梅州香樟揮發(fā)油成分及其脂質體凝膠的制備

葉小玲,趙 瑩,張聲源,黃詩玲,聶 華

(嘉應學院 醫(yī)學院，廣東 梅州 514031)

香樟(Cinnamomumcamphora(L.)Presl)是一種四季常青的樟科植物。其廣泛分布于廣東、湖南等亞熱帶地區(qū)。由于其枝葉中富含右旋龍腦，使它成為提取右旋龍腦的重要原材料。右旋龍腦又名天然冰片[1]，即可外用又可內服，外用可清熱止痛，抑菌止癢，內服有開竅醒腦之功效，如今很多方劑中都含有冰片的成分。作為高級香料，天然冰片香氣飄逸，清香撲鼻，令人心曠神怡，素有植物麝香之美稱[2]。就目前而言，可查文獻中鮮有報道關于香樟揮發(fā)油的皮膚外用制劑[3-4]。就此本實驗用水蒸氣蒸餾法提取梅州產香樟葉子中揮發(fā)油成分，通過氣質聯(lián)用儀(GC-MS)分析梅州香樟揮發(fā)油中所含成分，并將其制成脂質體凝膠供皮膚用制劑，為梅州香樟的藥用開發(fā)提供科學參考。

1 儀器與試藥

RE-5298旋轉蒸發(fā)儀(上海亞容生化儀器廠)；SHZ-D(Ⅲ) 循環(huán)水真空泵(上海東璽制冷儀器設備有限公司)；舜宇恒平FA2104S電子天平(上海舜宇恒平科學儀器有限公司)；明澈-D24UV純水系統(tǒng)；安捷倫6820-氣相色譜儀(長沙科美分析儀器有限公司)；粒經分析儀(美國產)； 5973N氣相色譜-質譜聯(lián)用儀(美國Aglient公司)。

新鮮香樟樹葉(梅州產)；右旋龍腦對照品(購自中國藥品生物制品鑒定所)；卵磷脂(HSPC)(上海艾韋特醫(yī)藥科技有限公司)；膽固醇(CHS)(上海艾韋特醫(yī)藥科技有限公司)；羧甲基纖維素鈉(北京貝麗萊日用化工廠)蒸餾水。

2 方法

2.1 水蒸氣蒸餾法制備梅州香樟揮發(fā)油[5]

采集新鮮梅州香樟樹葉粉碎，采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油。稱取180g新鮮梅州香樟樹葉，水蒸氣蒸餾3.5h，收集餾出物后，加入過量無水硫酸鈉并充分振蕩，靜置20min。使用循環(huán)水式真空泵抽濾裝置對混合物進行抽濾，得不含水分透明液體置于蒸發(fā)皿中，待溶劑揮發(fā)即得晶體。稱量，計算揮發(fā)油的得率。

2.2 氣相色譜-質譜聯(lián)用技術分析香樟揮發(fā)油成分

取2.1項下香樟揮發(fā)油溶解于適量正己烷，采用GC-MS分析其主要成分，各組分相關濃度通過峰面積歸一化法計算求出各化合物的峰面積相對含量。

2.3 香樟揮發(fā)油脂質體凝膠的制備[7]

2.3.1 香樟揮發(fā)油脂質體的制備[8-9]

精密稱取氫化大豆磷脂40mg，膽固醇6.6mg，梅州香樟揮發(fā)油5.35mg至250mL茄形燒瓶中，加入13mL的氯仿，將燒瓶置于50℃的超聲儀中溶解3min后置于常溫40℃真空120r·min-1的旋轉蒸發(fā)儀中旋轉蒸發(fā)1h使之均勻成膜。成膜后加入5mL的PBS緩沖溶液，繼續(xù)水化30min，再將燒瓶置于50℃的超聲儀中分散5min，靜置冷卻后定容至5mL，0.45μm微孔濾膜過濾，即得香樟提揮發(fā)油脂質體。

2.3.2 香樟揮發(fā)油脂質體包封率的測定[10]

2.3.2.1 氣相色譜條件

色譜柱：ZB-WAX毛細管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)，柱流量：2.0 mL·min-1；檢測器：氫火焰離子化檢測器(FID)；載氣：N2，流量為45 mL·min-1；燃氣：H2，流量為40 mL·min-1；助燃氣：空氣，流量為450 mL·min-1；進樣口溫度：200 ℃；檢測器溫度：280 ℃；進樣量：1 μL；分流進樣。分流比為10∶1；程序升溫：初始溫度為120 ℃，保持10 min，以20 ℃·min-1升至200 ℃，保持4 min。在上述條件下，右旋龍腦峰與內標峰及其他雜質峰達到基線分離，分離度均>1.5，理論塔板數(shù)按右旋龍腦計算應不低于2000。

2.3.2.2 標準曲線的建立

精密稱取干燥至恒重的右旋龍腦對照品0.1250 g于25 mL容量瓶中，加入無水乙醇定容至刻度，即得對照品母液。精密吸取上述對照品母液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL，分別置10 mL容量瓶中，各加上述內標液1 mL，再加無水乙醇至刻度，搖勻。取1 μL注入GC儀，最終結果以右旋龍腦濃度為橫坐標，以右旋龍腦峰面積為縱坐標，進行線性回歸。

2.3.2.3 包封率實驗

精密吸取2.3.1項下所制備的脂質體4.0mL在10000r/min的條件下離心30min，記錄上層清夜的體積，可測出游離藥含量w；取下層沉淀用1.5mL無水乙醇破膜，在5000r/min條件下離心15min，取上層清夜測含量W，并記錄體積。包封率計算公式如下：

包封率E=W/(w+W)×100%

2.3.3 香樟揮發(fā)油脂質體粒徑的測定

將2.3.1項下所制備的脂質體適量置于粒徑分析儀，測定脂質體粒徑。

2.3.4 香樟揮發(fā)油脂質體凝膠的制備

取適量CMC-Na，加入適量的乙醇和水，放置過夜，使其充分溶脹，攪拌均勻，得無色透明的膠狀物質。取2.3.1項下脂質體適量加入溶脹好的羧甲基纖維素鈉中，再加入2ml的甘油，研磨均勻，即得香樟提取物脂質體凝膠。

3 結果與分析

3.1 梅州香樟揮發(fā)油的提取及其化學成分

采用水蒸氣蒸餾法對新鮮的梅州香樟樹葉進行提取，計算出其提取率平均值為2.01%。

通過GC-MS鑒定出梅州香樟揮發(fā)油中主要含有右旋龍腦(78.56%)和樟腦油(21.07%)，還有極少量的桉葉油醇、alpha-松油醇和α-石竹烯。結果顯示，梅州香樟樹葉揮發(fā)油的右旋龍腦含量還是可觀的。

目前梅州地區(qū)廣泛生長的梅片植物，其樹葉揮發(fā)油中就富含天然右旋龍腦，含量達70.81%，且揮發(fā)油提取率為0.58%。但本實驗結果表明，與梅片樹葉相比，采用同樣的水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，梅州香樟輸液中揮發(fā)油的提取率更高達到2.01%，且揮發(fā)油中右旋龍腦的含量更高，達到78.56%。加上香樟這種植物在環(huán)境中生長區(qū)域廣，因此香樟可作為梅州生產右旋龍腦的重要原材料。

3.2 梅州香樟揮發(fā)油脂質體凝膠的制備結果

3.2.1 外觀

經薄膜分散法制備的梅州香樟揮發(fā)油脂質體為乳白色液體，加藥后進一步制得含藥凝膠為無色透明的半固體凝膠狀。

3.2.2 包封率

按2.3.2.2項下方法測定，以右旋龍腦濃度為橫坐標，以不同濃度右旋龍腦峰面積為縱坐標，進行線性回歸得Y=0.5611X+0.0085(r=0.9996，n=6)。結果表明右旋龍腦濃度在0.2～0.7 mg/mL-1范圍內藥物濃度與峰面積呈良好線性關系。按2.3.2.3項下方法測定藥物濃度，平均包封率為84.6%(n=3)。

3.2.3 粒徑

按2.3.3項下方法測得含藥脂質體粒度大小均勻，平均粒徑為135.1nm。將脂質體冷藏1周后測定，外觀、包封率和粒徑無變化。

4 結論

本實驗取材于梅州地區(qū)生長的香樟植物，取其新鮮樹葉通過水蒸氣蒸餾法提取樹葉揮發(fā)油，并采用氣相色譜-質譜聯(lián)用儀分析所得揮發(fā)油的化學組分及其含量，進一步將梅州香樟揮發(fā)油制成脂質體凝膠。實驗結果表明，梅州香樟樹葉揮發(fā)油水蒸氣蒸餾法提取率可達到2.01%；氣相色譜-質譜聯(lián)合分析可知，該揮發(fā)油主要含有右旋龍腦(78.56%)和樟腦油(21.07%)；進一步制得該揮發(fā)油脂質體凝膠包封率為84.6%(n=3)，平均粒徑為135.1nm。本實驗結果表明梅州香樟可以作為生產天然右旋龍腦原材料來源，而且可進一步加工制成脂質體凝膠制劑應用皮膚科疾病治療，具有廣闊的應用前景。

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