糞便隱血及腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢驗在診斷結(jié)直腸癌中的臨床價值

黃廣武

（欽北區(qū)人民醫(yī)院，廣西 欽州 535000）

結(jié)直腸癌是臨床上較為常見的惡性腫瘤之一。近年來，我國結(jié)直腸癌的發(fā)病率呈逐漸上升的趨勢。董愛萍[1]的研究表明，對結(jié)直腸癌患者的病情進(jìn)行早期診斷和治療，對提高其治療效果和改善其預(yù)后具有重要意義。目前，影像學(xué)檢查、直腸指檢、糞便隱血檢驗、結(jié)腸鏡檢查和糞便腫瘤標(biāo)志物檢驗等均是臨床上診斷結(jié)直腸癌的常用方法。有研究表明，使用糞便隱血及腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢驗對結(jié)直腸癌患者的病情進(jìn)行診斷，可有效地提高其診斷的準(zhǔn)確率。為了進(jìn)一步證實此研究結(jié)果的有效性，筆者對欽北區(qū)人民醫(yī)院收治的100例結(jié)直腸癌患者的臨床檢驗資料進(jìn)行回顧性研究?，F(xiàn)報告如下。

1　資料與方法

1.1　一般資料

本次研究的對象為2015年12月至2016年12月期間欽北區(qū)人民醫(yī)院收治的100例結(jié)直腸癌患者。在這100例患者中，有男性患者60例，女性患者40例；其年齡為25～70歲，平均年齡為（47.59±2.14）歲。

1.2　研究方法

對這100例患者分別進(jìn)行糞便隱血檢驗、腫瘤標(biāo)志物檢驗、糞便隱血及糞便腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢驗、病理活檢。具體的方法是：1）對患者進(jìn)行糞便隱血檢驗。⑴使用便隱血膠體金檢測紙嚴(yán)格按照說明書上的流程對患者進(jìn)行糞便隱血檢驗。⑵為每位結(jié)直腸癌患者采集2份糞便標(biāo)本進(jìn)行檢驗。⑶陽性結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)是：①同一患者同一份糞便標(biāo)本的2次檢驗結(jié)果均呈陽性，即可判定其最終的檢驗結(jié)果為陽性。②同一患者同一份糞便標(biāo)本的2次檢驗結(jié)果不一致，即可判定其最終的檢驗結(jié)果為陽性。③同一個患者的2份糞便標(biāo)本的2次檢驗結(jié)果均呈陽性，即可判定其最終的檢驗結(jié)果為陽性。④同一個患者的2份糞便標(biāo)本的2次檢驗結(jié)果不一致，即可判定其最終的檢驗結(jié)果為陽性。2）對患者進(jìn)行糞便P53及APC檢驗。⑴提取糞便標(biāo)本中的DNA。①將0.5 g的糞便加入抽提液中，在抽提液的總體積達(dá)到2ml后充分搖晃，再以每分鐘10 000 r的轉(zhuǎn)速對糞便標(biāo)本與抽提液的混合物進(jìn)行5min的離心處理，然后轉(zhuǎn)移上清液。②將糞便抽提液置入到沉淀物中加至2ml后充分搖勻，將其置于37℃下過夜。第二天以每分鐘10 000 r的轉(zhuǎn)速對混合液進(jìn)行15min的離心處理，然后轉(zhuǎn)移上清液。③將等體積的平衡酚加入到沉淀物中充分搖勻，再以每分鐘10 000 r的轉(zhuǎn)速對其進(jìn)行10min的離心處理。用上述方法重復(fù)抽提3次，然后轉(zhuǎn)移上清液。④將積氯仿-異戊醇按照24：1的比例加入到經(jīng)酚處理后的沉淀物中充分搖勻，再以每分鐘10 000 r的轉(zhuǎn)速對其進(jìn)行10min的離心處理，然后轉(zhuǎn)移上清液[2]。⑤將1/10體積的HAC-NaAC緩沖液及過量酒精加入到經(jīng)積氯仿-異戊醇處理后的沉淀物中，其濃度為3mol/L，pH值為5.2。將上述混合液置于30℃下2個小時，再以每分鐘12 000 r的轉(zhuǎn)速對其進(jìn)行15min的離心處理，然后去除上清液。⑥用預(yù)冷酒精（濃度為70%）對沉淀物進(jìn)行2次沖洗，自然晾干后加入DDH2O進(jìn)行溶解，再以每分鐘12 000 r的轉(zhuǎn)速對其進(jìn)行20min的離心處理，然后去除沉淀物。⑦采用瓊脂糖電泳法對上清液中的DNA進(jìn)行驗證，然后將其置于零下20℃的溫度下備用。⑵進(jìn)行APC基因突變檢驗。將APC基因中的兩個外顯子分別設(shè)計兩對引物（由上海生工生物工程公司生產(chǎn)），進(jìn)行PCR擴(kuò)展，將擴(kuò)展的條件設(shè)為56℃30 s、94℃40 s、72℃40 s，循環(huán)60次，將72℃的延展設(shè)為10分鐘。PCR產(chǎn)物通過濃度為8%的非聚丙烯酰胺凝膠電泳法顯現(xiàn)觀察結(jié)果。⑶進(jìn)行P53基因突變檢驗。將P53基因中的第5～8外顯子設(shè)為引物，然后對PCR進(jìn)行擴(kuò)展，將擴(kuò)展的條件設(shè)為72℃60 s、55℃60 s、94℃40 s，PCR產(chǎn)物通過濃度為8%的非聚丙烯酰胺凝膠電泳后，采用銀然顯現(xiàn)法觀察結(jié)果。3）糞便隱血及糞便腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢驗。對患者的糞便隱血、糞便腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢驗的結(jié)果進(jìn)行綜合分析，然后確定其檢驗結(jié)果。4）對患者進(jìn)行病理活檢。

1.3　觀察指標(biāo)

將病理活檢的結(jié)果作為最終的診斷結(jié)果，比較使用糞便隱血檢驗、糞便腫瘤標(biāo)志物檢驗和糞便隱血及糞便腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢驗對結(jié)直腸癌患者的病情進(jìn)行診斷的準(zhǔn)確率。

1.4　統(tǒng)計學(xué)處理

將本次研究中的數(shù)據(jù)錄入到SPSS20.0軟件中進(jìn)行處理，計量資料用（±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料用%表示，采用X2檢驗。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

進(jìn)行病理活檢的結(jié)果是：這100例患者均患有結(jié)直腸癌。進(jìn)行糞便隱血檢驗的結(jié)果是：在這100例患者中，有30例患者的檢驗結(jié)果呈陽性，對其病情進(jìn)行診斷的準(zhǔn)確率為30%。進(jìn)行糞便腫瘤標(biāo)志物檢驗的結(jié)果是：在這100例患者中，有50例患者的檢驗結(jié)果呈陽性，對其病情進(jìn)行診斷的準(zhǔn)確率為50%。進(jìn)行糞便隱血及糞便腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢驗的結(jié)果是：在這100例患者中，有95例患者的檢驗結(jié)果呈陽性，對其病情進(jìn)行診斷的準(zhǔn)確率為95%。與單獨進(jìn)行糞便隱血檢驗或糞便腫瘤標(biāo)志物檢驗的結(jié)果相比，使用糞便隱血檢驗及糞便腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢驗對患者的病情進(jìn)行診斷的準(zhǔn)確率更高（P＜0.05）。詳見表1～表3。

表1　對這100例患者進(jìn)行糞便隱血檢驗的結(jié)果

表2　對這100例患者進(jìn)行糞便腫瘤標(biāo)志物檢驗的結(jié)果

表3　對這100例患者進(jìn)行糞便隱血檢驗及糞便腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢驗的結(jié)果

3　討論

對結(jié)直腸癌患者的病情進(jìn)行早期診斷，可明顯提高其治療的效果，改善其預(yù)后，降低其死亡率[3]。影像學(xué)檢查、實驗室生化學(xué)檢驗和病理學(xué)檢查均是臨床上診斷結(jié)直腸癌的常用方法。糞便檢測是一種無創(chuàng)檢查方法。糞便隱血檢驗主要是通過生化學(xué)檢測法對患者的糞便進(jìn)行檢驗，其原理是對患者糞便中所含過氧化物酶的活性成分進(jìn)行檢驗，如血紅蛋白中的亞鐵血紅素會催化糞便中的過氧化氫釋放新生態(tài)氧使其底物氧化顯色等。但是，對結(jié)直腸癌患者單純進(jìn)行糞便隱血檢驗，無法明確其出血的位置。喬寶軍等[4]的研究表明，腫瘤標(biāo)志物作為臨床上敏感性及特異性均較高的檢驗指標(biāo)，可為腫瘤患者的臨床診斷和治療提供準(zhǔn)確可靠的參考依據(jù)。糞便腫瘤標(biāo)志物檢驗是臨床上應(yīng)用較為廣泛的檢驗方法之一。與進(jìn)行糞便隱血檢驗相比，在對結(jié)直腸癌患者進(jìn)行糞便腫瘤標(biāo)志物檢驗時其病情的檢出率較高。臨床上常用的糞便腫瘤標(biāo)志物有CA242、CA2199、CA125、CA153、CEA、TSGF等。其中CEA是在結(jié)腸粘膜組織中分離所得，是臨床上診斷結(jié)直腸癌的常用輔助檢驗指標(biāo)，此項指標(biāo)的靈敏度及特異性均較差，易發(fā)生漏診。TSGF是一種分子量不大的可溶性多肽類，是臨床上常用的特異性腫瘤標(biāo)志物之一。TSGF主要由惡性腫瘤細(xì)胞所分泌，在惡性腫瘤形成和生長時，腫瘤及腫瘤周圍的毛細(xì)血管會大量地增殖腫瘤因子，導(dǎo)致TSGF被釋放。但是，對結(jié)直腸癌患者進(jìn)行單一的糞便腫瘤標(biāo)志物檢驗，其臨床檢出率并不高，易發(fā)生漏診。因此，臨床上應(yīng)將糞便隱血檢驗與糞便腫瘤標(biāo)志物檢驗兩者聯(lián)合起來，從而提高對結(jié)直腸癌患者的病情進(jìn)行診斷的準(zhǔn)確率。本次研究的結(jié)果顯示，與單獨進(jìn)行糞便隱血檢驗或糞便腫瘤標(biāo)志物檢驗的結(jié)果相比，使用糞便隱血檢驗及糞便腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢驗對患者的病情進(jìn)行診斷的準(zhǔn)確率更高。進(jìn)行糞便隱血及腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢驗可作為診斷結(jié)直腸癌的主要方法。

[1]董愛萍.聯(lián)合檢驗糞便及腫瘤標(biāo)志物在結(jié)直腸癌診治中的價值觀察[J].中國急救醫(yī)學(xué),2015,35(z2)：160-161.

[2]姚宏偉,姚響蕓,孫濤，等.腹腔鏡結(jié)直腸癌根治性切除聯(lián)合同期腹腔鏡或開腹肝大部切除術(shù)治療同時性結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的療效分析[J].中華消化外科雜志,2016,15(2)：128-134.

[3]陳文琪,李小琴,張曉梅，等.羧基張力蛋白在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[J].中華消化外科雜志,2016,15(8)：809-814.

[4]喬寶軍,李世榮,武子濤，等.納米葉酸磁珠靶向檢測技術(shù)在老年結(jié)直腸癌患者早期診斷中的應(yīng)用[J].中國老年學(xué)雜志,2016,36(5)：1134-1136.