zhì)特異性亞群。肌管外泌體與成肌細(xì)胞外泌體相比富含肌肉收縮相關(guān)蛋白,其中包括肌營(yíng)養(yǎng)不良蛋白關(guān)聯(lián)糖蛋白1(dystrophin associated glycoprotein 1,DAG1)、絲蛋白Cγ(filamin C gamma, FLNC)、肌聯(lián)蛋白(titin,TTN)等。用肌管外泌體孵育成肌細(xì)胞發(fā)現(xiàn),其可以抑制成肌細(xì)胞增殖促進(jìn)其分化。為了確定肌管的融合度的增加是否是因?yàn)槌杉〖?xì)胞接收了肌管外泌體的內(nèi)含物,F(xiàn)orterre A等[20]用綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)陽(yáng)性的肌管外泌體與非熒光的成肌細(xì)胞一起孵育。24 h后在成肌細(xì)胞內(nèi)檢測(cè)到GFP綠色熒光,進(jìn)而證實(shí)了肌管外泌體可以向成肌細(xì)胞傳送其內(nèi)含物。進(jìn)一步研究結(jié)果顯示,肌管外泌體可以下調(diào)Cyclin-D1和上調(diào)Myogenin進(jìn)而促進(jìn)肌纖維的分化。隨后Choi J S等[21]的研究發(fā)現(xiàn),骨骼肌細(xì)胞在分化過(guò)程也可以分泌外泌體,并且證實(shí)了其中包含了胰島素樣生長(zhǎng)因子(insulin-like growth factors ,IGFs)、干細(xì)胞生長(zhǎng)因子(hepatocyte growth factor,HGF)、纖維母細(xì)胞生長(zhǎng)因子2(fibroblast growth factor-2,F(xiàn)GF2)和血小板源生長(zhǎng)因子AA(platelet-derived growth factor-AA,PDGF-AA)等與肌肉發(fā)育相關(guān)的肌肉生長(zhǎng)因子,可以使脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞出現(xiàn)成肌化現(xiàn)象。這些數(shù)據(jù)表明外泌體可以通過(guò)釋放其內(nèi)含物參與肌細(xì)胞間通訊。另外,Aswad H等[22]研究發(fā)現(xiàn)在外泌體耗盡的血清中成肌細(xì)胞分化效率降低,這一結(jié)果也表明在肌肉成熟過(guò)程中外泌體的重要作用。

    miRNA是一類由內(nèi)源基因編碼的長(zhǎng)度約為22個(gè)核苷酸的非編碼單鏈RNA分子,它們通過(guò)結(jié)合mRNA進(jìn)而參與基因轉(zhuǎn)錄后表達(dá)調(diào)控。miRNA在肌肉生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中有重要的調(diào)控作用[23]。大量研究表明,多種細(xì)胞類型來(lái)源的外泌體內(nèi)均攜帶多種mRNA、miRNA,lncRNA,它們?cè)谕饷隗w參與細(xì)胞間信息傳遞的作用機(jī)制中起到越來(lái)越重要的作用。根據(jù)ExoCarta( http://www.exocarta.org/)中的統(tǒng)計(jì)[24],已發(fā)現(xiàn)與外泌體相關(guān)的miRNA有764種,有許多被外泌體攜帶的miRNA已被證實(shí)在生物體中發(fā)揮一定的作用。近年來(lái)的研究表明,成肌細(xì)胞可以分泌外泌體并且可以攜帶miRNA在細(xì)胞之間進(jìn)行信息的傳遞。Forterre A等[20]通過(guò)對(duì)肌管和成肌細(xì)胞外泌體包含的miRNA的分析發(fā)現(xiàn),肌肉外泌體中包含有170多種miRNA,其中包括miR-1、miR-133a、miR-133b和miR-206等研究證實(shí),可以調(diào)控肌肉分化的miRNA。為了證明外泌體可以作為miRNA的載體參與肌細(xì)胞間通訊,F(xiàn)orterre A等[20]用在C2C12成肌細(xì)胞中不能正常表達(dá)的秀麗隱桿線蟲miR-238(CaenorhabditiselegansmiR-238,cel-miRNA-238)轉(zhuǎn)染肌管,使其在肌管中表達(dá)。用轉(zhuǎn)染后的肌管外泌體孵育后,在成肌細(xì)胞中檢測(cè)到了cel-miRNA-238,這一結(jié)果表明,肌肉分泌的外泌體可以作為miRNA的載體對(duì)其進(jìn)行物理轉(zhuǎn)移從而參與肌細(xì)胞間通訊。進(jìn)一步試驗(yàn)結(jié)果顯示,在成肌細(xì)胞分化過(guò)程中,肌管外泌體攜帶的miRNA會(huì)使成肌細(xì)胞去乙?;?(Sirtuin 1)表達(dá)下調(diào),進(jìn)而影響成肌細(xì)胞基因的表達(dá)以及其分化。有趣的是同樣以成肌細(xì)胞為模型進(jìn)行試驗(yàn),萎縮的肌管中miR-23a[25]和miR-182[26]胞內(nèi)表達(dá)水平降低,而在其分泌的外泌體中的含量增加。這些試驗(yàn)表明,肌肉分泌的外泌體可以通過(guò)運(yùn)輸miRNA進(jìn)而發(fā)揮其調(diào)控作用。除了骨骼肌細(xì)胞自身分泌外泌體之外,其他細(xì)胞類型來(lái)源的外泌體在肌肉生成中也發(fā)揮作用。間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的外泌體在體外可以促進(jìn)肌肉和血管的的生成[27];乳清蛋白來(lái)源的外泌體可以促進(jìn)肌管中蛋白的合成及其肥大[28];脂肪分泌的外泌體也可以顯著抑制骨骼肌細(xì)胞蛋白激酶B的磷酸化水平[29]。

    3.2 外泌體與骨骼肌再生

    再生醫(yī)學(xué)的策略之一是細(xì)胞療法,用于改善受損組織的功能和其再生能力。雖然以細(xì)胞為基礎(chǔ)的治療在組織修護(hù)方面有明顯的有益效果,但仍存在一些擔(dān)憂,如移植細(xì)胞生存受限和其再生能力減弱,以及免疫介導(dǎo)的排斥反應(yīng)。近年來(lái)因外泌體病理性和其治療效果多樣性,越來(lái)越多的研究表明,外泌體在肌肉損傷中有很大的治療潛能。每種類型的外泌體都有不同的功能,這取決于其來(lái)源細(xì)胞的功能。最近的研究表明多種有分泌能力的細(xì)胞分泌的外泌體都有促進(jìn)組織再生的潛力。例如,干細(xì)胞和祖細(xì)胞分泌的外泌體在各種損傷組織中都有很重要的促進(jìn)修護(hù)和再生的作用,包括腎臟[30]、心肌[31]和肝[32]等。與此同時(shí),外泌體在骨骼肌損傷中的作用也逐漸被揭示出來(lái)。

    骨骼肌損傷之后,炎性細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞會(huì)分泌一些細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子,這些自分泌/旁分泌因子不僅可以為成肌細(xì)胞和衛(wèi)星細(xì)胞的遷移、活化及分化提供有利條件,并且可以平衡肌肉再生和纖維化。研究表明HGF是肌肉干細(xì)胞活化及向受損部位轉(zhuǎn)移的強(qiáng)有力的催化劑[33]。肌肉的修護(hù)對(duì)HGF有劑量的依賴性,并且HGF可以和FGF2、 IGF1、及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)等多種成肌因子協(xié)同作用,與單個(gè)成肌因子作用相比,可以顯著提高骨骼肌的修護(hù)和再生[34]。Choi J S等[21]的研究發(fā)現(xiàn),來(lái)源于分化期骨骼肌細(xì)胞的exosome富含多種成肌因子,其中包括HGF,將其注射到肌肉損傷部位可以顯著減少纖維化面積,增加再生肌纖維的數(shù)量,進(jìn)而促進(jìn)骨骼肌的再生。骨骼肌應(yīng)對(duì)損傷是一個(gè)非常復(fù)雜的過(guò)程,會(huì)涉及到細(xì)胞微環(huán)境和一些有助于肌肉平衡和重塑的因素。Fry C等[35]研究發(fā)現(xiàn)肌肉前體細(xì)胞(muscle precursor cells,MPC)與肌肉成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)使膠原蛋白Col1a2、Col3a1、Col6a2以及纖連蛋白(fibronectin)表達(dá)顯著下調(diào)。敲除MPC肌源性miRNA(myo-miRNA),miR-206,會(huì)使調(diào)節(jié)成纖維細(xì)胞膠原蛋白生物合成的核糖體結(jié)合蛋白1抗體(Rrbp1)及膠原蛋白表達(dá)增加。在體外miR-206在活化的衛(wèi)星細(xì)胞(satellite cells)中高表達(dá)。用Pax7/DTA小鼠模型,在衛(wèi)星細(xì)胞耗盡的情況下機(jī)械過(guò)載處理后miR-206的表達(dá)并未上調(diào)。這和Rrbp1及Col1a2、Col3a1、Col6a2表達(dá)上調(diào)相關(guān)。進(jìn)一步研究表明,MPC釋放的外泌體包含有miR-206,其通過(guò)調(diào)節(jié)Rrbp1進(jìn)而調(diào)節(jié)肌肉成纖維細(xì)胞的膠原蛋白的合成,最終調(diào)節(jié)骨骼肌胞外基質(zhì)的沉積及肌肉組織重塑。這個(gè)發(fā)現(xiàn)給人們提供了一個(gè)新的見(jiàn)解,即:骨骼肌和MPC可以通過(guò)外泌體與其他細(xì)胞類型相互作用,并進(jìn)一步活化調(diào)節(jié)肌肉組織修護(hù)和再生的胞外環(huán)境。有研究表明,除了骨骼肌細(xì)胞自身分泌外泌體之外,其他細(xì)胞類型來(lái)源的外泌體在骨骼肌再生中也具有一定作用。Nakamura Y等[27]的研究就證明了來(lái)源于間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體在骨骼肌再生中的重要作用。間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體在體外可以促進(jìn)肌肉和血管的的生成,在體內(nèi)肌肉受損模型中可以促進(jìn)骨骼肌的再生。盡管間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的外泌體中包含的與肌肉修護(hù)相關(guān)的細(xì)胞因子比較少,但是卻鑒別出了與肌肉修護(hù)相關(guān)microRNA,其中miR-494起到了部分作用。

    3.3 外泌體與肌肉萎縮

    骨骼肌萎縮是多種疾病的并發(fā)癥之一,其機(jī)制是在病理?xiàng)l件下蛋白質(zhì)降解增加與蛋白質(zhì)的合成受阻而使肌肉變得虛弱的現(xiàn)象,骨骼肌萎縮受到多種因素的調(diào)控。近年來(lái),人們發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)降解增加與肌肉環(huán)狀指基因1(MuRf1)和肌肉萎縮盒F基因(MAFbx,atrogin-1)的表達(dá)增加相關(guān)。越來(lái)越多的研究表明骨骼肌疾病與多種因素有關(guān),隨著人們對(duì)外泌體各方面研究的深入,其在骨骼肌疾病中發(fā)揮的作用逐漸受到重視。

    有研究表明腫瘤分泌的微泡可以誘導(dǎo)骨骼肌細(xì)胞的凋亡,因?yàn)檫@種微泡攜帶的miR-21可以通過(guò)小鼠成肌細(xì)胞的toll樣受體7(TLR7)進(jìn)行信息傳遞,進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞的凋亡[36]。叉形頭轉(zhuǎn)錄因子3(forkhead box O3,F(xiàn)OXO3a)可以提高泛素蛋白酶和自噬溶酶體蛋白水解系統(tǒng)成分的表達(dá),在肌肉萎縮中有重要作用。Hudson M B等[26]研究證實(shí),miR-182可靶向作用于FOXO3a,可使包括atrogin-1在內(nèi)的多種FOXO3a靶基因表達(dá)受阻。并且發(fā)現(xiàn),在糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)肌管萎縮情況下,肌管分泌的外泌體中miR-182的豐度顯著增加。隨后Hudson M B等[25]同樣以成肌細(xì)胞為細(xì)胞模型,研究發(fā)現(xiàn)肌管萎縮條件下,miR-23a可以以外泌體為載體,運(yùn)輸?shù)桨?,降低其胞?nèi)水平,進(jìn)而使其對(duì)靶基因MuRf1和atrogin-1的抑制作用減弱,進(jìn)而導(dǎo)致肌肉萎縮。這些試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了在肌肉萎縮的情況下,外泌體對(duì)miRNA的裝載是一個(gè)具有選擇性并且高度監(jiān)管的過(guò)程,通過(guò)這個(gè)機(jī)制肌肉細(xì)胞可以很快的減少一些特殊的胞內(nèi)miRNA的水平。miR-29a在組織纖維化中起到不可忽視的作用,研究表明,其在缺血預(yù)處理(remote ischemic conditioning,RIC)組織的邊緣或者RIC處理之后肌肉分泌的外泌體中高表達(dá),即使是在分化的成肌細(xì)胞分泌的外泌體中,缺氧處理也會(huì)使得miR-29a的表達(dá)顯著升高[37]。Hu Z等[38]的研究表明,年齡引起的肌肉衰老是因?yàn)樵谶@個(gè)過(guò)程中miR-29被wnt-3a活化,從而使得p85α, IGF-1 and B-myb等信號(hào)蛋白的表達(dá)受到抑制,進(jìn)而祖細(xì)胞(MPCs)增殖受阻,從而促進(jìn)肌肉萎縮。在慢性腎臟病(chronic kidney disease,CDK)中,肌肉萎縮是一個(gè)嚴(yán)重的并發(fā)癥,因?yàn)樗蟠笤黾影l(fā)病率和病死率。Hu Z等[38]證實(shí)了CDK抑制miR-29在肌肉中的表達(dá),進(jìn)一步使得轉(zhuǎn)錄因子YY-1高表達(dá),最終使肌肉的生成受阻。但miR-29是否能夠通過(guò)外泌體或者是微泡傳遞進(jìn)而對(duì)肌肉萎縮產(chǎn)生影響還有待進(jìn)一步的研究。

    4 結(jié)語(yǔ)

    外泌體的發(fā)現(xiàn)為人們提供進(jìn)一步了解骨骼肌以及骨骼肌與其他器官之間的細(xì)胞間通訊的新視角。外泌體以及以外泌體為運(yùn)輸載體的microRNA可以調(diào)節(jié)肌肉的發(fā)展、再生及疾病。然而到目前為止,對(duì)外泌體復(fù)雜的生物學(xué)功能了解有限,準(zhǔn)確、高效而標(biāo)準(zhǔn)化的純化方法對(duì)于外泌體的后續(xù)研究至關(guān)重要。人們期待著有關(guān)外泌體的生物學(xué)研究能夠提供更豐富、更準(zhǔn)確的信息, 為進(jìn)一步充分了解外泌體調(diào)節(jié)肌肉發(fā)育機(jī)制提供重要的理論導(dǎo)向,并應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)中去。

    [1] Chevillet J R,Kang Q,Ruf I K,et al.Quantitative and stoichiometric analysis of the microRNA content of exosomes[J].Proceed Nat Acad Sci U S A,2014,111(41):14888-14893.

    [2] Valadi H,Ekstr?m K,Bossios A,et al.Exosome-mediated transfer of mRNAs and microRNAs is a novel mechanism of genetic exchange between cells[J].Nature Cell Biol,2007,9(6):654-659.

    [3] Zomer A,Maynard C,Verweij F J,et al.Invivoimaging reveals extracellular vesicle-mediated phenocopying of metastatic behavior[J].Cell,2015,161(5):1046-1057.

    [4] Pan B T,Johnstone R M.Fate of the transferrin receptor during maturation of sheep reticulocytesinvitro:selective externalization of the receptor[J].Cell,1983,33(3):967-978.

    [5] Johnstone R M,Adam M,Hammond J R,et al.Vesicle formation during reticulocyte maturation.Association of plasma membrane activities with released vesicles (exosomes) [J].J Biol Chem,1987,262(19):9412-9420.

    [6] Alnedawi K,Szemraj J,Cierniewski C S.Mast cell-derived exosomes activate endothelial cells to secrete plasminogen activator inhibitor type 1[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol,2005, 25(8):1744-1749.

    [7] Buschow S I,van Balkom B W,Aalberts M,et al.MHC class II-associated proteins in B-cell exosomes and potential functional implications for exosome biogenesis[J].Immunol Cell Biol,2010,88(8):851-856.

    [8] Yu X,Huang C,Song B,et al.CD4+CD25+regulatory T cells-derived exosomes prolonged kidney allograft survival in a rat model[J].Cell Immunol,2013,285(2):62-68.

    [9] Romancino D P,Paterniti G,Campos Y,et al.Identification and characterization of the nano‐sized vesicles released by muscle cells[J].Febs Lett,2013,587(9):1379-1384.

    [10] Tkach M,Théry C.Communication by extracellular vesicles:Where we are and where we need to go[J].Cell,2016,164(6):1226-1232.

    [11] N?slund T I,Gehrmann U,Qazi K R,et al.Dendritic cell-derived exosomes need to activate both T and B cells to induce antitumor immunity[J].J Immunol,2013,190(6):2712-2719.

    [12] Rani S,Ritter T.The exosome A naturally secreted nanoparticle and its application to wound healing[J].Adv Mater,2016,28(27):5542-5552.

    [13] Melo S A,Luecke L B,Kahlert C,et al.Glypican-1 identifies cancer exosomes and detects early pancreatic cancer[J].Nature,2015,523(7559):177-182.

    [14] Alegre E,Zubiri L,Perez-Gracia J L,et al.Circulating melanoma exosomes as diagnostic and prognosis biomarkers[J].Clin Chim Acta,2016,454(67):28-32.

    [15] Ayuko H,Bruno C S,Shen T L,et al.Tumour exosome integrins determine organotropic metastasis[J].Nature,2016,527(7578):329-335.

    [16] Paolini L,Zendrini A,Noto G D,et al.Residual matrix from different separation techniques impacts exosome biological activity[J].Sci Rep,2016,6(3):235-240.

    [17] Théry C,Amigorena S,Raposo G,et al.Isolation and characterization of exosomes from cell culture supernatants and biological fluids[J].Curr Protoc Cell Biol,2006,3(3):322-329.

    [18] Kowal J,Arras G,Colombo M,et al.Proteomic comparison defines novel markers to characterize heterogeneous populations of extracellular vesicle subtypes[J].Proceed Nat Acad Sci U S A,2016,113(8):968-977.

    [19] Guescini M,Guidolin D,Vallorani L,et al.C2C12 myoblasts release micro-vesicles containing mtDNA and proteins involved in signal transduction[J].Exp Cell Res,2010,316(12):1977-1984.

    [20] Forterre A,Jalabert A,Berger E,et al.Correction:Proteomic analysis of C2C12 myoblast and myotube exosome-like vesicles:A new paradigm for myoblast-myotube cross talk?[J].PLoS One,2014,9(1):84153-84157.

    [21] Choi J S,Yoon H I,Lee K S,et al.Exosomes from differentiating human skeletal muscle cells trigger myogenesis of stem cells and provide biochemical cues for skeletal muscle regeneration[J].J Control Relea Offi J Control Relea Soc,2016,222(2):107-113.

    [22] Aswad H,Jalabert A.Depleting extracellular vesicles from fetal bovine serum alters proliferation and differentiation of skeletal muscle cells in vitro[J].BMC Biotechnol,2016,16(1):32-38.

    [23] Goljanek W K,Sweetman D,Münsterberg A E.microRNAs in skeletal muscle differentiation and disease[J].Clin Sci,2012,123(11):611-625.

    [24] Mathivanan S,Fahner C J,Reid G E,et al.ExoCarta 2012:database of exosomal proteins,RNA and lipids[J].Nucl Acid Res,2012,40(3):1241-1244.

    [25] Hudson M B,Woodworth M E,Zheng B,et al.miR-23a is decreased during muscle atrophy by a mechanism that includes calcineurin signaling and exosome-mediated export[J].Am J Physiol Cell Physiol,2014,306(6):551-558.

    [26] Hudson M B,Rahnert J A,Zheng B,et al.miR-182 attenuates atrophy-related gene expression by targeting FoxO3 in skeletal muscle[J].Ajp Cell Physiol,2014,307(4):314-318.

    [27] Nakamura Y,Miyaki S,Ishitobi H,et al.Mesenchymal-stem-cell-derived exosomes accelerate skeletal muscle regeneration[J].Febs Lett,2015,589(11):1257-1265.

    [28] Mobley C B,Mumford P W,Mccarthy J J,et al.Whey protein-derived exosomes increase protein synthesis and hypertrophy in C2-C12 myotubes[J].J Dairy Sci,2017,100(1):48-64.

    [29] Park S,Zheng D,Barberio M,et al.Adipose-derived exosomes from severely obese individuals regulate skeletal muscle metabolism[J].FASEB J,2016,30(1):1232-1245.

    [30] Dorronsoro A,Robbins P D.Regenerating the injured kidney with human umbilical cord mesenchymal stem cell-derived exosomes[J].Stem Cell Res Ther,2013,4(2):1-3.

    [31] Ong S G,Wu J C.Exosomes as potential alternatives to stem cell therapy in mediating cardiac regeneration[J].Circulat Res,2015,117(1):7-9.

    [32] Tan C Y,Lai R C,Wong W,et al.Mesenchymal stem cell-derived exosomes promote hepatic regeneration in drug-induced liver injury models[J].Stem Cell Res Ther,2014,5(3):1-14.

    [33] Turner N J,Badylak S F.Regeneration of skeletal muscle[J].Cell Tissue Res,2012,347(3):759-764.

    [34] Braun T,Gautel M.Transcriptional mechanisms regulating skeletal muscle differentiation, growth and homeostasis[J].Nat Rev Mol Cell Biol,2011,12(6):349-361.

    [35] Fry C,Kirby T,Kosmac K,et al.Myogenic progenitor cells control extracellular matrix production by fibroblasts during skeletal muscle hypertrophy[J].Cell Stem Cell,2016,20(1):56-61.

    [36] He W A,Calore F,Londhe P,et al.Microvesicles containing miRNAs promote muscle cell death in cancer cachexia via TLR7[J].Proceed Nat Acad Sci U S A,2014,111(12):4525-4529.

    [37] Yamaguchi T,Izumi Y,Nakamura Y,et al.Repeated remote ischemic conditioning attenuates left ventricular remodeling via exosome-mediated intercellular communication on chronic heart failure after myocardial infarction[J].Int J Cardiol,2015,178(1):239-246.

    [38] Hu Z,Klein J D,Mitch W E,et al.MicroRNA-29 induces cellular senescence in aging muscle through multiple signaling pathways[J].Aging,2014,6(3):160-175.

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