CYP2C19基因多態(tài)性與阿那曲唑治療絕經(jīng)后乳腺癌患者療效的相關(guān)性

侯倩倩　李玲玲　王大慶　楊虎　谷巍

河北省衡水市哈勵遜國際和平醫(yī)院腫瘤內(nèi)科（河北衡水 053000）

雌激素水平與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［1］，阿那曲唑應用于絕經(jīng)后乳腺癌患者的治療中具有良好的臨床療效［2］。已有研究顯示CYP2C19基因多態(tài)性與多種疾病的臨床療效具有相關(guān)性［3］，但目前關(guān)于CYP2C19基因多態(tài)性與阿那曲唑?qū)χ委熃^經(jīng)后乳腺癌患者的療效相關(guān)性研究報道較少。本文研究CYP2C19*2基因多態(tài)性與阿那曲唑治療絕經(jīng)后乳腺癌患者的臨床療效的相關(guān)性，現(xiàn)將研究結(jié)果報告如下。

1　對象與方法

1.1研究對象選擇2011年3月至2012年5月期間本院收治的113例絕經(jīng)后乳腺癌患者，平均年齡（56.2±3.54）歲。入選標準：女性絕經(jīng)標準以NCCN2012?Versionl為準；均經(jīng)空芯針穿刺病理活檢證實為乳腺癌。另選取同期來我院進行體檢的健康人員89例作為健康志愿者組。兩組患者的臨床資料，見表1，所有受試對象均簽訂知情同意書。

1.2方法

1.2.1CYP2C19*2基因多態(tài)性檢測方法檢測CYP2C19*2基因多態(tài)性采用聚合酶鏈限制性片段長度多態(tài)性（PCR?RFLP）法進行基因型檢測，步驟分為DNA提取、引物設(shè)計及擴增、酶切、電泳?？崭共杉庵莒o脈血4 mL后，經(jīng)EDTA?K2抗凝，DNA提取試劑盒為北京天根生化科技有限公司提供，提取后于-20℃保存。

1.2.2治療方法所有患者口服阿那曲唑（AstraZen?eca Pharmaceuticals LP生產(chǎn)，國藥準字J20100107）1次/d，1 mg/次，每4周為1個療程，連續(xù)服用3個療程。所有參試者在研究開始前檢測血清相關(guān)指標，每個療程重復測定相關(guān)指標及腫瘤大小，認真做好記錄。

1.2.3判定方法依據(jù)WHO規(guī)定，療效分為CR（完全緩解）、PR（部分緩解）、SD（病變穩(wěn)定）、PD（病變進展）。其中CR指基線病灶全部消失，PR指基礎(chǔ)病灶長徑總和縮小范圍超過30%，SD指原來病灶的長徑總和縮小未達30%或增加未達20%，PD指出現(xiàn)新病灶或原來病灶最大徑之和增加超過20%。治療的有效率（OR）等于完全緩解和部分緩解的病例共占全部病例的百分比。

1.2.4檢測指標采用全自動生化分析儀（日立76002）檢測患者清晨空腹血清中促卵泡激素（FSH）、黃體生成素（LH），主要檢測患者治療前、治療后第4周及第12周血清中的FSH、LH。

1.2.5隨訪113例乳腺癌患者均被隨訪，其中9例失訪。隨訪截止時間為2017年4月1日，記錄患者治療后第3、6個月以及1年內(nèi)出現(xiàn)的骨髓抑制、骨質(zhì)疏松、肝功能損傷等情況。

1.3統(tǒng)計學方法采用專業(yè)統(tǒng)計軟件SPSS 22.0進行數(shù)據(jù)分析處理。用均數(shù)±標準差表示計量資料。不同基因型組別間比較采用單因素方差分析或重復測量的方差分析。同一基因型組別內(nèi)治療前后比較采用LSD?t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。采用Kalplan?Meier法檢測患者6年的生存率，經(jīng)Log?Rank檢驗差異是否存在統(tǒng)計學意義。應用Cox比例風險回歸模型對各研究組5年無病生存期DFS進行分析。

2　結(jié)果

2.1乳腺癌組和健康志愿者組臨床基線資料比較乳腺癌組和健康志愿者組的臨床基線資料：年齡、體質(zhì)量、身高、BMI、高血壓、糖尿病、高脂血癥方面比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。見表1。

表1　乳腺癌組和健康志愿者組一般臨床資料的比較Tab.1　Comparison of general clinical data between breast cancer group and healthy volunteers group　例（%）

2.2CYP2C19基因多態(tài)性檢測結(jié)果紫外-可見分析結(jié)果顯示：擴增CYP2C19*2位點，酶切所得的PCR產(chǎn)物位于321 bp處為突變型純合子CYP2C19*2*2（AA型），突變性雜合子CYP2C19*1*2（GA型）為3條帶，分別位于321 bp、212 bp以及109 bp處，野生型CYP2C19*1*1（GG型）為2條帶，分別位于212 bp以及109 bp處。為了保證酶切的準確性，選取部分PCR擴增產(chǎn)物進行基因測序，結(jié)果與酶切一致。見圖1。

2.3基因頻率分布以及Hardy?Weinberg遺傳性檢測健康志愿者組與CYP2C19*2基因位點的A、G等位基因頻率分布符合Hardy?Weinberg遺傳平衡定律。絕經(jīng)后健康志愿者組與絕經(jīng)后乳腺癌組的CYP2C19*2基因的GA、AA基因型之間的差異以及G、A等位基因頻率差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

2.4不同基因型之間臨床療效的比較見表3。不同基因型之間治療后的FSH、LH水平均比治療前明顯降低，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），GG型患者治療第12周后血清中FSH、LH均顯著低于GA、AA型（P＜0.05）。與GA基因型和AA基因型比較，GG基因型治療12周后，有效率明顯提高，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表5。

圖1　CYP2C19*2基因擴增電泳圖及基因多態(tài)性測序圖譜Fig.1　CYP2C19*2 gene amplification electrophoresis map and gene polymorphism sequencing map

表2　絕經(jīng)后乳腺癌組和健康志愿者組的CYP2C19*2基因型及等位基因分布比較Tab.2　Genotype and allele distribution of CYP2C19*2 in postmenopausal breast cancer and healthy volunteers例（%）

表3　不同基因型患者治療后FSH、LH水平的比較Tab.3　Comparison of FSH and LH levels in patients with different genotypes after treatment　±s

表3　不同基因型患者治療后FSH、LH水平的比較Tab.3　Comparison of FSH and LH levels in patients with different genotypes after treatment　±s

注：與GA型比較，*P＜0.05；與AA型比較，#P＜0.05

基因型GA AA GG F值P值FSH LH治療前（IU/L）62.18±3.62 63.26±2.89 62.93±2.64 1.211 0.117治療后第4周（IU/L）61.62±2.88 62.15±2.16 61.76±3.66 0.897 0.298治療后第12周（IU/L）43.23±2.10 47.70±2.54 35.11±1.83*#12.345 0.000治療前（IU/L）27.39±1.09 26.85±1.53 27.14±1.18 1.322 0.109治療后第4周（IU/L）26.47±0.94 25.37±1.09 26.82±0.93 1.109 0.149治療后第12周（IU/L）16.25±1.33 17.47±1.46 11.36±0.74*#13.653 0.000

表4　不同基因型患者治療12周后臨床療效的比較Tab.4　Comparison of clinical efficacy of patients with different genotypes after 12 weeks of treatment 例（%）

2.4不同基因型患者治療后不良反應的比較見表5。治療后6個月、1年GG型骨質(zhì)疏松發(fā)生率顯著高于GA型、AA型（χ2=6.432、11.771、9.232、14.693，P＜ 0.05）。

2.5不同基因型患者與阿那曲唑治療后生存率分析由不同基因型患者術(shù)后與阿那曲唑治療生存率的比較可以看出，GA和AA基因型的無病生存率明顯低于GG型，差異有顯著性（Log Rank=5.922，P=0.015，圖2A），GA和AA基因型的總生存率明顯低于GG型，差異有顯著性（Log Rank=6.453，P=0.005，圖2B）。

表5　不同基因型患者治療后不良反應情況的比較Tab.5　The adverse reactions of patients with different genotypes after treatment 例（%）

2.6影響絕經(jīng)后乳腺癌患者臨床治療效果的相關(guān)因素分析見表6。阿那曲唑和CYP2C19基因多態(tài)性是影響絕經(jīng)后乳腺癌患者臨床療效的獨立相關(guān)因素（P＜0.05）。

3　討論

圖2　Kalplan?Meier法分析不同基因型患者生存情況Fig.2　Kalplan?Meier analysis of survival in patients with different genotypes

表6　影響絕經(jīng)后乳腺癌患者臨床療效的相關(guān)因素分析Tab.6　Analysis of related factors affecting the clinical efficacy of postmenopausal breast cancer

阿那曲唑可降低患者血液中相關(guān)激素的水平，抑制乳腺癌細胞的增殖，促進癌細胞的凋亡，能有效抑制雄激素轉(zhuǎn)化為雌激素，控制腫瘤復發(fā)和轉(zhuǎn)移［4-5］。有研究認為阿那曲唑用于絕經(jīng)后乳腺癌術(shù)前治療有良好的近期療效，可有效降低患者血液中雌激素水平［6］，本研究3組不同基因分型的患者治療12周后血清FSH、LH水平與治療前相比明顯降低，差異有顯著性，提示阿那曲唑和CYP2C19*2基因多態(tài)性均與絕經(jīng)后乳腺癌患者的血清FSH、LH水平獨立相關(guān)，說明二者均可影響絕經(jīng)后乳腺癌患者的臨床療效。

關(guān)于乳腺癌術(shù)后無病生存率與CYP2C19基因型的關(guān)系研究，以往有研究認為乳腺癌患者術(shù)后5年生存率與CYP2C19基因型無關(guān)［7］。而本文結(jié)果顯示GA、AA基因型的5年無病生存率明顯低于GG基因型，與上述研究結(jié)果有差異。通過本研究發(fā)現(xiàn)，GA和AA型患者6年內(nèi)患者的無腫瘤進展生存率以及總生存率均顯著低于GG型，表明CYP2C19*2基因多態(tài)性與阿那曲唑治療的敏感性有關(guān)，即表明GG型患者預后較好。需要指出的是，GG型患者經(jīng)阿那曲唑治療后FSH、LH均顯著降低，但其治療后骨質(zhì)疏松發(fā)生率也明顯增加，可能與GG型患者FSH、LH降低較GA、AA型患者更為明顯有關(guān)。

綜上所述，臨床中有必要針對絕經(jīng)后乳腺癌患者采用阿那曲唑治療時進行CYP2C19*2基因多態(tài)性檢測，該方法能為臨床個體化藥物治療提供參考依據(jù)。

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