豆粕替代魚粉對(duì)褐點(diǎn)石斑魚生長(zhǎng)、營(yíng)養(yǎng)組成及血液指標(biāo)影響

劉　洋，孟連仲，張建雄

（1.唐山市畜牧水產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測(cè)中心,河北唐山 063000；2.唐山市豐南區(qū)農(nóng)牧局,河北唐山 063300）

石斑魚隸屬于鱸形目鮨科生物的一種，比其他魚類具有更高的經(jīng)濟(jì)和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值上，且口感極佳，因此，受到消費(fèi)者的一致好評(píng)。由于該魚類具有生長(zhǎng)速度快、對(duì)運(yùn)輸條件要求低等諸多優(yōu)勢(shì)，已成為現(xiàn)階段我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖市場(chǎng)中重要的一種魚類（中國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖網(wǎng)，2016）。褐點(diǎn)石斑魚（Epinephelus fuscoguttatus），俗稱虎頭斑、老虎斑，為暖水性島礁性魚類，在我國(guó)主要分布于東海和南海，資源量稀少；由于其肉味鮮美、生長(zhǎng)快、市場(chǎng)潛力大和養(yǎng)殖前景看好，已成為福建、廣東、海南等地海水養(yǎng)殖的重要名優(yōu)品種之一（王賽等，2012）。

近年來(lái)，高速發(fā)展的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)對(duì)水產(chǎn)飼料的需求不斷增加、魚粉資源不斷減少，使其價(jià)格迅速飆升，故而，探尋一種可將魚粉資源完全或部分替代的蛋白源是現(xiàn)階段水產(chǎn)飼料行業(yè)重點(diǎn)關(guān)注的話題之一（王學(xué)習(xí)等，2017）。隨著科研的不斷深入，部分學(xué)者在研究中指出，豆粕作為一種蛋白源，其自身含有較高的適合水產(chǎn)生物所需的氨基酸成分，因此，將其替代魚粉在石斑魚飼料中應(yīng)用具有廣泛前景（漢雪梅等，2013）。但過(guò)量使用豆粕極易導(dǎo)致魚類死亡，造成養(yǎng)殖戶的重大損失，因此，探究豆粕適合的替代含量成為迫在眉睫的問(wèn)題。鑒于此，筆者就豆粕不同替代含量對(duì)石斑魚的生長(zhǎng)及其營(yíng)養(yǎng)組成和價(jià)值展開探析。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)飼料以魚粉為主要蛋白源，魚油為脂肪源，利用豆粕替代對(duì)照組（CK）中不同比例（20.0%、30.0%、40.0%和50.0%）魚粉蛋白，配制成5種等氮等能（粗蛋白質(zhì)49.67%、粗脂肪8.08）的半精制飼料。將各原料粉碎過(guò)60目網(wǎng)篩，按配方比例混合均勻，再將其擠壓成直徑1.0 mm的顆粒，風(fēng)干后保存于-20 ℃冰箱中備用（殷海成等，2014）。試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)成分見表1。

1.2試驗(yàn)魚及飼養(yǎng)管理選擇初始重量（3.47±0.03）g的石斑魚795尾，使用含量為200 mg/L的甲醛溶液進(jìn)行消毒0.5 h后，隨機(jī)分成CK、R20、R30、R40和 R50共 5個(gè)試驗(yàn)組，其中每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)飼喂53尾魚。分別于（長(zhǎng)、寬、高）2.5 m×1.2 m×1.0 m的鋼化桶中飼養(yǎng)。每天投喂 3次（早上 08：10、中午 12：10、晚上17：10），采取人工投餌方式投喂，試驗(yàn)期56 d。養(yǎng)殖期間換水的頻率為2次/d，保持水體溶解氧＞5.0 mg/L，水溫（23±1）℃。石斑魚換水過(guò)程中，水量應(yīng)嚴(yán)格控制在養(yǎng)殖水體的3/5左右，嚴(yán)格觀察石斑魚進(jìn)食情況，統(tǒng)計(jì)每日死亡數(shù)，在測(cè)量進(jìn)食量時(shí)主要采用以下方法進(jìn)行：對(duì)石斑魚吃剩下的飼料使用烘干儀60 ℃左右烘干，并使用電子秤稱重、計(jì)算（毛盼等，2013）。

表1　試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.3測(cè)定指標(biāo)及方法

1.3.1觀察指標(biāo)56 d后對(duì)5組養(yǎng)殖魚生長(zhǎng)性能進(jìn)行分析，具體計(jì)算公式如下：

增重率=（平均終末體質(zhì)量-平均初始體質(zhì)量）/平均初始體質(zhì)量×100；

特定生長(zhǎng)率=（ln平均終末體質(zhì)量-ln平均初始體質(zhì)量）/飼養(yǎng)天數(shù)×100；

飼料效率=（平均終末體質(zhì)量-平均初始體質(zhì)量）/平均每尾魚飼料攝入總量（王亞軍等，2013）。

試驗(yàn)飼料及全魚常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定方法為：105℃烘箱干燥法（GB/T6435-2006）測(cè)定水分；凱氏定氮法（GB/T6432-1994）測(cè)定粗蛋白質(zhì)；索氏抽提法（GB/T6433-1994）測(cè)定粗脂肪；550℃灼燒法（GB/T6438-1992）測(cè)定粗灰分。

1.3.2消化酶活力測(cè)定待養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，在各組中隨機(jī)選取石斑魚2尾，提取腸道，并將其外部依附物剔除，去離子水洗凈后濾干。取樣品稱重，將10倍體積的高純水勻漿置入，離心取上清，4℃保存。上述指標(biāo)的測(cè)定均采用考馬斯藍(lán)染色法進(jìn)行（張俊智等，2015）。并嚴(yán)格遵循試劑盒上的相關(guān)要求，以確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1.3.3血清免疫指標(biāo)測(cè)定各組隨機(jī)選取石斑魚2尾進(jìn)行麻醉，抽取靜脈血，將其于溫度為4℃的環(huán)境下保存靜置，時(shí)間為3 h，并4000 r/min低溫離心（4℃）10 min后取上清液，置于溫度為-80℃的保存，24 h內(nèi)完成血清免疫學(xué)指標(biāo)的測(cè)定。血清免疫學(xué)指標(biāo)的測(cè)定完全以試劑盒相關(guān)要求進(jìn)行（姜俊等，2015）。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理使用SPSS 21.0完成試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理分析，計(jì)數(shù)資料采用的表述方式為“%”，檢驗(yàn)方式為“χ2”；計(jì)量資料采用的表述方式為“x±s”，檢驗(yàn)方式為“T”。設(shè)定P＜0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)差異成立的必要條件。

2　結(jié)果

2.1豆粕替代魚粉對(duì)褐點(diǎn)石斑魚生長(zhǎng)性能的影響由表2可知，在本試驗(yàn)條件下，褐點(diǎn)石斑魚存活率均在96%以上，豆粕替代水平未對(duì)成活率產(chǎn)生顯著影響（P＞0.05）。R20和R30組在增重率、特定生長(zhǎng)率、飼料效率指標(biāo)上，較CK組有所提升，但無(wú)顯著差異（P＞0.05）；與其他組相比，R40和R50組兩組增重率、特定生長(zhǎng)率、飼料效率顯著降低（P＜0.05）。由圖1可知，豆粕替代水平（x）與增重率（y）的回歸方程為y=-0.1529x2+4.2456x+614.82，R2=0.9899。在本試驗(yàn)條件下，據(jù)回歸方程計(jì)算，最大增重率的最適豆粕替代量為13.88%。

圖1　不同替代水平對(duì)褐點(diǎn)石斑魚增重率的影響

由表3可知，隨著替代水平升高，褐點(diǎn)石斑魚幼魚水分、粗蛋白質(zhì)和灰分含量均無(wú)顯著影響（P＞0.05），但粗脂肪含量呈顯著下降趨勢(shì)（P＜0.05），其中R40和R50組魚體的粗脂肪含量均顯著低于CK和R20組（P＜0.05）。

2.2豆粕替代魚粉對(duì)褐點(diǎn)石斑魚消化酶活性的影響由表4可知，與CK相比，替代組R20、R30、R40和R50的消化酶活性指標(biāo)無(wú)顯著差異（P＞0.05），但均呈現(xiàn)消化酶活力降低的趨勢(shì)。

2.3豆粕替代魚粉對(duì)褐點(diǎn)石斑魚免疫指標(biāo)的影響由表5可知，與對(duì)照組相比，替代組R20、R30、R40和R50在免疫球蛋白M（IgM）、血清溶菌酶、補(bǔ)體C3及超氧化物歧化酶指標(biāo)上無(wú)顯著差異（P ＞ 0.05）。

3　討論

目前，利用豆粕替代魚粉對(duì)魚類生長(zhǎng)性能方面影響的相關(guān)研究很多（張帆等，2012；趙海祥等，2011）。本試驗(yàn)各組存活率無(wú)顯著差異，這表明在一定替代比例內(nèi)，豆粕對(duì)魚粉的替代不會(huì)產(chǎn)生影響（艾慶輝等，2005）。同樣的效果出現(xiàn)在大口黑鱸（陳乃松等，2013）、尼羅羅非魚（聶國(guó)興，2007）研究中。吳釗等（2013）研究發(fā)現(xiàn)，豆粕能替代飼料中40%的魚粉，而對(duì)大黃魚生長(zhǎng)未造成負(fù)面影響。但本試驗(yàn)替代達(dá)到40%時(shí)開始出現(xiàn)生長(zhǎng)顯著下降的現(xiàn)象。原因可能是豆粕替代比例過(guò)大，而豆粕有抗?fàn)I養(yǎng)因素、氨基酸組成不平衡等問(wèn)題，易導(dǎo)致魚體生長(zhǎng)性能嚴(yán)重下降（劉興旺等，2016）。相關(guān)研究報(bào)道顯示，在用植物蛋白源替代魚粉的過(guò)程中，大豆作為主要蛋白源，其含有大量營(yíng)養(yǎng)頡頏因子（大豆凝集素、皂角甙等），營(yíng)養(yǎng)頡頏因子會(huì)影響魚類消化、吸收植物蛋白，降低魚類生長(zhǎng)性能（周歧存等，2005）。

表2　不同替代水平對(duì)褐點(diǎn)石斑魚生長(zhǎng)性能的影響

表3　不同替代水平對(duì)褐點(diǎn)石斑魚肌肉營(yíng)養(yǎng)成分的影響（干重） %

表4　不同替代水平對(duì)褐點(diǎn)石斑魚消化酶活力影響

表5　不同替代水平對(duì)褐點(diǎn)石斑魚血清免疫指標(biāo)影響

曾有學(xué)者報(bào)道，豆粕成分中的抗胰蛋白酶、異黃酮等均會(huì)嚴(yán)重的影響機(jī)體免疫功能，此外，豆粕中的氨基酸含量不平衡，降低魚類消化和吸收飼料的功能，進(jìn)而對(duì)魚類營(yíng)養(yǎng)、免疫等功能造成負(fù)面影響（馮建等，2016）。在本試驗(yàn)中，褐點(diǎn)石斑魚免疫指標(biāo)均未受到豆粕替代的影響，這與以往褐點(diǎn)石斑魚（鄒文超等，2014）的研究基本一致，有別于異育銀鯽（王崇等，2009）和奧尼羅非魚（劉勇等，2009）的報(bào)道。這可能與植物蛋白源、魚種類和規(guī)格及原料加工工藝等因素有關(guān)；同時(shí)，本試驗(yàn)飼料中添加賴氨酸和蛋氨酸，這在一定程度上降低了抗?fàn)I養(yǎng)因子和補(bǔ)充必需氨基酸平衡的作用，關(guān)于豆粕替代魚粉對(duì)褐點(diǎn)石斑魚免疫功能的影響有待于進(jìn)一步研究。根據(jù)數(shù)據(jù)結(jié)果可以看出，30%魚粉蛋白被豆粕替代時(shí)，褐點(diǎn)石斑魚生長(zhǎng)性能無(wú)顯著變化，消化酶活性、免疫功能等受到的影響不大。為使褐點(diǎn)石斑魚生長(zhǎng)性能、免疫功能及消化酶活性等指標(biāo)不受到影響，同時(shí)結(jié)合替代水平對(duì)增重量影響的數(shù)據(jù)分析，建議在豆粕替代魚粉蛋白時(shí)，其比例最好不超過(guò)30%（李學(xué)麗等，2017）。本次研究因樣本數(shù)據(jù)量過(guò)少存在一定的局限性，用豆粕替代魚粉對(duì)不同魚類免疫功能影響未做詳細(xì)研究，有待下一步深入研究。

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