2017年魯北地區(qū)豬流行性腹瀉流行病學(xué)調(diào)查與防控措施

于新友，李天芝，王金良

（1.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600；2.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600）

豬流行性腹瀉（porcine epidemic diarrhea,PED）是由豬流行性腹瀉病毒（porcine epidemic diarrhea viruse,PEDV）引起的一種高度接觸性腸道傳染病[1]。臨床表現(xiàn)以嘔吐、水樣腹瀉、脫水為特征[2]。一年四季均可發(fā)病，冬、春季節(jié)多發(fā)[3]。各日齡豬均可感染，哺乳仔豬受到的危害最為嚴(yán)重，尤其是頭胎母豬所產(chǎn)7日齡內(nèi)仔豬死亡率可達(dá)100%[4]。成年豬發(fā)病較輕，但可長期隱性帶毒，康復(fù)豬可持續(xù)排毒1～2個月。PED發(fā)病急，傳播速度快，短時(shí)間內(nèi)豬場可反復(fù)發(fā)病。PEDV主要通過消化道和呼吸道傳播[5]。PEDV有囊膜，對外界環(huán)境抵抗力弱，陽光照射6小時(shí)可殺滅病毒[6]，70℃熱水處理10 min可殺滅病毒。1971年，英格蘭首次暴發(fā)PED[7]，1978年，比利時(shí)學(xué)者成功分離了PEDV，隨后匈牙利、德國、荷蘭、瑞士、法國等均有相關(guān)報(bào)道[8]。我國于1976年有PED發(fā)病的相關(guān)報(bào)道[9]，并于1982年實(shí)現(xiàn)了PEDV在腸組織原代單層細(xì)胞上傳代培養(yǎng)[10]。自2010年底PED在我國大規(guī)模暴發(fā)[11]，一直未得到有效控制，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失。

為了解山東省魯北地區(qū)PED的流行情況，進(jìn)一步補(bǔ)充和豐富該地區(qū)PED流行病學(xué)資料，從而為該地區(qū)更好地開展PED的防控工作提供參考。筆者于2017年1—12月，從魯北地區(qū)9個縣不同豬場采集的249份病料樣品，應(yīng)用熒光PCR檢測試劑盒檢測，并統(tǒng)計(jì)檢測結(jié)果，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 病料

2017年1—12月從山東魯北地區(qū)不同豬場無菌采集疑似PEDV感染的豬腸道及內(nèi)容物等作病料。共從魯北地區(qū)9個縣36個豬場采集249份病料。

1.2 試劑盒

豬流行性腹瀉、傳染性胃腸炎、輪狀病毒病三重?zé)晒釶CR檢測試劑盒和豬圓環(huán)病毒病熒光PCR檢測試劑盒均由山東綠都生物科技有限公司動物疫病檢測事業(yè)部研制。AxyPrep體液病毒DNA/RNA小量提取試劑盒購自愛思進(jìn)生物技術(shù)（杭州）有限公司。

1.3 核酸制備

無菌采集的2～3 g疑似PED病豬病料樣品，按1∶5比例加入滅菌生理鹽水，研磨后，反復(fù)凍融3次，12 000 r/min離心5 min，取上清液，按照AxyPrep體液病毒DNA/RNA小量試劑盒說明書提取病毒核酸樣品。

1.4 病料樣品初步檢測

按試劑盒說明書對制備的核酸進(jìn)行檢測，統(tǒng)計(jì)PED檢測結(jié)果及與其它3種病原的混合感染情況。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 疑似病料檢測結(jié)果

如表1所示，共從山東魯北地區(qū)9個縣采集249份病料，共檢測到PED陽性病料108份，總的平均陽性率為43.4%。其中4個縣PEDV陽性率高于平均水平，按從高到低的順序排列分別是利津縣（63.4%）、博興縣（47.8%）、沾化縣（45.8%）、臨邑縣（43.8%）。PEDV在豬場發(fā)病豬中以單一感染為主，但也有與TGEV、RV、PCV2等其它病原混感的情況，其中PEDV單一感染數(shù)占陽性樣品總數(shù)的85.2%（92/108），二重感染以PEDV和RV混感為主，占陽性樣品總數(shù)的5.6%（6/108），三重感染僅檢測到PEDV、PCV2和TGEV混合感染，占陽性樣品總數(shù)的2.8%（3/108），未檢測到四重感染的現(xiàn)象。

表1 疑似豬流行性腹瀉病例臨床樣品檢測結(jié)果 份

2.2 不同季節(jié)豬場PEDV檢測結(jié)果

如表2所示，不同季節(jié)均有PED發(fā)病，山東魯北地區(qū)108份PED陽性病料中，檢測的病料數(shù)最多且陽性率最高的季節(jié)是冬季，陽性率為54.3%（63/116）。夏、秋季檢測的PED疑似樣品量較少，陽性率相對低，分別為 23.8%（10/42）和 32.5%（13/40）。

表2 不同季節(jié)豬場PEDV檢測結(jié)果

3 討論

2017年1—12月份，哈獸維科市場部檢測實(shí)驗(yàn)室共收到來自全國24個省市325個規(guī)模豬場的病料樣品進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示，PEDV陽性率為40.94%（174/425），TGEV 陽性率為 0.26%（1/386），RV 陽性率為 5.60%（20/357），PCV2 陽性率為 27.84%（233/837），PEDV與PCV2存在一定程度的混合感染。何啟蓋等2016年1—7月共檢測來自全國不同省份的133家豬場腹瀉樣品1 195份，結(jié)果顯示，PEDV陽性樣品數(shù)為558份，陽性率為46.7%，TGEV陽性樣品數(shù)為21份，陽性率為1.8%，RV陽性樣品數(shù)為31份，陽性率為2.6%。2017年北京中科基因技術(shù)有限公司對河南、湖南、四川等全國主要養(yǎng)殖地區(qū)送檢的病料樣品進(jìn)行病原檢測，結(jié)果顯示，PEDV的陽性率為 20.49%（126/615），TGEV 的陽性率為 5.43%（15/276），RV 的陽性率為 8.89%（12/135）。

對PED目前尚無有效的治療方法，只能預(yù)防。平時(shí)要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，飼喂全價(jià)配合飼料，豬料槽內(nèi)飼料要少喂勤添，防止豬采食霉變飼料，補(bǔ)充足量的維生素、微量元素。減少豬群飼養(yǎng)密度，降低外界環(huán)境對豬群應(yīng)激。哺乳母豬每餐在加料時(shí)按照水料比1∶3往料槽里放水，每餐吃完后再放水，提高飲水量。飲水器安裝位置要高于背部10～15 cm，與地面成30～45°傾斜，水溫15～20℃。豬舍控制適宜溫度，一般懷孕舍16℃，待產(chǎn)舍20℃，分娩舍24℃，大環(huán)境溫度不得超過26℃，哺乳仔豬小環(huán)境通過電熱板或地暖、紅外線燈及保溫箱來控制，第1周約34～35℃，第2周約30～31℃，第3周約26～27℃。豬舍保持干燥，開展滅蚊、蠅、飛鳥等工作，豬舍禁止養(yǎng)犬。及時(shí)清理豬舍糞便，選用70℃以上熱水沖洗。堅(jiān)持自繁自養(yǎng)，全進(jìn)全出的飼養(yǎng)模式，減少引種，需要引種時(shí)，至少隔離觀察1個月，并檢測，確定健康不帶毒者方能混入大群飼養(yǎng)。加強(qiáng)后備母豬馴化，合格后，方混入大群飼養(yǎng)。消毒劑可選用3%火堿水、1%福爾馬林、4%無水碳酸鈉、季銨鹽類消毒劑和0.2%～0.5%過氧乙酸消毒，用生石灰給豬舍消毒時(shí)，先在豬舍地面噴灑適量的水，然后把生石灰均勻地撒在豬圈每個角落上，與水反應(yīng)生成氫氧化鈣，對多種病原均具有殺滅作用，也可配成10%～20%的溶液對畜禽飼養(yǎng)場的地板或墻壁進(jìn)行消毒。干粉消毒劑對發(fā)生PED的養(yǎng)豬場效果好[12]，即能消毒，又能保持豬舍干燥，并吸附氨氣、硫化氫等有害氣體，消毒無死角，減少環(huán)境中病原量，無毒，無害，可帶豬消毒，每周至少消毒1次。豬舍門口設(shè)消毒池，外來人員車輛一律禁止進(jìn)入廠區(qū)，進(jìn)入廠區(qū)時(shí)車輛、人員消毒，換衣物，有條件的話最好淋浴。人流和車流分開，最好單向流動。由專業(yè)科研機(jī)構(gòu)對后備母豬返飼馴化，返飼時(shí)一定要確保所用病料無CSFV、PRV、PCV2等其它病原，并且PEDV含量要足夠。設(shè)賣豬臺，并遠(yuǎn)離生產(chǎn)區(qū)。飼養(yǎng)人員禁止串舍，出入做好消毒。母豬上產(chǎn)床前一定要全身擦拭消毒，設(shè)初產(chǎn)母豬專用的產(chǎn)床，腹瀉母豬堅(jiān)決不允許其上產(chǎn)床。哺乳時(shí)母豬奶頭擠掉少許初乳，用0.1%高錳酸鉀或0.5%聚維酮碘擦拭消毒后，再讓仔豬吃奶。初生仔豬吃飽初乳。

疫苗接種也是防控PED的重要措施，目前市場上有17個廠家生產(chǎn)的4種PED疫苗可供選擇，PED滅活疫苗有豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗和豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗（WH-1株+AJ1102株）；可供選擇的活疫苗有豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗（HB08株+ZJ08株）和豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉、輪狀病毒（G5型）三聯(lián)活疫苗（弱毒華毒株+弱毒CV777株+NX株）。2018年1月23號豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗（WH-1R株+AJ1102-R株）取得生產(chǎn)批準(zhǔn)文號，目前尚未有產(chǎn)品上市。2017年12月27號豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗（SCJY-1株+SCSZ-1株）獲得新獸藥證書，還未取得生產(chǎn)批號。已經(jīng)獲得新獸藥臨床試驗(yàn)審批的有豬流行性腹瀉滅活疫苗（XJ-DB2株），豬流行性腹瀉滅活疫苗（KB-4clone13株），豬流行性腹瀉滅活疫苗（CHYJ株），豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗（HY株+HZ株），豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉耐熱保護(hù)劑二聯(lián)活疫苗（SCJY-1株+SCSZ-1株），豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗（SD/L株+LW/L株）。滅活疫苗不能刺激機(jī)體產(chǎn)生黏膜免疫抗體，單獨(dú)免疫效果不理想，當(dāng)用病料返飼后或免疫弱毒活疫苗后，再免疫滅活疫苗效果較好。

豬場發(fā)病后，首先緊急接種疫苗，1周齡內(nèi)仔豬可淘汰；1周齡以上仔豬，母豬緊急后海穴接種2頭份滅活疫苗，并肌肉接種1頭份滅活疫苗，仔豬后海穴接種2頭份滅活疫苗，并口服1頭份活疫苗?？诜a(bǔ)液鹽（氯化鈉3.5 g、氯化鉀1.5 g、碳酸氫鈉2.5 g、葡萄糖20 g），加溫水至1 000 mL，提供充足干凈溫水供豬飲用，加強(qiáng)保溫。1周齡以上仔豬可提前斷奶并找健康母豬寄養(yǎng)或用母豬初乳替代品飼養(yǎng)。飼養(yǎng)員不能踏上產(chǎn)床，對體況好的育成豬也可以采取饑餓治療方法。病死豬焚燒或深埋處理，豬舍可用干粉消毒劑消毒，病豬用干粉消毒劑涂抹全身，并在母豬躺臥區(qū)和仔豬休息區(qū)投撒干粉消毒劑。飼養(yǎng)管理人員嚴(yán)禁串舍。病豬飼料中添加泰萬菌素、氟苯尼考、黃芪多糖等，防止PED引起豬免疫抑制而導(dǎo)致病毒病或細(xì)菌病繼發(fā)感染的發(fā)生。

豬場發(fā)生腹瀉后原有的常規(guī)免疫程序無法執(zhí)行，豬體質(zhì)變?nèi)?，容易繼發(fā)一些其它疾病，如豬藍(lán)耳病、豬圓環(huán)病毒病、豬大腸桿菌病等。因此，豬場發(fā)生腹瀉時(shí)要分清主要病原。筆者從魯北地區(qū)的9個縣采集249份病料樣品，對病料中的PEDV進(jìn)行擴(kuò)增檢測，結(jié)果顯示，PEDV總平均陽性率為43.4%，以單一感染為主，且與TGEV、RV和PCV2存在不同程度的混合感染。PED全年可發(fā)病，寒冷的冬、春季節(jié)為高發(fā)期。由于條件所限并未對PEDV與PRRSV等其它病原的混感情況進(jìn)行檢測統(tǒng)計(jì)，下一步我們將進(jìn)行全面統(tǒng)計(jì)和調(diào)查，以獲得更多數(shù)據(jù)。國內(nèi)科研工作者應(yīng)加快新流行毒株的分離，篩選免疫原性好的毒株，研制疫苗。因目前所用PED疫苗均為二聯(lián)苗或三聯(lián)苗，流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果豬病毒性腹瀉主要是PED，TGE和輪狀病毒病的發(fā)病率較低，故可研制PEDV單苗，以提高病毒含量，提高疫苗免疫效果，更好地預(yù)防PED的發(fā)生。

[1]李天芝，于新友，梅建國，等.豬流行性腹瀉病毒分子生物學(xué)檢測方法研究進(jìn)展[J].養(yǎng)豬，2016（5）：81-84.

[2]蘇運(yùn)芳，孫彥剛，劉運(yùn)超，等.豬流行性腹瀉疫苗研究進(jìn)展[J].畜牧與獸醫(yī)，2016，48（2）：134-138.

[3]覃力巾，慕家明.豬流行性腹瀉的診療與防治[J].鄉(xiāng)村科技，2016（21）：21.

[4]王爽，朱慶賀，陳曦，等.豬流行性腹瀉診斷、疫苗和治療的研究進(jìn)展[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2016（19）：79-82.

[5]殷震，劉景華.動物病毒學(xué) [M].第2版.北京：科學(xué)出版社，1997：681-690.

[6]徐仲凱，徐新昌.我國豬病毒性腹瀉病的流行現(xiàn)狀與防控措施[J].中國動物保健，2014，16（5）：44-46.

[7]王隆柏，王晨燕，陳秋勇，等.豬流行性腹瀉的診治及其2015—2016 年在福建省的流行情況[J].養(yǎng)豬，2017（4）：126-128.

[8]胡鴻惠，南文金，龔中貴，等.豬流行性腹瀉弱毒疫苗研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，44（26）：69-72.

[9]孫杰龍，熊喜華，湯海林，等.規(guī)模豬場預(yù)防和控制豬流行性腹瀉的經(jīng)驗(yàn)[J].豬業(yè)科學(xué)，2017，34（3）：79-80.

[10]宣華，邢德坤，王殿瀛，等.應(yīng)用豬胎腸單層細(xì)胞培養(yǎng)豬流行性腹瀉病毒的研究[J].獸醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，1984（3）：202-208.

[11]劉孟洲，王玉安，包高良，等.一起因飼喂污染飼料引發(fā)豬流行性腹瀉傳播的典型案例[J].養(yǎng)豬，2017（4）：111-112.

[12]韋富耀，何旭梅.干粉消毒劑在仔豬腹瀉中的應(yīng)用效果[J].北京農(nóng)業(yè)，2013（21）：81.