中醫(yī)三期治則對(duì)骨折愈合影響的機(jī)制研究

劉思景 鄭臣校 李緒松 鄭雨中 黃志全 譚仁斌

臨床骨折是外科常見病和多發(fā)病, 尤其是近年隨著高層建筑不斷增加、各類交通工具廣泛普及、大型機(jī)械的廣泛應(yīng)用, 使得骨折的發(fā)生率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)［1］。我國(guó)中醫(yī)歷史悠久且在治療骨折上更是獨(dú)具特色, 并且獲得了廣泛的認(rèn)可和青睞［2］, 為此本院開展了中醫(yī)三期治則對(duì)骨折愈合影響的作用機(jī)制的觀察, 現(xiàn)報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物 選取健康雄性新西蘭家兔150只, 飼養(yǎng)7 d后采用隨機(jī)數(shù)字法分為治療組(60只)和對(duì)照組(90只), 其中一期治療組30只, 二期治療組20只, 三期治療組10只,陽(yáng)性對(duì)照組30只, 陰性對(duì)照組30只, 空白對(duì)照組30只。

1.2方法

1.2.1建立骨折模型 除空白對(duì)照組家兔外, 所有家兔均采用特制骨鋸建立骨折模型, 不做任何固定, 切口采用生理鹽水進(jìn)行沖洗, 逐層縫合后分籠常規(guī)飼養(yǎng), 術(shù)后同時(shí)給予青霉素40萬(wàn)IU肌內(nèi)注射治療, 1次/d。

1.2.2干預(yù)方法 采用本院自制中成藥行三期治療, 具體中成藥構(gòu)成為田七口服液、傷科九味健骨片、培元壯骨片,依據(jù)家兔橈骨中下段骨折愈合的組織學(xué)變化將骨折愈合分為三期, 即 ：術(shù)后第1～7天血腫機(jī)化演進(jìn)期為一期(早期), 術(shù)后第8～28天骨痂形成期為二期(中期), 術(shù)后第 29～56天改造塑形期三期(后期)。其中一期治療組家兔均給予田七口服液灌胃治療, 第8天停藥；二期治療組家兔一期給予田七口服液灌胃治療, 二期給予傷科九味健骨片治療, 術(shù)后第29天停藥；三期治療組家兔一期給予田七口服液灌胃治療,二期給予傷科九味健骨片治療, 三期給予培元壯骨片治療；陽(yáng)性對(duì)照組骨折愈合不進(jìn)行分期均給予接骨七厘水溶液治療56 d；陰性對(duì)照組、空白對(duì)照組均給予蒸餾水灌胃56 d。治療組家兔每日給藥中成藥劑量為對(duì)人等效劑量的2倍, 分早晚2次灌胃。

1.2.3標(biāo)本處理 所有家兔分三批采用栓塞法進(jìn)行處死,其中第一批次：術(shù)后8 d治療組、對(duì)照組各組各10只；第二批次：術(shù)后29 d二期治療組、一期治療組、對(duì)照組各組各10只；第三批次：術(shù)后57 d各處死10只。

1.3觀察指標(biāo)及判斷標(biāo)準(zhǔn) 觀察指標(biāo)：①對(duì)各組家兔雙側(cè)橈骨進(jìn)行DR拍攝, 仔細(xì)閱片分別依據(jù)斷端邊緣、骨痂量、骨痂邊緣對(duì)骨折愈合情況進(jìn)行評(píng)價(jià)記分；②取左側(cè)橈骨標(biāo)本采用免疫組化、原位雜交法觀察各組骨折愈合不同時(shí)間點(diǎn)骨 痂 FGF-2、BMP-2、Osx、FGF-2mRNA、BMP-2mRNA、OsxmRNA的表達(dá), 采用纖維圖像采集系統(tǒng)對(duì)免疫組化、原位雜交片骨折折斷斷附近組織及骨髓組織進(jìn)行高倍觀察, 采用ImageProphis5.0圖像分析系統(tǒng)測(cè)定陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞平均光密度值(MOD)。

判斷標(biāo)準(zhǔn)：分別在試驗(yàn)第1天、術(shù)后8 d、29 d和57 d對(duì)所有研究組進(jìn)行上述骨痂FGF-2、BMP-2、Osx、FGF-2mRNA、BMP-2mRNA、OsxmRNA的表達(dá)數(shù)據(jù)進(jìn)行采集, 其中每組以試驗(yàn)第1天數(shù)據(jù)為基準(zhǔn)值, 隨后各時(shí)間點(diǎn)各組與其基準(zhǔn)值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較, 以差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)為見效, 以差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)為無(wú)效, 比較分析各時(shí)間段每組見效情況。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)本次研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。對(duì)骨折愈中每種組織MOD值采用一般線性模型重復(fù)測(cè)量法進(jìn)行組間差異比較, 采用LSD法對(duì)各時(shí)間點(diǎn)組間差異進(jìn)行比較, 計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,采用t檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

①術(shù)后8 d, 一期治療組與陽(yáng)性對(duì)照組見效情況比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；一期治療組與陽(yáng)性對(duì)照組見效情況明顯優(yōu)于陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組(P＜0.05)；陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組見效情況比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。②術(shù)后29 d, 二期治療組見效情況明顯優(yōu)于一期治療組、陽(yáng)性對(duì)照組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；一期治療組、陽(yáng)性對(duì)照組見效情況比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；一期治療組見效情況優(yōu)于陰性對(duì)照組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；陽(yáng)性對(duì)照組和陰性對(duì)照組見效情況比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。③術(shù)后57 d, 三期治療組見效情況優(yōu)于二期治療組,二期治療組見效情況明顯優(yōu)于一期治療組、陽(yáng)性對(duì)照組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；一期治療組見效情況明顯優(yōu)于陰性對(duì)照組、空白對(duì)照組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；一期治療組見效情況與陽(yáng)性對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 陽(yáng)性對(duì)照組和陰性對(duì)照組見效情況比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＞0.05)。見表 1。

表1　各組術(shù)后不同時(shí)間段見效情況比較(只)

3　討論

中醫(yī)治病的獨(dú)到之處在于能夠辨證論治, 而中醫(yī)治療骨折更是憑借分期辨證施治獲得了認(rèn)可并得以流傳千年。宋代王懷隱等所著《太平圣惠方》認(rèn)為骨折患者需要“補(bǔ)筋骨、益精血、通血脈”；明朝薛已的《正體類要》中便強(qiáng)調(diào)了骨折的整體療法, 并提出“肢體損于外, 則氣血傷于內(nèi), 營(yíng)衛(wèi)有所不貫, 臟腑由之不和”的觀點(diǎn)。由此可見中醫(yī)對(duì)于骨折的治療主要集中于“痂去、新生、骨合”的動(dòng)態(tài)過(guò)程中, 并開創(chuàng)性的將骨折的治療分為早期、中期、后期［3］：其中針對(duì)骨折早期的氣滯血瘀, 給予活血化瘀止痛；針對(duì)中期骨折患者的瘀去但未清、腫退但未消的特點(diǎn), 給予接骨續(xù)筋和生新止痛之法；而骨折患者后期則由于久病而元?dú)獯髠? 骨雖和但未堅(jiān), 因此治療思路在于固本培元, 以強(qiáng)筋壯骨, 并逐步使骨骼和周邊組織開始恢復(fù)［4-7］。因此本研究對(duì)家兔一期給予田七口服液灌胃治療, 二期給予傷科九味健骨片治療, 三期給予培元壯骨片治療。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)也發(fā)現(xiàn)局部骨生長(zhǎng)因子對(duì)骨折修復(fù)起著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作, 決定著骨折修復(fù)的速度與質(zhì)量。其中作為廣譜有絲分裂原的FGF-2, 是廣泛存在于機(jī)體組織的一種多聚肽, 能促進(jìn)來(lái)源于中胚層和神經(jīng)外胚層細(xì)胞的分裂增殖, 具有趨化和遷移作用, 同時(shí)也能夠?qū)γ?xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的分裂增殖起到顯著促進(jìn)作用［8-10］。

綜上所述, 中藥對(duì)骨折端各類骨癡組織FGF-2、BMP-2、Osx具有明顯的促進(jìn)作用, 利用中醫(yī)三期治則對(duì)骨折愈合不同階段的各種組織均有不同的應(yīng)用效果, 并且較其他形式的中醫(yī)治療方法具有較為明顯的促進(jìn)作用, 因此臨床上對(duì)于骨折患者采取中醫(yī)三期治則值得積極推廣、應(yīng)用。

［1］ 陳道振.中醫(yī)骨折三期治療對(duì)肱骨近端骨折術(shù)后的療效觀察.中國(guó)實(shí)用醫(yī)刊, 2015, 42(1)：89-90.

［2］ 馮小慶.肱骨近端骨折術(shù)后中醫(yī)骨折三期治療的應(yīng)用與臨床療效初評(píng) .中國(guó)校醫(yī) , 2017, 31(6)：464.

［3］ 楊文才.中醫(yī)骨折三期治療對(duì)肱骨近端骨折術(shù)后的影響分析.臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)電子雜志, 2016, 3(51)：10124.

［4］吳海斌, 張昊天.中醫(yī)骨折分期治療對(duì)骨折愈合bFGF、TGF-β、VEGF、BMP-2基因表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.哈爾濱醫(yī)藥, 2016,36(3)：290-291.

［5］溫建民, 高國(guó)慶, 楊大偉.骨折三期治療對(duì)骨生長(zhǎng)因子BMP-2 mRNA表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.中國(guó)社區(qū)醫(yī)師(醫(yī)學(xué)專業(yè)半月刊),2009, 11(8)：3-4.

［6］畢鍇, 溫建民, 孫永生, 等.中醫(yī)骨折三期治療對(duì)家兔骨折愈合中VEGF與BMP-2表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志 , 2012(12)：1344-1347.

［7］ 高國(guó)慶.骨折三期治則對(duì)家兔骨折愈合過(guò)程中FGF-2mRNA,TGF-β1mRNA表達(dá)調(diào)控的研究.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院 中國(guó)中醫(yī)研究院, 2009.

［8］徐穎鵬, 溫建民, 董建文, 等.中醫(yī)骨折三期治療對(duì)家兔骨折骨膜組織中VEGF及VEGF mRNA表達(dá)的影響.中國(guó)骨傷,2010, 23(2)：120-124.

［9］畢鍇, 溫建民, 孫永生, 等.中醫(yī)骨折分期治療對(duì)家兔骨折愈合過(guò)程中TGF-β與bFGF表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.中國(guó)矯形外科雜志 , 2013, 21(4)：381-386.

［10］ 宋濤.中醫(yī)骨折三期治療對(duì)肱骨近端骨折術(shù)后的臨床療效觀察.湖北中醫(yī)藥大學(xué), 2013.