多發(fā)性硬化患者血清與腦脊液中IL-23、IL-17、TNF-α水平變化

段姝潔

多發(fā)性硬化（MS）是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病，以髓鞘脫失、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞增生、軸索病變、進(jìn)行性功能障礙為主要特征，且患者在病程中常有緩解與復(fù)發(fā)反復(fù)出現(xiàn)[1]。目前醫(yī)學(xué)界對MS的確切病因尚無統(tǒng)一解釋，多數(shù)觀點(diǎn)認(rèn)為，先天免疫調(diào)節(jié)功能紊亂與后天環(huán)境因素所致異常自身免疫應(yīng)答可能是誘發(fā)MS發(fā)生發(fā)展的主要原因[2]。最新研究發(fā)現(xiàn)，白細(xì)胞介素-23（IL-23）、白細(xì)胞介素-17（IL-17）在產(chǎn)生和維持MS髓鞘損傷中扮演了重要角色，而腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的局部促炎作用被認(rèn)為能夠反映MS的活動(dòng)性[3]。在總結(jié)過往研究結(jié)論的基礎(chǔ)上，此次研究就MS患者血清與腦脊液中IL-23、IL-17、TNF-α水平變化進(jìn)行觀察。

1　資料與方法

1.1　一般資料

37例參照第四版《神經(jīng)病學(xué)》中Poser診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]確診MS患者，入組時(shí)間2014年7月—2017年2月，入組患者無免疫調(diào)節(jié)藥物使用史，排除合并全身臟器嚴(yán)重病變、其他自身免疫性疾病、惡性腫瘤及嚴(yán)重感染者；并選取同期31名健康體檢者納入對照組。MS組男14例，女23例，年齡20～56歲，平均（37.16±5.24）歲；對照組男12例，女19例，年齡21～52歲，平均（35.92±5.38）歲。兩組受試者性別比例、年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本臨床研究已征得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，受試者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2　分組及治療方案

MS分組急性發(fā)作期為神經(jīng)功能惡化且有影像學(xué)支持，癥狀于2周內(nèi)反復(fù)發(fā)作；緩解期為急性發(fā)作期過后1個(gè)月以上[5]。22例急性發(fā)作組患者均接受注射用甲潑尼龍琥珀酸鈉（商品名甲強(qiáng)龍，美國輝瑞制藥有限公司，批準(zhǔn)文號H20130301，規(guī)格40 mg）治療，前3 d每日1次，每次40 mg；后4 d每日1次，每次20 mg，而后口服醋酸潑尼松片（商品名強(qiáng)的松，浙江仙琚制藥股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H33021207，規(guī)格5 mg×100 s），初始劑量每日60 mg，逐漸遞減，1個(gè)月后停服[7]。急性發(fā)作組患者治療期間均同時(shí)給予胃粘膜保護(hù)劑、補(bǔ)鉀補(bǔ)鈣治療[8]。

1.3　觀察指標(biāo)

各組受試者入組時(shí)及急性發(fā)作組患者治療7 d、治療28 d后抽取肘靜脈血5 mL、腦脊液3 mL，均以4000 r/min離心5 min，取上清液，分裝于分離管內(nèi)，-80℃保存，統(tǒng)一檢測[9]。血清與腦脊液中IL-23、IL-17、TNF-α檢測均采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法），試劑盒均購自美國R&D公司，操作方法嚴(yán)格按照試劑盒使用說明書。

1.4　統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS18.0軟件，性別資料以（n/%）表示，并采用χ2檢驗(yàn)，年齡、血清與腦脊液細(xì)胞因子水平等計(jì)量資料以（±s）表示，并采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1　MS組與對照組IL-23、IL-17、TNF-α水平比較

MS組血清與腦脊液中IL-23、IL-17、TNF-α均高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；急性發(fā)作組血清與腦脊液中IL-23、IL-17、TNF-α均高于緩解期組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1　MS組與對照組血清、腦脊液內(nèi)IL-23、IL-17、TNF-α水平比較（±s）

注：與急性發(fā)作組比較，*P＜0.05；與緩解期組比較，#P＜0.05

緩解期組（n=13）血清 IL-23（pg/mL） 561.39±94.85 308.13±81.97*150.36±34.81*#IL-17（pg/mL） 77.93±11.26 56.31±12.24* 35.31±4.82*#TNF-α（pg/mL） 1.52±0.23 1.00±0.19* 0.79±0.13*#腦脊液 IL-23（pg/mL） 594.36±105.28 365.52±84.63*108.59±31.36*#IL-17（pg/mL） 118.24±16.59 79.71±15.38* 30.26±4.37*#TNF-α（pg/mL） 3.17±0.58 1.89±0.50* 0.64±0.11*#部位 指標(biāo) 急性發(fā)作組（n=22）MS組（n=37） 對照組（n=31）

2.2　急性發(fā)作組治療前后IL-23、IL-17、TNF-α水平變化

急性發(fā)作組治療后血清與腦脊液中IL-23、IL-17、TNF-α均逐漸降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2　急性發(fā)作組治療前后血清、腦脊液內(nèi)IL-23、IL-17、TNF-α水平比較（±s）

表2　急性發(fā)作組治療前后血清、腦脊液內(nèi)IL-23、IL-17、TNF-α水平比較（±s）

注：與治療前比較，*P＜0.05；與治療7 d后比較，#P＜0.05

部位 指標(biāo) 急性發(fā)作組（n=22）治療前 治療7 d后 治療28 d后血清 IL-23（pg/mL） 561.39±94.85 380.44±85.49*298.85±80.13*#IL-17（pg/mL） 77.93±11.26 60.37±10.26* 55.26±11.81*#TNF-α（pg/mL） 1.52±0.23 1.33±0.15* 1.02±0.11*#腦脊液 IL-23（pg/mL） 594.36±105.28 426.47±80.83*363.18±82.59*#IL-17（pg/mL） 118.24±16.59 87.15±15.33* 78.40±14.49*#TNF-α（pg/mL） 3.17±0.58 2.26±0.40* 1.85±0.43*#

3　討論

作為一種免疫性疾病，在MS病理過程中，T細(xì)胞免疫發(fā)揮的重要作用已得到大量研究證實(shí)[10]：在病毒感染的基礎(chǔ)上，由T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)并引發(fā)的包括巨噬細(xì)胞活化、多種細(xì)胞因子分泌在內(nèi)的一連串相關(guān)免疫反應(yīng)，是引發(fā)MS及其相關(guān)視力下降、共濟(jì)失調(diào)、四肢麻木等臨床癥狀的主要原因。此次研究選取IL-23、IL-17、TNF-α三種細(xì)胞因子，就其在MS發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮的作用進(jìn)行了探討。

本研究結(jié)果表明，MS患者血清及腦脊液IL-23、IL-17、TNF-α水平均高于正常人群，且急性發(fā)作時(shí)血清與腦脊液中IL-23、IL-17、TNF-α水平顯著升高，說明Th1型CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生的IL-23、IL-17、TNF-α等細(xì)胞因子在激活巨噬細(xì)胞、介導(dǎo)遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)、引發(fā)器官特異性自身免疫組織損傷中均發(fā)揮作用。IL-23生物學(xué)作用主要依靠其P40、P19兩種亞單位與對應(yīng)受體復(fù)合物相互作用發(fā)揮[11]，IL-23與靶細(xì)胞膜上IL-23受體結(jié)合后，可激活JAK2、STAT3等信號通路，誘導(dǎo)記憶性T淋巴細(xì)胞分化為IL-17分泌細(xì)胞，進(jìn)而釋放大量前炎癥介質(zhì)，加之IL-23的趨化炎癥細(xì)胞聚集與遷移作用，血清及腦脊液中IL-23水平升高意味著強(qiáng)烈的自身免疫性炎癥反應(yīng)[12-13]。既往研究發(fā)現(xiàn)，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)，IL-23主要由小膠質(zhì)細(xì)胞和激活的吞噬細(xì)胞產(chǎn)生，但其受體僅表達(dá)于激活的吞噬細(xì)胞表面，故IL-23的組織特異性使得其在MS發(fā)病過程中扮演的角色尤為關(guān)鍵[14]，而采用抗IL-23P19抗體治療，有望在抑制MS病情惡化方面發(fā)揮積極作用[15]。

IL-17是一種強(qiáng)大的前炎癥細(xì)胞因子，也是炎癥反應(yīng)的微調(diào)因子，多數(shù)情況下，IL-17產(chǎn)生于適應(yīng)型免疫反應(yīng)，但其經(jīng)典功能主要在固有免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮作用，包括誘導(dǎo)上皮細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞大量分泌單核細(xì)胞趨化蛋白-1、IL-6、IL-8等，且可上調(diào)細(xì)胞間粘附分子-1表達(dá)，具有較強(qiáng)的致炎作用[16]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，IL-17可上調(diào)小膠質(zhì)細(xì)胞的IL-6、粘附因子表達(dá)能力，在參與免疫過程的同時(shí)，還可與TNF-α發(fā)揮協(xié)同作用，共同誘發(fā)MS癥狀的加劇[17]。因此，血清與腦脊液IL-17的監(jiān)測亦有助于MS的病情評估，而針對IL-17的免疫治療有望為MS患者預(yù)后質(zhì)量的改善提供新的思路。

TNF-α是特異性免疫應(yīng)答和急性炎癥之間的中介，主要由單核細(xì)胞和吞噬細(xì)胞分泌，通過結(jié)合相應(yīng)受體發(fā)揮調(diào)節(jié)適應(yīng)性免疫、殺傷靶細(xì)胞、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用，但TNF-α的過量表達(dá)可引發(fā)全身性毒性反應(yīng)，包括激活多形核細(xì)胞、促進(jìn)纖維蛋白溶酶激活劑分泌、上調(diào)巨噬細(xì)胞表達(dá)等，且有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，高濃度TNF-α與MS病理機(jī)制中脫髓鞘環(huán)節(jié)具有密切關(guān)聯(lián)[18]，故血清及腦脊液中TNF-α水平的升高均意味著MS的病情惡化。在本次研究中，急性發(fā)作組患者治療后血清與腦脊液IL-23、IL-17、TNF-α水平均顯著下降，說明上述指標(biāo)與MS患者病情活動(dòng)度具有一定相關(guān)性，有望成為MS病情預(yù)測、復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)評估、預(yù)后質(zhì)量判斷的輔助指標(biāo)。

綜上所述，MS患者血清與腦脊液中IL-23、IL-17、TNF-α水平均顯著升高，且其升高水平與患者病情嚴(yán)重度密切相關(guān)，根據(jù)上述細(xì)胞因子監(jiān)測結(jié)果判斷MS活動(dòng)性，并探索調(diào)節(jié)IL-23、IL-17、TNF-α的靶向治療藥物，有望為MS患者病情的控制及預(yù)后質(zhì)量的改善提供新的思路。

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