結(jié)直腸癌患者脾多肽聯(lián)合FOLFOX4方案治療效果觀察

陳愛霞，杜杏坤，吳春曉，王梅青，薛思思

(1河北省中醫(yī)院,石家莊056006；2滄州醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校)

結(jié)直腸癌是一種常見的胃腸道惡性腫瘤[1]。臨床FOLFOX4化療方案是目前治療結(jié)直腸癌的最有效方案，但化療對(duì)機(jī)體有較大的毒性作用，尤其是對(duì)患者免疫系統(tǒng)有顯著影響。研究表明，化療聯(lián)合脾多肽注射液可保護(hù)患者細(xì)胞免疫功能，并促進(jìn)其恢復(fù)[2]。脾多肽注射液是一種免疫調(diào)節(jié)藥物，可有效改變免疫功能紊亂，促進(jìn)T淋巴細(xì)胞逐漸成熟，觸發(fā)并增強(qiáng)機(jī)體的抗感染能力。微小RNA(miRNA)是近年來發(fā)現(xiàn)的一類內(nèi)源性、進(jìn)化上高度保守的非編碼單鏈小RNA，與胚胎發(fā)育、細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞分化增殖與凋亡等生命進(jìn)程緊密相關(guān)。目前，人體內(nèi)的內(nèi)源性非編碼miRNA會(huì)調(diào)節(jié)人體內(nèi)約30%的基因表達(dá)，與腫瘤發(fā)展密切相關(guān)[3]。miR-21、miR-103、miR-200b均是miRNA家族成員，臨床實(shí)踐證明，它們作為腫瘤特異性標(biāo)志物，會(huì)通過干擾基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯等方式參與腫瘤的發(fā)展過程，在結(jié)直腸癌中表達(dá)異常[4]。目前，有關(guān)脾多肽注射液聯(lián)合FOLFOX4化療對(duì)結(jié)直腸癌患者血清miR-21、miR-103、miR-200b影響的研究較少。2014年1月～2016年12月，我們觀察了結(jié)直腸癌患者脾多肽注射聯(lián)合FOLFOX4方案化療的治療效果。現(xiàn)報(bào)告如下。

1　資料與方法

1.1臨床資料選取2014年1月～2016年12月河北省中醫(yī)院收治的120例結(jié)直腸癌患者，男66例、女52例，年齡25～73(44.3±7.2)歲。結(jié)腸癌62例，直腸癌58例；TNM分期：Ⅱ期30例，Ⅲ期52例，Ⅳ期38例。采用隨機(jī)數(shù)字表法將患者分為觀察組與對(duì)照組各60例。兩組年齡、病理類型、病理分期等一般資料具有可比性(P均>0.05)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者均符合結(jié)直腸癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；②預(yù)期生存時(shí)間不低于6個(gè)月；③KPS評(píng)分均超過70分。排除標(biāo)準(zhǔn)：①心臟、肝、腎等重要臟器功能出現(xiàn)嚴(yán)重不全者；②處于妊娠、哺乳期孕婦；③接受其他免疫治療或化療者；④血常規(guī)出現(xiàn)異常者；⑤難以配合者。本研究經(jīng)河北省中醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。入選者均知情同意并簽訂知情同意書。

1.2治療方法對(duì)照組采取FOLFOX4方案進(jìn)行全身化療。第1天：以劑量為85 mg/m2的奧沙利鉑(深圳海王藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H20031048)進(jìn)行靜滴，時(shí)間2 h。第1～2天，以劑量為200 mg/m2的亞葉酸鈣(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H20000584)進(jìn)行靜滴，時(shí)間2 h，并以400 mg/m2的氟尿嘧啶(沈陽藥大藥業(yè)有限責(zé)任公司，國藥準(zhǔn)字H21021858)進(jìn)行靜脈推注，再以600 mg/m25-氟尿嘧啶持續(xù)微量化療泵滴注22 h結(jié)束本次療程，間隔2周后再次進(jìn)行化療，連續(xù)3個(gè)月。觀察組在對(duì)照組基礎(chǔ)上聯(lián)合脾多肽注射液進(jìn)行全身化療，將0.9%氯化鈉注射液250 mL、脾多肽注射液(吉林豐生制藥有限公司，每支2 mL)6 mL進(jìn)行靜滴，1次/d，連續(xù)10 d，14 d為1個(gè)周期，連續(xù)3個(gè)月。化療前與化療3個(gè)月后檢查血常規(guī)1次，每2周進(jìn)行X射線鋇餐攝片1次，定期進(jìn)行心臟、肝、腎等重要臟器功能檢查，注意患者的用藥反應(yīng)，出現(xiàn)不良反應(yīng)時(shí)采取相應(yīng)治療措施。

1.3觀察指標(biāo)①臨床療效:化療結(jié)束3個(gè)月后，依據(jù)RECIST指南[6]對(duì)患者療效進(jìn)行評(píng)價(jià),分為完全緩解、部分緩解、穩(wěn)定和進(jìn)展。有效率=(完全緩解+部分緩解)例數(shù)/患者總例數(shù)×100%。②免疫功能:患者在治療前與治療后3個(gè)月抽取外周靜脈血，以流式細(xì)胞儀(美國BD公司)檢測淋巴細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+)和NK細(xì)胞百分比。③血清miR-21、miR-103、miR-200b水平:于治療前與治療后3個(gè)月采集清晨空腹外周靜脈血，體積約10 mL。靜置30 min，2 000 r/min離心，時(shí)間15 min，放入Ependoff管，按照說明書步驟提取總RNA，miRNA-21(正向引物：5′-GAA ATG CCTCAC AGC TAT CGT-3，反向引物：5′-CCT CCACAA AGA GCC ACC-3′)擴(kuò)增條件：95 ℃ 10 min，95 ℃15 s，60 ℃1 min，40個(gè)循環(huán))；miRNA-103(設(shè)計(jì)莖環(huán)序列為5′-ACACTCCAGCTGGGAGCAGCATTGTACAG -3′)擴(kuò)增條件：95 ℃ 10 min；95 ℃15 s，60 ℃1 min，40個(gè)循環(huán))；miRNA-200b(正向引物：5′-UAAUACUGCCUGGUAAUGAUGA-3′，反向引物5′-AUCAUUACCAGGCAGUAUAAAU-3′)擴(kuò)增條件：95 ℃10 min，94 ℃30 s，56 ℃20 s，70 ℃15 s，38個(gè)循環(huán)，內(nèi)參選擇U6。每個(gè)獨(dú)立樣本重復(fù)3次，采用2-ΔΔCt法計(jì)算目的基因相對(duì)表達(dá)量。④不良反應(yīng)：比較兩組不良反應(yīng)(骨髓抑制、神經(jīng)毒性、肝功能損傷、惡心嘔吐、口腔黏膜炎)發(fā)生情況。

2　結(jié)果

2.1兩組療效比較觀察組完全緩解4例，部分緩解28例，穩(wěn)定20例，進(jìn)展8例，有效率為53.3%(32/60)，對(duì)照組分別為0、20、28、12例，33.3%(20/60)，兩組有效率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.887，P<0.05)。

2.2兩組治療前后免疫功能比較見表1。

表1　兩組患者治療前后免疫功能比較

注：與同組治療前相比，*P<0.05；與對(duì)照組治療后相比，△P<0.05。

2.3兩組治療前后血清miR-21、miR-103、miR-200b水平比較見表2。

表2　兩組治療前后血清miR-21、miR-103、miR-200b水平比較

注：與同組治療前相比，*P<0.05；與對(duì)照組治療后相比，△P<0.05。

2.4兩組不良反應(yīng)比較觀察組出現(xiàn)骨髓抑制2例(3.3%)，神經(jīng)毒性22例(36.7%)，肝功能損傷2例(3.3%)，惡心嘔吐44例(73.3%)，口腔黏膜炎0例，對(duì)照組分別為5(8.3%)、24(40.0%)、4(6.6%)、48(80.0%)、3例(5.0%)，兩組骨髓抑制發(fā)生率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=36.936，P<0.05)，其他不良反應(yīng)發(fā)生率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)兩組不良反應(yīng)對(duì)癥處理后，患者均可耐受，未影響化療。

3　討論

近年來，結(jié)直腸癌的發(fā)生率及病死率明顯升高，大部分患者治療主要以化療為主。FOLFOX4方案是目前臨床最常用的化療方案之一，包括奧沙利鉑、亞葉酸鈣與5-氟尿嘧啶三種化療藥物。奧沙利鉑將DNA作為靶點(diǎn)，鉑原子可與DNA鏈進(jìn)行互相交聯(lián)，阻礙DNA復(fù)制及轉(zhuǎn)錄[7]。奧沙利鉑與順鉑并無交叉耐藥性，與5-氟尿嘧啶聯(lián)用后療效良好。與傳統(tǒng)單用化療藥物相比，該方案可顯著延長患者無癥狀生存時(shí)間。有研究報(bào)道，化療在殺傷腫瘤細(xì)胞時(shí)，人體內(nèi)還會(huì)形成不良反應(yīng)，將會(huì)明顯抑制細(xì)胞免疫功能，還可能引起消化道反應(yīng)、肝腎功能損傷[8]。

脾多肽是從正常、健康小牛的脾臟內(nèi)提取制成，可調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能，促進(jìn)T淋巴細(xì)胞成熟，提高免疫功能，促進(jìn)NK細(xì)胞的細(xì)胞毒活性，調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞功能。本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，觀察組治療有效率高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且觀察組化療前后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK等免疫功能指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而對(duì)照組化療后免疫功能指標(biāo)均低于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明脾多肽與FOLFOX4方案聯(lián)合治療能一定程度改善患者免疫功能，提高結(jié)直腸癌近期療效，阻止病情進(jìn)展，與劉曉玲等[9]關(guān)于大腸癌的研究結(jié)果相似。腫瘤患者由于腫瘤消耗、手術(shù)化療、精神壓力等原因，免疫功能常處于較低水平，而患者的免疫功能與腫瘤發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。脾多肽對(duì)患者免疫功能有顯著改善作用，能有效糾正免疫系統(tǒng)紊亂，促進(jìn)T細(xì)胞成熟，加強(qiáng)對(duì)感染的抵抗能力。同時(shí)，脾多肽還能阻礙細(xì)胞糖酵解，切斷腫瘤的能量來源，使腫瘤細(xì)胞的生長發(fā)生停滯，停留于G0～G1期，從而加強(qiáng)化療的臨床效果。

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，人們對(duì)miRNA的研究逐漸深入。多種miRNA在腫瘤中均出現(xiàn)異常表達(dá)，如結(jié)直腸癌的miR-145表達(dá)降低、胃癌中miR-155表達(dá)降低[10,11]，表明miRNA可能會(huì)參與癌基因的抑制過程，在腫瘤發(fā)展中有重要意義。miR-21是一種被廣泛研究的miRNA，在眾多胃癌、肝癌等腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)均出現(xiàn)明顯上升。miR-103在多種腫瘤中表達(dá)異常，Zhang等[12]研究結(jié)果表明，miR-103可下調(diào)胃癌中小凹蛋白-1表達(dá)，提高胃癌耐藥性。直腸癌組織中miR-21、miR-103表達(dá)明顯高于癌旁組織，且miR-21表達(dá)與TNM分期等有關(guān)[13]。有研究表明，與正常人相比，miR-200b在結(jié)直腸癌患者血清中的水平顯著下調(diào)，且與組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及生存時(shí)間相關(guān)[14]。本研究中，治療后兩組外周血miR-21、miR-103水平均明顯降低，而miR-200b明顯升高，且觀察組miR-21、miR-103水平更低，miR-200b水平更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明脾多肽注射液聯(lián)合FOLFOX4化療可減弱結(jié)直腸癌患者miR-21、miR-103、miR-200b表達(dá)異常，推測脾多肽可能通過miRNA調(diào)節(jié)抑癌基因，抑制癌細(xì)胞的增殖與分化，防止病情惡化。部分化療藥物如奧沙利鉑等可改變大腸癌細(xì)胞中miRNAs表達(dá)，脾多肽注射液聯(lián)合FOLFOX4化療可提高結(jié)直腸癌患者腫瘤細(xì)胞的殺傷能力，進(jìn)而改變miRNAs分子表達(dá)，提高治療有效率。本研究中不良反應(yīng)經(jīng)對(duì)癥處理后患者均可耐受，未影響化療。觀察組骨髓抑制發(fā)生率低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明觀察組治療方案安全性較高，能明顯降低不良反應(yīng)，提高患者耐受能力及生活質(zhì)量。

綜上所述，脾多肽注射液聯(lián)合FOLFOX4化療不僅可提高患者的免疫功能，增加對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷能力，還能降低血清miR-21、miR-103水平，升高miR-200b水平，抑制癌細(xì)胞的增殖與分化。

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