乙型肝炎病毒表面抗原低水平陽性與乙肝病毒核酸載量的相關(guān)性

楊正南

(江蘇省南京鼓樓醫(yī)院集團(tuán)儀征醫(yī)院， 江蘇 儀征 211900)

乙型病毒性肝炎(viral hepatitis type B)又叫乙肝，是臨床上常見的傳染性疾病。此病是由乙肝病毒(HBV)感染引起的。目前，我國的乙肝病毒攜帶者約占全世界乙肝病毒攜帶者的47.24 %。乙肝表面抗原 (HBsAg)是乙肝病毒的外殼，本身不具有傳染性，只具有抗原性。因此，當(dāng)患者的HBsAg呈陽性或低水平陽性時(shí)，則表明其可能感染了乙肝病毒。但是，不同的實(shí)驗(yàn)室對(duì)HBsAg低水平陽性的檢測(cè)結(jié)果存在較大差異，這就有可能造成不同的診斷結(jié)果[1]。而對(duì)HBsAg是否呈低水平陽性的判斷，直接關(guān)系到患者的診斷結(jié)果和后續(xù)治療。因此，臨床上積極研究對(duì)HBsAg低水平陽性樣本進(jìn)行有效確認(rèn)的方法，對(duì)降低乙型病毒性肝炎的誤診率具有十分重要的意義。基于此，筆者對(duì)2014年6月至2016年5月期間江蘇省南京鼓樓醫(yī)院集團(tuán)儀征醫(yī)院收治的80例疑似HBsAg低水平陽性患者進(jìn)行了以下研究。

1　資料與方法

1.1　一般資料

本次研究的對(duì)象為2014年6月至2016年5月期間江蘇省南京鼓樓醫(yī)院集團(tuán)儀征醫(yī)院收治的80例疑似HBsAg低水平陽性患者。在這80例患中，有男性患者58例，女性患者22例，其年齡為18～70歲，平均年齡為（35.25±4.64）歲。此項(xiàng)研究已得到該院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，且患者均自愿參與本次研究，并簽署了參與本次研究的知情同意書。

1.2　方法

1.2.1進(jìn)行血清HBsAg檢測(cè)的方法 1）在檢測(cè)當(dāng)日的清晨，抽取本組患者5ml的空腹靜脈血。2）將血樣放置1 h后，對(duì)血樣進(jìn)行10min左右的離心處理（處理速度為3000 r/min），并分離出血清。3）采用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法對(duì)這些患者的血清樣本進(jìn)行HBsAg檢測(cè)。在檢測(cè)期間，檢驗(yàn)人員須嚴(yán)格按照乙型肝炎表面抗原定量試劑盒（產(chǎn)品批號(hào)：20170317）的操作規(guī)程進(jìn)行相關(guān)操作。使用的儀器為Autolumo A200 型全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光測(cè)定儀，試劑盒與儀器均來自鄭州安圖生物工程股份有限公司。在檢驗(yàn)人員完成相關(guān)操作后，儀器可自動(dòng)完成檢測(cè)并判斷監(jiān)測(cè)結(jié)果，當(dāng)患者血清HBsAg的結(jié)果＞0.05 IU/mL時(shí)，即可判斷其血清HBsAg呈陽性。

1.2.2進(jìn)行血清HBV-DNA載量檢測(cè) 1）對(duì)經(jīng)使用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測(cè)出血清HBsAg呈低水平陽性的血液標(biāo)本進(jìn)行編號(hào)，并留取標(biāo)本中HBV-DNA的成分，以做為進(jìn)行血清HBV-DNA載量檢測(cè)之用。2）采用PCR-熒光探針法對(duì)帶有編號(hào)的血液標(biāo)本進(jìn)行HBV-DNA載量檢測(cè)。在檢測(cè)期間，檢驗(yàn)人員須嚴(yán)格按照乙型肝炎病毒核酸定量試劑盒上熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)的說明書進(jìn)行相關(guān)操作。使用的儀器為美國ABI 7000 型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，HBV-DNA呈陽性的判斷標(biāo)準(zhǔn)為[2]：每毫升核酸拷貝數(shù)（Copies/ml）＞500。

1.3　統(tǒng)計(jì)學(xué)方法[3]

將本次研究中的數(shù)據(jù)錄入到SPSS 22.0軟件中進(jìn)行處理，計(jì)量資料用（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用%表示，采用X2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

采用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法對(duì)這80例患者進(jìn)行HBsAg檢測(cè)的結(jié)果顯示，在這80例患者中，僅有23例患者的HBsAg呈低水平陽性（占28.75 %）。然后，再采用PCR-熒光探針法對(duì)上述23例患者進(jìn)行HBV-DNA載量檢測(cè)。結(jié)果顯示，在這23例患者中，只有15例患者的血清中含有HBV-DNA（占65.22 %），其HBV-DNA的平均核酸載量值為7.306。

3　討論

在臨床上，采用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法對(duì)患者進(jìn)行HBsAg檢測(cè)，并得出COI（乙肝表面抗原定量）的水平在1.00～50.00之間，即可認(rèn)定其HBsAg呈弱陽性。雖然采用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測(cè)HBsAg結(jié)合了機(jī)體的抗體、抗原免疫反應(yīng)與發(fā)光原理，具有檢測(cè)的速度快、敏感度高、線性范圍寬、試劑貯存期較長、操作簡單等操作優(yōu)勢(shì)，但一旦遇到HBsAg的檢測(cè)表現(xiàn)在弱陽性灰區(qū)時(shí)，就不能準(zhǔn)確地判斷患者是否感染了乙肝病毒?；颊咴诟腥玖艘腋尾《局螅纬刹《镜耐暾w粒需要由病毒蛋白和核酸共同進(jìn)行編碼復(fù)制，而在HBV 編碼的5個(gè)開放閱讀框架中，HBsAg的編碼區(qū)位于第3個(gè)閱讀框架，HBsAg只是HBV-DNA的外殼蛋白，而其中是否含有HBV，并不能確定[4]。當(dāng)HBV感染人體后，還存在一段時(shí)間的“窗口期”，即當(dāng)人體感染HBV后，其機(jī)體的免疫功能會(huì)產(chǎn)生免疫反應(yīng)，消滅HBV，但不能產(chǎn)生HBsAb (乙型肝炎表面抗體)。而HBsAb一般在患者感染急性乙肝病毒的后期或者HBsAg 消失一段時(shí)間后才會(huì)出現(xiàn)，但在這個(gè)“窗口期”內(nèi)HBsAg和HBsAb 都無法被檢出。即使PCR實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)技術(shù)可以準(zhǔn)確、及時(shí)的診斷感染性疾病，但依然無法突破“窗口期”這個(gè)病毒復(fù)制與人體免疫機(jī)制的難題。

HBsAg 的出現(xiàn)常伴隨HBV的存在 , 因此 HBsAg 是已感染 HBV 的標(biāo)志。通常情況下，HBsAg存在于HBV感染患者的血液、唾液、乳汁、汗液、精液、陰道分泌物及其他分泌物中。一般在感染乙肝病毒2～6個(gè)月后，到其谷丙轉(zhuǎn)氨酶合成量升高前的2～8 周這段期間內(nèi)，可在患者的血清中檢測(cè)出 HBsAg呈陽性。如果此時(shí)患者的HBsAg呈現(xiàn)出低水平陽性，則可使用PCR實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)儀來進(jìn)一步檢測(cè)其體內(nèi)HBV-DNA的具體含量[5]。PCR實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)技術(shù)可以直接測(cè)定病毒核酸載量，它有效地融合了光化學(xué)技術(shù)、基因擴(kuò)增與分子雜交機(jī)理，檢測(cè)的靈敏度較高，可以充分實(shí)現(xiàn)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物的自動(dòng)分析，并反映出HBV的實(shí)際感染狀態(tài)。在本次研究中，筆者通過分析HBsAg 低水平陽性與HBV-DNA載量之間的關(guān)系可以準(zhǔn)確診斷出HBsAg低水平陽性的HBV感染患者的感染情況，為醫(yī)生的臨床診斷提供有效、可靠的數(shù)據(jù)支撐，從而避免在無法準(zhǔn)確診斷的情況下，使乙型肝炎病毒通過輸血、器官移植等途徑傳播感染。

相關(guān)的臨床研究結(jié)果表明，當(dāng)患者HBsAg呈現(xiàn)低水平陽性，且其HBV-DNA載量的均值＜500時(shí)，即可表明其體內(nèi)存在HBV的外殼，但不存在HBV-DNA，故不具有病毒的復(fù)制性和傳染性；但是，當(dāng)患者HBsAg呈現(xiàn)弱陽性或者陽性，且其HBV-DNA載量的均值＞500時(shí)，即可診斷其已經(jīng)感染了HBV，其體內(nèi)存在完整的HBV, 且具有病毒的復(fù)制性和傳染性[6]。本次研究的結(jié)果顯示，采用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法對(duì)這80例患者進(jìn)行HBsAg檢測(cè)的結(jié)果顯示，在這80例患者中，僅有23例患者的HBsAg呈低水平陽性（占28.75 %）。然后，再采用PCR-熒光探針法對(duì)上述23例患者進(jìn)行HBV-DNA載量檢測(cè)。結(jié)果顯示，在這23例患者中，只有15例患者的血清中含有HBV-DNA（占65.22 %），其HBV-DNA的平均核酸載量值為7.306。這說明，通過磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測(cè)出的HBsAg低水平陽性患者，其體內(nèi)不一定含有乙肝病毒，只能表明他們體內(nèi)含有乙肝病毒的蛋白外殼或者呈現(xiàn)假陽性，也有可能其正處于乙肝潛伏期或慢性乙肝發(fā)展期，而蛋白外殼中是否含有乙肝病毒核酸，則需要進(jìn)一步結(jié)合PCR-熒光探針法進(jìn)行檢測(cè)診斷。

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[4]黃勁松,張軍霞,劉世國,等.乙型肝炎病毒表面抗原低水平陽性血清的病毒核酸載量分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2014,23(06)：782-783.

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