Csp聯(lián)合Clinpro XT Varnish促脫礦釉面再礦化的體外研究

(佳木斯大學(xué)附屬口腔醫(yī)院 黑龍江 佳木斯 154007)

齲病和牙齒酸蝕癥是人青少年時(shí)期最常見的牙體硬組織疾病，脫礦被認(rèn)為是齲病和牙酸蝕癥的主要病變過程。在正常情況下，牙齒的脫礦與再礦化過程始終保持著平恒，但隨著人民生活水平的提高，高頻率的高糖性及酸性食物的攝入，特別是青少年喜食碳酸飲料，因此牙齒表面的動(dòng)態(tài)平衡被打破，牙表面釉質(zhì)脫礦越來越嚴(yán)重。所以，預(yù)防及治療脫礦牙釉質(zhì)是口腔醫(yī)學(xué)的一大熱點(diǎn)。在多年對(duì)于再礦化的研究中，許多材料因此誕生。其中含氟制劑如氟保護(hù)漆、Cpp-Acp、滲透樹脂，又比如含有磷硅酸鈉鈣的脫敏材料奧敏清也被證實(shí)對(duì)于脫礦釉質(zhì)有再礦化作用，還有近年來越來越改良的新型玻璃離子，因其再礦化效果和硬度有極大的優(yōu)越性，也被人們所認(rèn)可。但單獨(dú)使用時(shí)各有各的利弊性。本實(shí)驗(yàn)研究考慮聯(lián)合奧敏清和新型玻璃離子膜Clinpro XT Varnish，來探討它們聯(lián)合應(yīng)用于促進(jìn)牙齒再礦化，抑制牙齒再脫礦的的效果。

一、材料與方法

(一)主要材料及儀器

奧敏清牙齒脫敏劑(北京大清生物有限公司)，Clinpro XT Varnish(3M公司，美國)，氟保護(hù)漆(美麗牙醫(yī)，美國)，人工唾液(東莞市信恒科技有限公司，中國)，人工脫礦液(含0.1mol/L，30g/L羧甲基纖維素,ph=4.2,自配)，去離子水，恒溫箱(佳木斯大學(xué)材料學(xué)院實(shí)驗(yàn)室)，顯微硬度計(jì)(上海聯(lián)爾實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司，中國)，掃描電鏡(北京中科科技儀，中國)，慢速切割機(jī)(Buehler公司，美國)。

(二)樣本采集

收集佳木斯大學(xué)附屬口腔醫(yī)院頜面外科門診因正畸需要而拔除的上下頜前磨牙44顆，牙齒形態(tài)正常，釉質(zhì)發(fā)育良好，牙齒表面無色素沉著，無齲壞,無隱裂，非氟斑牙及四環(huán)素牙。

(三)方法和步驟

1.樣本處理及制備

清洗，去除牙齒表面附著的菌斑，牙石，軟組織，磨除牙根。用慢速切割機(jī)沿牙體長軸方向，距離頰面2mm處，近遠(yuǎn)中方向低速切片，制備出5mm×5mm×2mm的牙塊，一共制備出44個(gè)，用自凝樹脂包埋，釉質(zhì)表面開窗。從44個(gè)釉質(zhì)塊中取出4個(gè)用于酸蝕前后的掃面電鏡觀察。余下釉質(zhì)塊隨機(jī)分為五組(n=8)。A組為陰性對(duì)照組，B組為陽性對(duì)照組，C，D,E組為實(shí)驗(yàn)組。

2.脫礦牙模型制備

將5組樣本分別浸泡在等量的人工脫礦液中12h，后保存在37度恒溫箱中，每天更換新鮮配制的脫礦液，連續(xù)7天制作脫礦模型。

3.再礦化處理

A組(人工唾液組):將A組試件放置于人工唾液中，人工唾液每日更換兩次。

B組(氟保護(hù)漆組):將B組試件于釉質(zhì)表面用小毛刷均勻反復(fù)涂抹0.5ml美麗牙醫(yī)氟保護(hù)漆，保留10min，待透明干燥后置于人工唾液中，整個(gè)實(shí)驗(yàn)只涂1次，人工唾液每日更換2次。

C組(奧敏清組):將C組試件于釉質(zhì)表面用小毛刷均勻涂抹一層奧敏清(其中含有磷硅酸鈉鈣成分)，保留10min，每天涂2次，靜置于人工唾液中，人工唾液每日更換2次。

D組(Clinpro XT Varnish組):將D組試件吹干表面水分，用磷酸酸蝕液酸蝕釉質(zhì)表面15s，加壓沖洗30s，后干燥牙面。按照說明，將Clinpro XT Varnish涂布于釉質(zhì)面，停留5min，光照20s，各樣本常規(guī)打磨拋光，靜置于人工脫礦液中，人工唾液每日更換2次。

E組(奧敏清+Clinpro XT Varnish組):第一步同D組一樣處理，第二步是每天2次涂布奧敏清，每次保留10min，靜置于人工唾液中，人工唾液每日更換2次。

4.再脫礦處理

再礦化實(shí)驗(yàn)3周后，行再脫礦處理，將各組樣本重新浸泡于人工脫礦液中脫礦2周.

5.掃瞄電鏡觀察(SEM)

從人工唾液中取出釉質(zhì)片，去離子水沖洗，用無水乙醇脫水，后放入恒溫鼓風(fēng)干燥箱中干燥24h。真空狀態(tài)下噴砂，置于掃瞄電鏡下觀察釉質(zhì)表面形態(tài)結(jié)構(gòu)。

6.顯微硬度(SMH)的測(cè)定

取出實(shí)驗(yàn)樣本，用特制工具固定住樣本，調(diào)整顯微硬度計(jì)(壓力200g,持續(xù)時(shí)間15s)打擊釉質(zhì)面形成壓痕，壓出5個(gè)點(diǎn)，由計(jì)算機(jī)算出相應(yīng)硬度值，去除最大值，最小值后得出平均值，既是最終顯微硬度測(cè)量結(jié)果。

(四)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本實(shí)驗(yàn)采用spss22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行脫礦前，脫礦后，再礦化后各組實(shí)驗(yàn)結(jié)果的整理和分析，采用單因素方差分析，所有的檢驗(yàn)水準(zhǔn)均設(shè)在a=0.05，p<0.05表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果

(一)樣本表面顯微硬度值的測(cè)定

脫礦處理前樣本顯微硬度值的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。脫礦處理后顯微硬度值均明顯下降，低于脫礦處理前(p<0.05)。再礦化處理后，各組較脫礦后顯微硬度值均提高(P<0.05)。各組間兩兩比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中E組SMH最高。

(二)掃描電鏡觀察

未進(jìn)行脫礦前牙釉質(zhì)表面光滑致密平坦，經(jīng)過人工脫礦液脫礦后，釉質(zhì)表面出現(xiàn)多數(shù)篩孔，呈馬蜂窩狀，少數(shù)部位柱見隔溶解破壞，形成凹坑狀脫礦表現(xiàn)。經(jīng)過3周再礦化處理后，A組釉質(zhì)表面凹坑狀略變淺，但明顯看到塌陷的釉質(zhì)。B組可見有球狀顆粒物覆蓋在釉質(zhì)表面陷窩。C，D組釉質(zhì)表面較平坦，礦物質(zhì)顆粒大片大片斑狀覆蓋，但仍有明顯裂紋存在。E組表面隆起，可見不同大小的致密礦物質(zhì)顆粒覆蓋沉積，已無明顯裂紋存在。

三、討論

臨床上因?yàn)辇x病或牙酸蝕癥而廣泛就診的，這兩者患者的顯著臨床表現(xiàn)就是釉質(zhì)表面的脫礦系統(tǒng)和再礦化系統(tǒng)失去平衡，釉質(zhì)就會(huì)表現(xiàn)為明顯的脫礦現(xiàn)象。釉面的脫礦過程表現(xiàn)為牙體硬組織表面慢性的、病理性的淺層逐漸喪失[1]。目前為止氟化物被廣泛認(rèn)可為是促進(jìn)牙體硬組織發(fā)生再礦化和抑制脫礦的材料，但是氟化物在兒童、青少年群體中的應(yīng)用有一定的局限性，因?yàn)闀?huì)有過量攝氟的現(xiàn)象發(fā)生[2]。目前還有最新的酪蛋白磷酸肽鈣復(fù)合體的再礦化治療，其無毒副作用，但酪蛋白磷酸肽鈣復(fù)合體與氟化物相比較，酪蛋白磷酸鈣肽復(fù)合體對(duì)于早期釉質(zhì)面脫礦病損的再礦化作用比較小[3，4]。因此研制發(fā)明無毒副作用并且具有一定效果的再礦化制劑是目前研究的一大熱點(diǎn)。

本研究所用的材料為奧敏清(csp)和Clinpro XT Varnish(新型玻璃離子膜)。奧敏清它的活性成分為鈣鈉磷硅酸，它在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中應(yīng)用極其廣泛，曾一時(shí)被應(yīng)用于促進(jìn)骨組織再生、引導(dǎo)軟組織損傷愈合的領(lǐng)域，它同樣在口腔中應(yīng)用廣泛，比如用于治療牙本質(zhì)過敏癥，以及在促脫礦牙釉質(zhì)再礦化上也有一定效果。Bakry和Mehta發(fā)現(xiàn)csp在使脫礦釉質(zhì)再礦化上比氟化物和酪蛋白磷酸肽鈣復(fù)合體都要更加有效果。[5,6]Clinpro XT Varnish除了具有玻璃離子的一切優(yōu)點(diǎn)，能與牙齒形成粘結(jié)，持續(xù)釋放氟、鈣和磷酸鹽之外，還有了新的優(yōu)勢(shì)，比如鈣和磷酸鹽釋放，[7]可長時(shí)間粘附于牙面達(dá)6個(gè)月之久，并且具有耐濕性、美觀性等優(yōu)點(diǎn)。[8]本研究將兩者聯(lián)合應(yīng)用，來彌補(bǔ)兩者單獨(dú)應(yīng)用時(shí)的局限性。在經(jīng)再礦化處理后，4組陽性對(duì)照組的顯微硬度均高于陰性對(duì)照組。E兩組SMH顯著高于前4組實(shí)驗(yàn)組，csp+Clinpro XT Varnish組的SMH最高。Csp與Clinpro XT Varnish兩者聯(lián)合應(yīng)用后，能顯著增加酸蝕牙釉質(zhì)的顯微硬度，促進(jìn)再礦化。在抑制礦化釉質(zhì)再脫礦方面，本研究中，與單用csp法或Clinpro XT Varnish相比，csp+Clinpro XT Varnish組的再脫礦后的SMH降低不明顯，顯著高于其他各組。在沒有被Clinpro XT Varnish覆蓋的區(qū)域，則可能在Csp的作用下，Ca2+、P3+得到及時(shí)補(bǔ)充，Csp黏附在牙面上維持鈣磷離子的過飽和狀態(tài)，表面發(fā)生了再礦化，抑制再脫礦能力提高。Csp與Clinpro XT Varnish聯(lián)合應(yīng)用能更有效地促進(jìn)脫礦的釉質(zhì)的再礦化，抑制再脫礦能力較單獨(dú)使用csp法及Clinpro XT Varnish強(qiáng)，為臨床治療牙釉質(zhì)脫礦提供了另一種新方法。

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