甲硝唑、克霉唑?qū)呋旌习咔傲邢偬禺惪乖瓩z驗的影響

劉振平，潘之侃，翟仙敦，傅燕芳，吳微微

1962年，Garaway首先提出某些治療藥物可以影響體液中多種成分濃度的檢測，這個問題受到了越來越多生化學(xué)家、檢驗工作者及臨床醫(yī)師的廣泛關(guān)注。對檢驗結(jié)果有影響的藥物，目前已達40 000多種[1]。

前列腺特異抗原(prostate-specific antigen,PSA)檢驗是法醫(yī)精斑確證試驗的首選方法。性侵案件中，由于受害人的隨機性，不可避免存在受害人有陰道用藥情況。為驗證這些藥物是否對PSA檢驗結(jié)果產(chǎn)生影響，實驗室在已知PSA濃度的精斑混合液中加入常用陰道藥物甲硝唑、克霉唑，觀察加藥前后PSA測量值有無變化，現(xiàn)報道如下。

1　材料與方法

1.1藥物分別將藥物粉碎，使用天平稱重，在0.01～0.08 g之間設(shè)置5個梯度，置于eppendorf管中備用，本次實驗所用藥物主要技術(shù)參數(shù)，摘自藥物使用說明，見表1。

表1　兩種實驗用藥物一般情況

1.2儀器全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(雅培i2000，美國)；天平(賽多利斯CP225D，德國)；抗體(雅培公司，試劑批號：64214FN00)；PSA金標試劑條(biowin，符合GA766-2008)

1.3已知濃度精斑制備日常受理案件中已知人精斑混合斑，超純水稀釋后使用化學(xué)發(fā)光免疫分析儀對PSA定量，終濃度分別為124.990 ng·mL-1、8.737 ng·mL-1兩種。

1.4方法在裝有不同量的克霉唑、甲硝唑粉劑的eppendorf管中，分別加入濃度為124.990 ng·mL-1、8.737 ng·mL-1的PSA稀釋液500 μL，藥物終濃度為0.022 6～0.153 2 g·mL-1，37 ℃孵育30 min，期間每隔5 min震蕩混勻。離心取上清200 μL，化學(xué)發(fā)光免疫分析儀定量檢測；同時進行金標試劑條PSA檢驗。

2　結(jié)果

已知濃度的PSA溶液加入藥物后檢測，克霉唑最低濃度為0.024 6 g·mL-1，最高濃度為0.152 4 g·mL-1；甲硝唑最低濃度為0.022 6 g·mL-1，最高濃度為0.153 2 g·mL-1。PSA定量值明顯下降，且下降值和加入的藥物量呈正相關(guān)，兩種藥物相比，克霉唑下降更明顯。金標法PSA檢驗與定量檢驗結(jié)果下降趨勢一致。 PSA定量值為7.399～8.141 ng·mL-1時，金標試劑條檢驗為弱陽性，PSA定量值為4.790 ng·mL-1時，金標試劑條表現(xiàn)為陰性，見表2。

表2　已知精斑與藥物混合后PSA檢驗結(jié)果

3　討論

PSA系成熟的男性前列腺及尿道周圍腺體上皮細胞產(chǎn)生的絲氨酸蛋白酶，也稱為E1蛋白、γ-精漿蛋白、P30、PA等[2]，具有高度的器官特異性和種屬特異性，能正確區(qū)別動物精斑與人類精斑[3]，尤其適用于輸精管結(jié)扎術(shù)后及精子缺乏個體的精斑檢驗[4-5]。因此，對混合斑進行PSA檢驗為大多數(shù)法醫(yī)物證實驗室精斑確證實驗的首選方法，并可根據(jù)PSA檢測結(jié)果制定下一步的檢驗方案[6]。

PSA試驗陰性，表示待測樣品中不存在精斑[3]。但在法醫(yī)實踐中，PSA試劑條陰性卻檢出男性DNA分型的現(xiàn)象時有報道[7-11]，楊思思等報道分析水中尸體PSA試劑條陰性但檢出男性精子DNA分型的原因考慮為PSA水中溶解、腐敗[8]，王智等考慮為被女性陰道內(nèi)的蛋白酶破壞[11]，并未對形成原因做進一步實驗性驗證。作者所在實驗室也存在上述現(xiàn)象，通過對本地案件回訪發(fā)現(xiàn)，部分受害人案發(fā)前后有陰道用藥的行為。

為進一步驗證陰道用藥與PSA測量值的相關(guān)性，本研究采用將藥物加入到已知濃度的精斑中，觀察加藥前后PSA定量值是否有變化。藥物選用甲硝唑、克霉唑(主要是因為陰道炎是婦科陰道類疾病中最為常見的疾病[12]，對上述疾病治療通常采用甲硝唑、替硝唑類栓劑、克霉唑片劑等類型藥物抗治療)。PSA定量檢測濃度在0.001～1 000 ng·mL-1均能正確進行定量。為便于觀察藥物作用前后定量結(jié)果的不同和驗證金標PSA試劑條的靈敏度，將已知人精斑混合斑稀釋成高低兩個濃度，分別為124.990 ng·mL-1、8.737 ng·mL-1兩種。藥物使用量在0.01～0.08 g之間，明顯低于說明書中的單次用藥量。試驗過程則模擬陰道用藥溶解后直接與PSA接觸的方式，將藥物粉碎后直接加入到含有人PSA的精斑浸泡液中，37 ℃孵育30 min，期間適時對混合液進行搖勻。

本研究結(jié)果，甲硝唑、克霉唑可以影響精斑混合斑中PSA濃度的檢測，加入藥物后，定量檢測值明顯下降。分析原因可能為加入的藥物使前列腺特異抗原結(jié)構(gòu)或者帶有熒光標記的抗體發(fā)生結(jié)構(gòu)改變，使得帶有熒光標記的抗體與抗原不能結(jié)合，定量值下降；PSA定量值為7.399～8.141 ng·mL-1時金標試劑為弱陽性，PSA定量值為4.790 ng·mL-1時金標試劑為陰性，分析認為金標試劑條靈敏度約5 ng·mL-1。

本實驗中，定量值為8.737 ng·mL-1的低濃度的PSA溶液，加入實驗藥物后PSA金標試劑條均表現(xiàn)為陰性，但定量法均能夠檢出。在本實驗室實際工作中，在對1例未知名女尸體陰道拭子進行檢驗時金標試劑條陰性，卻檢出微量精子DNA分型，后通過定量補測PSA濃度為0.491 ng·mL-1。因此，在法醫(yī)實踐中，使用金標法試劑條檢驗精斑時，如存在藥物等影響PSA的因素，檢驗時應(yīng)采取各種措施提高檢材浸泡液中的PSA濃度，如增加檢材量、減少浸泡液體積、延長浸泡時間等，避免PSA濃度低于試劑條靈敏度造成陰性而漏檢。為了更客觀、真實地描述檢材中的PSA量，有能力的實驗室應(yīng)引進準確性更高的現(xiàn)代化定量檢測設(shè)備，出具鑒定文書時，同時對檢測方法的靈敏度進行描述。

此外，實驗室還對市售婦科洗液婦炎潔與已知濃度的PSA溶液進行混合后定量檢測，結(jié)果顯示也可導(dǎo)致定量值下降，考慮到洗液大部分為中藥配方且成分復(fù)雜，其對PSA的影響實驗室將進一步研究并再做報道。

綜上，陰道藥物甲硝唑、克霉唑可使精斑混合斑中的PSA檢測值下降，金標試劑條表現(xiàn)為陰性，在法醫(yī)實踐中應(yīng)當(dāng)引起重視。對強奸案件進行受理檢驗時，除詳細了解案情、作案經(jīng)過外，還應(yīng)對受害人的身體狀況進行了解，詳細詢問受害人案發(fā)前后有無婦科用藥、具體用藥種類、具體洗液類型等，以免漏檢，并為案件的偵查起訴提供更多信息。

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