細(xì)胞角蛋白7、8和10/13在不同級(jí)別宮頸病變中的表達(dá)及意義

潘嬙微，陳大可，潘嘉佳，張?jiān)螺x，沙麗曉，楊潔，沈曉露，陳育梅，潘丹

子宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤[1]，子宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）與子宮頸癌密切相關(guān)，大部分（60%）子宮頸低級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)瘤變（LSIL）可自行消退，但子宮頸高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)瘤變（HSIL）具有癌變潛能，約20%可進(jìn)展為浸潤(rùn)癌，被視為癌前病變[2]。細(xì)胞角蛋白（CK）是一種細(xì)胞中間絲蛋白，在細(xì)胞分化的不同階段及不同類型的上皮細(xì)胞表達(dá)不同，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的在人類上皮細(xì)胞中表達(dá)的就有54種亞型，但研究較多的1～20型[3]。CK的不同類型取決于其酸堿性，同時(shí)取決于其分子量和分布的上皮的類型不同。很多研究表明，在宮頸腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中CK的表達(dá)模式會(huì)發(fā)生改變[4-6]。本研究擬探討CK7、CK8及CK10/13在不同級(jí)別宮頸病變中的表達(dá)及意義，報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料 收集2015年1月至2017年6月浙江省溫州市人民醫(yī)院收治的行宮頸電環(huán)行切除術(shù)、宮頸錐切術(shù)或全子宮切除術(shù)患者100例，其中術(shù)后病理證實(shí)為L(zhǎng)SIL 50例（LSIL組），術(shù)后病理證實(shí)為HSIL 50例（HSIL組）；同期收治的行全子宮切除術(shù)或廣泛子宮切除術(shù)+盆腔淋巴結(jié)清掃術(shù)患者50例，術(shù)后病理證實(shí)為宮頸鱗癌（SCC組）。3組患者均未合并其他內(nèi)外科疾病，術(shù)前未進(jìn)行放化療；排除宮頸病變術(shù)后復(fù)發(fā)的患者。宮頸病變的診斷依據(jù)中國(guó)子宮頸癌篩查與異常管理相關(guān)問題專家共識(shí)[2]。

1.2方法 （1）標(biāo)本收集與處理。將3組患者分別收集宮頸組織標(biāo)本各50份。（2）免疫組化檢測(cè)方法。將標(biāo)本進(jìn)行CK7、CK8及CK10/13檢測(cè)：主要試劑為鼠抗人CK7、CK8和CK10/13單克隆抗體，嚴(yán)格采用免疫組化Envision兩步法進(jìn)行（抗體、Envision兩步法試劑盒均為北京中杉公司生產(chǎn)）。所有組織標(biāo)本經(jīng)10%中性甲醛固定，常規(guī)脫水以后經(jīng)石蠟包埋，連續(xù)切片5～6張，每張切片約厚2 m，取其中1張做HE染色，用于核實(shí)病理學(xué)診斷，剩余切片用于免疫組化染色。具體如下：常規(guī)脫蠟至水，切片浸于pH 6.0檸檬酸緩沖液中，微波抗原修復(fù)10 min，冷卻至室溫，充分水洗，PBS浸洗，加入CK7、CK8及CK10/13一抗4℃過夜；PBS浸洗；滴加 CK7、CK8及CK10/13二抗，37℃，15 min；DAB顯色30s，蘇木素復(fù)染。采用該公司提供的陽(yáng)性切片為陽(yáng)性對(duì)照，用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。（3）結(jié)果判定：所做免疫組化切片由本院病理科專家閱片審核。CK7、CK8及CK10/13均定位于細(xì)胞質(zhì)，分別將無陽(yáng)性顆粒、灶狀散在性、彌漫陽(yáng)性及彌漫強(qiáng)陽(yáng)性分別定義為―、+、2+、3+，將+～3+統(tǒng)一歸入到陽(yáng)性一列。

1.3統(tǒng)計(jì)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS14.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)數(shù)資料采用2檢驗(yàn)＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

CK7、CK8及CK10/13在LSIL組、HSIL組及SCC組中的表達(dá)率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均＜ 0.01），見表 1。LSIL組 CK7、CK8及 CK10/13表達(dá)率與HSIL組及SCC組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（2≥5.87，均＜ 0.05），HSIL組 CK7及CK8表達(dá)率與SCC組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（2=5.67、5.91，均＜ 0.05），HSIL組與SCC組CK10/13表達(dá)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（2=0.70＞ 0.05）。

3　討論

CK是細(xì)胞骨架蛋白的主要成分，與上皮細(xì)胞的形態(tài)和功能息息相關(guān)[7]，而細(xì)胞的形態(tài)和功能發(fā)生變化時(shí)往往伴隨著CK表達(dá)的改變。有研究發(fā)現(xiàn)，CK具有極高的保守性和組織分化特異性，與上皮細(xì)胞的增殖分化密切相關(guān)[8]，細(xì)胞的增殖和分化狀態(tài)也會(huì)影響CK的表達(dá)，細(xì)胞發(fā)生惡變后CK的表達(dá)既可以發(fā)生變化也可以保持不變。癌組織和其來源的正常組織中的CK的表達(dá)方式有兩種[9]：在正常組織中不表達(dá)的CK在癌組織中表達(dá)；在正常組織中表達(dá)的CK在癌組織中不表達(dá)或表達(dá)下調(diào)。

本研究結(jié)果顯示，CK7、CK8和CK10/13在不同級(jí)別的宮頸疾病中的表達(dá)率均不同，隨著宮頸疾病的進(jìn)展，CK7和 CK8在組織中的表達(dá)率逐漸增加，CK10/13表達(dá)率逐漸下降，即表達(dá)缺失率顯著增加。CK7是低分子量的CK，在炎癥和腫瘤中均扮演者重要的角色[10]。目前對(duì)于 CK7的研究主要集中在腺癌和轉(zhuǎn)移性腺癌，Chu等[4]研究了435例上皮來源的腫瘤，發(fā)現(xiàn)CK7在大部分腺癌中表達(dá)，然而大部分的鱗癌 CK7表達(dá)陰性，比如僅21%食管癌中表達(dá)CK7，頭頸部位的鱗癌中僅28%表達(dá)，肺鱗癌中均未見表達(dá)，但發(fā)育不良的宮頸上皮和鱗狀細(xì)胞癌往往表達(dá)CK7，發(fā)現(xiàn)87%宮頸鱗癌中CK7表達(dá)陽(yáng)性，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他組織來源的鱗癌（平均20%～30%）。Smedts等[5]研究發(fā)現(xiàn)正常的宮頸陰道部的鱗狀細(xì)胞CK7表達(dá)缺失，異常的宮頸上皮和宮頸癌傾向于CK7表達(dá)陽(yáng)性。本研究發(fā)現(xiàn)，CK7在LSIL組、HSIL組及SCC組中的表達(dá)率分別是20%、58%和80%，可見隨著宮頸病變級(jí)別的升高，其表達(dá)率逐漸升高。這研究結(jié)果與Smedts等[5]研究結(jié)果相似，其研究認(rèn)為CK7隨著病變由CINⅠ到浸潤(rùn)癌的改變，其表達(dá)會(huì)逐漸增高，并由此認(rèn)為宮頸病變表達(dá)CK7則有可能進(jìn)展，不表達(dá)則有可能消退或持續(xù)存在但并不進(jìn)展。

表1　CK7、CK8和CK10/13在不同宮頸病變中的表達(dá)情況 例（%）

CK8是高分子量的B型CK，能在儲(chǔ)備細(xì)胞，宮頸腺上皮細(xì)胞及不成熟化生鱗狀細(xì)胞中表達(dá)，在成熟的化生鱗狀細(xì)胞中沒有表達(dá)[11]。本研究發(fā)現(xiàn)，CK8在70%的宮頸浸潤(rùn)性癌組織中的表達(dá)，略高于Carrilho等[6]研究的57.1%，這種CK8在宮頸組織中表達(dá)的差異可能主要是因?yàn)闄z測(cè)方法的不同，抗體不同、抗原獲得途徑不同及來源材料保存質(zhì)量的差異。Carrilho等[6]研究發(fā)現(xiàn)CK8在正常宮頸組織中表達(dá)缺失，在CINⅢ中的陽(yáng)性表達(dá)率44.4%；本研究中CK8在HSIL中的表達(dá)率為46%。Smedts等[12]研究表明CK8在子宮頸惡性轉(zhuǎn)化過程中表達(dá)，認(rèn)為其如果在LSIL和HSIL病變中表達(dá)即有進(jìn)行性進(jìn)展的潛力。Ikeda等[13]研究發(fā)現(xiàn)CK8在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和 SCC中的表達(dá)率逐漸增加，分別是12.8%、22.6%、62.8%及71.4%，這與本研究結(jié)果相似，均發(fā)現(xiàn)隨著宮頸病變的進(jìn)展，CK8在上皮組織中的陽(yáng)性表達(dá)率增加。由此可認(rèn)為 CK8在宮頸組織中表達(dá)，病變即有可能進(jìn)一步進(jìn)展，其是宮頸惡性轉(zhuǎn)化的一個(gè)特異性標(biāo)志物。

CK10/13是鱗狀上皮分層和分化的標(biāo)記，是構(gòu)成上皮細(xì)胞的一種成分，是黏膜非角化復(fù)層鱗狀上皮終末分化的標(biāo)志，它的表達(dá)常伴隨上皮細(xì)胞的發(fā)生、分化和形態(tài)變化，具有明顯的組織特異性[8]。因此研究CK10/13的表達(dá)在上皮疾病及鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生和診斷上具有一定意義。Carrilho等[6]和Smedts等[14]研究認(rèn)為CK10/l3表達(dá)缺失同宮頸病變級(jí)別相關(guān)，表達(dá)缺失的發(fā)生率 CINⅢ高于CINⅠ，CK10/13表達(dá)缺失可作為CINⅢ的標(biāo)志物。Maddox等[15]研究發(fā)現(xiàn)，CK10在宮頸浸潤(rùn)癌中的表達(dá)率1%～24%，其認(rèn)為CK10對(duì)于宮頸良惡性疾病的鑒別診斷有很高的特異度和敏感性，這結(jié)果與本研究的相似。本研究發(fā)現(xiàn)CK10/13在不同宮頸疾病中的表達(dá)率有明顯差別，隨著宮頸病變的進(jìn)展，CK10/13表達(dá)率逐漸下降，特別是LSIL與 HSIL或 SCC差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均＜0.05），然而CK10/13在HSIL和SCC的表達(dá)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＞ 0.05）。Nair等[16]和 Smedts等[14]研究發(fā)現(xiàn)，隨著宮頸病變級(jí)別的升高，CK13表達(dá)降低。本研究結(jié)果與上述研究結(jié)果一致認(rèn)為CK10/13的表達(dá)缺失可以作為宮頸疾病惡性進(jìn)展的標(biāo)志物。

綜上所述，CK7、CK8的表達(dá)和CK10/13的表達(dá)缺失可作為宮頸疾病進(jìn)一步進(jìn)展的標(biāo)志物。

參考文獻(xiàn)：

[1] 李亞里.HPV感染與宮頸癌前病變的臨床研究進(jìn)展[J].武警醫(yī)學(xué),2012,23(2):93-96.

[2] 魏麗惠,沈丹華,趙方暉,等.中國(guó)子宮頸癌篩查與異常管理相關(guān)問題專家共識(shí)[J].中國(guó)婦產(chǎn)科臨床雜,2017,18(2):190-192.

[3] Moll R,Lowe A,Laufer J,et al.Cytokeratin20inhumancarcinomas[J].Am JPathol,1992,140(2):427-447.

[4]Chu P,Wu E,Weiss LM.Cytokeratin 7 and cytokeratin20expressioninepithelial neoplasms：asurvey of 435 cases[J].Mod Pathology,2000,13:962-972.

[5]Smedts F,Ramaekers FC,Vooijs P.The dynamics of keratin expression in malignanttransformationof cervical epithelium:a review[J].ObstetGynecol,1993,82(3):465-474.

[6] Carriho C,Alberto M,Buane L,et al.Keratins8,10,13,and 17areuseful markers in thediagnosisof human cervix carcino-mas[J].Hum Pathol,2004,35(5):546-551.

[7] Lu DP,Yu KT,Takeshi Y,etal.Cytokeratin expression Patterns patterns in jaw cyst linings with metaplastic epithelium[J].Oral Pathol Med,2002,31(2):87-94.

[8] 聶敏海,龍漢安,梁尚爭(zhēng),等.細(xì)胞角蛋白10.13.14和19在OLP中的表達(dá)研究[J].臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志,2007,23(12):710-712.

[9] Siddik M,Serdar U,Metin N,et al.Reproducibilityof airwaydimensionsandtongue and hyoid positionsonlateral cephalograms[J].AmJOrthodDetofacialOrthop,2005,128:513-516.

[10]謝佳佳,郭曉華.細(xì)胞角蛋白7的表達(dá)在腫瘤及炎癥中的意義[J].國(guó)際免疫學(xué)雜志,2016,39(1):57-60.

[11]Martens JE,Arends J,Van der Linden PJ,et al.Cytokeratin 17 and p63 are markers of the HPV target cell the cervical stem cell[J].Anticancer Res,2004,24:771-775.

[12]Smedts F,Ramaekers F,Robben H,et al.Changing patterns of keratin expression duringprogressionof cervicalintraepithelial neoplasia[J].Am JPathol,1990,136(3):657-668.

[13]Ikeda K,Tare G,Suzuki T,eta1.Coordinate expressionof cytokeratin8and cytokeratin 17immunohistochemical stainingincervical intraepithelialneoplasia andcervicalsquamous cell carcinoma：an immunohistochemical analysis and review of the literature[J].Gynecologic Oncology,2008,108:598-602.

[14]Smedts F,Ramaekers F,Link M,eta1.Detection of keratin subtypes in routinely processed cervical tissue：implicationsfor tumor classificationand thestudy of cervix cancer category[J].Virchows Archiv,1994,425(2):145-155.

[15]Maddox P,Sasieni P,Szarewski A,et al.Differential expression of keratins10,17,and 19 in normal cervical epithelium,cervical intraepithelial neoplasia,and cervical carcinoma[J].Clin Pathol,1999,52(1):41-46.

[16]Nair SA,Nair MB,Jayaprakash PG,et al.Cytokeratinsand the evaluation of tumor differentiation in squamous lesions of the uterine cervix[J].Gen Diagn Pathol,1997,143(1):15-22.