基于PLGA聚合物納米膠束用于癌癥治療研究進(jìn)展

楊成莉，王 月，何 俊，曾凡群

(1.遵義醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，貴州 遵義 563099；2遵義醫(yī)學(xué)院 鳳岡縣聯(lián)合生物資源健康利用研究所，貴州 遵義 563099；3 遵義醫(yī)學(xué)院 醫(yī)學(xué)與科技學(xué)院，貴州 遵義 563099)

癌癥是危害人類健康的公敵之一，目前尚無讓人十分滿意的癌癥治療方法，化學(xué)治療仍然是臨床治療癌癥的首選方案，但是大多數(shù)化學(xué)治療藥物在殺傷癌癥細(xì)胞的同時對正常細(xì)胞也會造成傷害。隨著分子生物學(xué)研究進(jìn)展，許多生物大分子如多肽、核酸、蛋白質(zhì)等被用于癌癥治療，但這些生物大分子多為高度親水性的大分子物質(zhì)，在生理?xiàng)l件下帶負(fù)電荷，而細(xì)胞膜的磷脂雙分子層也是帶負(fù)電荷的，目的基因難以通過細(xì)胞膜進(jìn)入靶細(xì)胞，且目的基因或多肽單獨(dú)使用時很容易受到核酸酶或者蛋白酶的裂解，必須通過相應(yīng)的載體保護(hù)才能保持其有效性和完整性。隨著制劑技術(shù)研究進(jìn)展，越來越多新型載體被用于癌癥藥物或生物大分子的遞送，如納米粒、脂質(zhì)體、聚合物膠束等[1-3]。

聚乳酸-羥基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycolicacid),PLGA]是一類生物可降解的高分子聚合物，是由乳酸(LA)和羥基乙酸(GA)這兩種單體按照不同比例縮聚而成，并且通過了美國FDA批準(zhǔn)，現(xiàn)已廣泛地應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域[4]。以PLGA材料作為藥物載體具有良好的生物相容性、生物可降解性、合成簡單、穩(wěn)定性高、機(jī)械強(qiáng)度大、降解速度可調(diào)節(jié)以及可塑性良好等特點(diǎn)[5]，所以基于PLGA材料的載體如PLGA納米粒、脂質(zhì)包裹PLGA納米粒、PLGA聚合物膠束等在近幾年癌癥的診斷和治療中成為了研究的熱點(diǎn)。本文主要介紹以PLGA制備聚合物納米膠束作為載體用于癌癥治療的研究進(jìn)展。

1 聚合物納米膠束概述

1.1 定義及分類 聚合物納米膠束是指兩親性嵌段聚合物在水溶液中由非共價鍵(氫鍵、配位鍵、范德華力、靜電作用、溶劑效應(yīng)、親疏水作用等)通過自組裝形成具有一定結(jié)構(gòu)的功能體系[6]。早在1984年，Bader等人即制備膠束作為藥物載體進(jìn)行研究[7]。按照內(nèi)核的分子間作用力不同，可將膠束分為：①兩親性膠束；②金屬絡(luò)合物膠束；③聚離子復(fù)合型膠束三類。

1.2 優(yōu)點(diǎn) 聚合物膠束作為基因載體存在一些顯著優(yōu)點(diǎn)，如：①穩(wěn)定性好，可保護(hù)藥物如基因在體內(nèi)免受核酸酶降解，延長藥物體內(nèi)循環(huán)時間[8]；②聚合物膠束相較于小分子表面活性劑膠束，臨界膠束濃度(critical micelle concentration，CMC)較低，具有高度的熱力學(xué)和動力學(xué)穩(wěn)定性[9]；③聚合物膠束往往是親水片段聚合成為內(nèi)核，親水片段包裹于外部形成親水外殼，親水外殼能躲避網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(reticuloendothelial system，RES)識別吞噬，疏水內(nèi)核能裝載水不溶性藥物，具有較高的載藥能力[10]；④聚合物膠束粒徑多數(shù)為幾十納米，直徑與病毒或者脂蛋白相似，更容易躲避RES系統(tǒng)，且該粒徑能較好通過實(shí)體瘤高通透性和滯留效應(yīng)(enhanced permeability and retention effect，EPR)，被動靶向于癌癥部位，Pedram Rafiei等通過制備載多西他賽(Docetaxel,DOC)的PLGA納米粒及PLGA-PEG納米膠束，對比兩者的體內(nèi)藥物動力學(xué)及體內(nèi)分布情況，結(jié)果顯示，載DOC-PLGA-PEG納米膠束具有更長的體內(nèi)循環(huán)時間，更高的血藥濃度，且其粒徑更小，在腫瘤部位靶向效果更為明顯[11]；⑤可對聚合物膠束親水外殼化學(xué)修飾，實(shí)現(xiàn)主動靶向。

2 基于PLGA的聚合物納米膠束的合成

生物可降解聚合物PLGA由于具有良好的生物相容性、生物可降解性、穩(wěn)定性、藥物緩釋性、控釋性、刺激性小、無免疫原性、藥物作用時間長、毒副反應(yīng)低和易于表面修飾等特性[12]。因此，基于PLGA材料制備成納米聚合物膠束、微囊、納米粒、脂質(zhì)包裹納米粒等在近十多年來具有極為廣泛的研究。

聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)，聚醚酰亞胺(Polyetherimide,PEI)是目前為止最為常用的嵌段共聚物親水端，許多合成的含PEG的嵌段共聚物已經(jīng)得到實(shí)際應(yīng)用，比如PLA-PEG、PCL-PEG等[13-15]，PEI作為親水端時最常用于核酸、蛋白質(zhì)遞送，而PLGA作為疏水性高分子在藥物載體中常作為疏水端。PLGA納米膠束有以下優(yōu)點(diǎn)：載藥范圍廣、粒度均一、不良反應(yīng)少、作用時間長、制備過程簡單、制作成本低等。

按照PLGA與PEG嵌段共聚物合成片段可分為兩嵌段共聚物、三嵌段共聚物、星型共聚物以及接枝共聚物等多種形式，本文主要介紹兩嵌段、三嵌段、星型嵌段共聚物3種。

2.1 兩嵌段PLGA共聚物 基于PLGA材料的兩嵌段共聚物最常見為PLGA-PEG，在合成PLGA-PEG制備方法中，最常用方法為以PEG-NH2及PLGA為原料，采用DCC縮合法，在三乙胺作催化劑以N,N-二甲基甲酰胺(N,N-Dimethylformamide,DMF)作用下，通過脫水形成酰胺鍵，制備不同嵌段比的PLGA-PEG的PLGA兩嵌段共聚物[16]。合成路線見圖1A。

2.2 三嵌段PLGA共聚物 三嵌段PLGA共聚物可分為PEG-PLGA-PEG、PLGA-PEG-PLGA兩種形式。PLGA-PEG-PLGA最常采用以PEG作為大分子引發(fā)劑引發(fā)D，L-丙交酯和乙交酯開環(huán)聚合所得[17]。也有研究通過PLGA與NH2-PEG-NH2，采用DCC縮合法制得[18]，與兩嵌段聚合物制備方法類似。合成路線見圖1B。

2.3 星型嵌段共聚物 星型多臂兩親性嵌段共聚物4s-PLGA-PEG目前常用的制備方法為通過封管本體熔融聚合法首先合成4s-PLGA，即采用丙交酯與乙交酯在引發(fā)劑戊四醇及催化劑Sn(Oct)2的作用下制備4s-PLGA，再與NH2-PEG-NH2采用DCC縮合法制備而得[19]。合成路線見圖1C。

3 基于PLGA聚合物納米膠束載藥方法

聚合物納米膠束載藥方式大致分為兩類：一種是將藥物通過物理作用力如：疏水作用、氫鍵、范德華力、靜電作用被動包埋于膠束疏水/親水內(nèi)核中；另一種為通過化學(xué)鍵將藥物與材料以共價鍵形式結(jié)合，形成化合物，自組裝形成。由于第二種主要與具體藥物和載體化學(xué)結(jié)構(gòu)相關(guān)，本研究主要討論第一種被動包埋藥物的載藥方法。

3.1 直接溶解法 該方法是將疏水性藥物與PLGA嵌段共聚物直接溶解在水相中，通過藥物與材料自組裝形成膠束，對某些疏水性稍差的藥物，可通過加熱水相促使水分子間氫鍵斷裂形成膠束。如將PLGA-PEG-PLGA三嵌段共聚物通過直接溶解法制備載多西他賽共聚物納米膠束[20]。制備路線見圖2(A)。

3.2 透析法 該方法將PLGA聚合物與藥物共同溶解在能與水互溶的有機(jī)溶劑中，然后將混合物溶液置于水中透析，通過透析緩慢除去有機(jī)相，促進(jìn)膠束形成。如有研究通過透析法采用PLGA-PEG-PLGA制備載姜黃素聚合物膠束，采用PEG-PLGA，通過透析法共載吳茱萸堿及Fe3O4磁性納米粒子[21-22]。制備路線見圖2(B)。

3.3 乳化法 該方法又稱為溶劑擴(kuò)散法或溶劑蒸發(fā)法，通過將藥物及PLGA聚合物膠束溶解于有機(jī)溶劑，或?qū)LGA聚合物膠束溶解于有機(jī)溶劑，親水藥物溶解于水相中，通過超聲或者攪拌乳化形成小乳滴之后，采取減壓蒸發(fā)或擴(kuò)散除去有機(jī)溶劑，該方法最為常用。如有研究采用乳化溶劑揮發(fā)法制備載米托蒽醌PLGA聚合物膠束[23]。制備路線見圖2(C)。

3.4 溶劑揮發(fā)法 該方法主要將嵌段共聚物與藥物溶于有機(jī)溶劑，待有機(jī)溶劑揮發(fā)后在瓶壁形成薄膜，在適度熱水環(huán)境中聚合物與藥物相互作用形成膠束體系。如有研究采用溶劑揮發(fā)法制備PLGA聚合物膠束用于包載多西他賽治療乳腺癌，獲得很好的效果[24]。制備路線見圖2(D)。

A：直接溶解法;B：透析法;C：乳化法;D：溶劑揮發(fā)法。圖2 不同方法制備PLGA聚合物膠束技術(shù)路線示意圖

4 PLGA聚合物納米膠束載藥應(yīng)用

PLGA嵌段共聚物具有良好的生物降解性及生物相容性，其同時具有親水及疏水片段，作為藥物載體有極大的優(yōu)勢。

4.1 PLGA聚合物納米膠束用于小分子化學(xué)藥物傳送 PLGA聚合物納米膠束在親水溶劑中，其疏水端自組裝將疏水性小分子化療藥物包裹于膠束內(nèi)核，對增強(qiáng)疏水藥物溶解度有很好的效果。目前針對PEG-PLGA共聚物及修飾后的共聚物作為小分子化學(xué)藥物載體研究報道極為廣泛。

普卡霉素A(Mirhramycin A,MIT)是由鏈霉菌或S.684號菌株培養(yǎng)液中提取的抗生素，是一類金色酸型聚酮類化合物。其在臨床用于多種癌癥治療，近年來研究表明其通過抑制腫瘤轉(zhuǎn)錄因子Sp1對胰腺癌有良好的治療效果，但其系統(tǒng)性毒性限制了它的體內(nèi)應(yīng)用。Liu等通過以mPEG-PLGA為材料制備納米聚合物膠束包載普卡霉素-A(MIT-NPs)作用于胰腺癌細(xì)胞BxPC-3 細(xì)胞，結(jié)果表明MIT-NPs對MIT載藥量達(dá)到2.11%±0.51%，MIT對BxPC-3細(xì)胞抑制率達(dá)到96%，且對BxPC-3荷瘤小鼠也具有較高的體內(nèi)抑制效果[25]。表明PLGA聚合物膠束包載藥物具有較高的載藥量從而提高藥物的生物利用度，降低小分子藥物的毒副作用。

除此之外，還可將PLGA聚合物膠束表面連接配體，制備主動靶向膠束，進(jìn)一步增強(qiáng)其體內(nèi)靶向抗癌效果。阿霉素(Doxorubin,DOX)作為一個經(jīng)典的抗癌化療藥物由于其低水溶性及高心臟毒性導(dǎo)致使用受到極大限制，包載阿霉素的各種制劑也有非常廣泛的報道。Chen等制備葉酸修飾的載阿霉素PLGA-PEG納米聚合物膠束(PLGA-PEG-FA)，該載藥系統(tǒng)具有葉酸的主動靶向作用與實(shí)體瘤對納米膠束的EPR效應(yīng)，不僅毒性較低且激光共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)載DOX的納米膠束(DOX-loaded PLGA-PEG-FA)對腫瘤細(xì)胞靶向作用較好[26]。通過PLGA聚合物膠束包載藥物，并對其進(jìn)行靶向修飾，能提高藥物體內(nèi)靶向治療效果，降低藥物毒性。

PLGA聚合物膠束除了包載單一藥物之外，包載兩種及以上的藥物用于聯(lián)合治療也有廣泛研究，如He等利用葉酸修飾PLGA-PEG靶向聚合物膠束同時包載紫杉醇及順鉑用于非小細(xì)胞肺癌治療，對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549及其荷瘤小鼠均有良好的抑制作用[27]。

除直線型膠束研究應(yīng)用較廣外，星型PLGA聚合物膠束也有較多研究。如雷帕霉素(Rapamycin)為抗真菌和免疫抑制劑，是一種 mTOR蛋白特異性抑制劑，其通過誘導(dǎo)自噬有一定抗癌作用， Zhu等通過制備星型PLGA聚合物膠束(3S-PLGA-PEG)載雷帕霉素獲得較高得包封率和較低的毒性[28]。

4.2 PLGA聚合物納米膠束用于生物大分子藥物傳送 隨著生物大分子如蛋白質(zhì)、多肽、核酸等逐漸應(yīng)用于癌癥治療研究中，能保護(hù)核酸、蛋白質(zhì)等免受體內(nèi)核酸酶和相關(guān)蛋白酶的水解，提高生物利用度?；赑LGA聚合物的納米膠束用于遞送生物大分子的研究報道也越來越廣泛。

近年研究表明MicroRNA(miRNAs)在腫瘤細(xì)胞生長的多個過程中具有調(diào)節(jié)作用[29]。一些miRNAs的過度表達(dá)通過刺激癌細(xì)胞生長，促進(jìn)腫瘤的發(fā)展；這些miRNAs被稱為oncomiRs[30]。因此調(diào)節(jié)oncomiRs或者miRNAs的表達(dá)成為腫瘤治療的新思路。Anti-miRs通過與目標(biāo)miRNA不可逆結(jié)合以限制miRNA的功能從而阻礙癌細(xì)胞的生長，MiRNA-21就是其中之一[31]。為此，Rammohan Devulapally等通過制備PLGA-PEG聚合物膠束，同時包載MiRNA-21及抗癌藥物吉西他濱用于肝癌治療，獲得良好的實(shí)驗(yàn)治療效果[32]。

除RNA之外，DNA應(yīng)用于癌癥治療也非常廣泛，如RIP3，MLKL，Msurvivin-T34A質(zhì)粒等[33-35]。故關(guān)于DNA遞送研究也較多，Jian-Ming Lü等以綠色熒光蛋白質(zhì)粒為模型DNA，討論對不同PLGA：PEI比例對DNA的裝載能力，結(jié)果顯示PLGA-PEI可通過自組裝形成納米膠束，對DNA包載能力極高，具有較高的體外轉(zhuǎn)染能力及體內(nèi)靶向作用[36]。

5 PLGA聚合物納米膠束應(yīng)用前景

綜上所述，PLGA聚合物納米膠束由于其具有良好的生物相容性、生物可降解性以及兩親性，能同時包載疏水及親水的小分子化合物以及生物大分子如核酸、多肽等，提高小分子化合物的生物利用度，降低其毒性，保護(hù)核酸及蛋白質(zhì)不受水解。對腫瘤治療藥物傳送有極大的用途。除腫瘤之外，PLGA聚合物膠束還用于其他疾病的治療研究也較多報道，如包載甲氨蝶呤治療骨質(zhì)疏松、包載醋酸地塞米松治療氧化低密度脂蛋白導(dǎo)致的內(nèi)皮細(xì)胞損傷等[37- 38]。

雖然PLGA聚合物納米膠束作為藥物載體在近年來取得突飛猛進(jìn)的發(fā)展，但仍然存諸多問題，如：對許多藥物的載藥量低，導(dǎo)致其生產(chǎn)成本高，工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)難度大等。其載藥量低可能是限制載藥PLGA聚合物納米膠束在臨床試驗(yàn)中使用的主要障礙之一。

總體來說，PLGA聚合物納米膠束是一種極具潛力的聚合物載體,目前其在體外細(xì)胞水平上的藥物傳遞和表達(dá)以及體內(nèi)腫瘤靶向已取得了較為滿意的成果，盡管仍然存在一些缺陷，但隨著材料科學(xué)以及制劑技術(shù)的不斷發(fā)展，國內(nèi)外科研工作者的共同努力，我們相信，人們終將開發(fā)出理想的PLGA載體并將其成功的應(yīng)用于臨床，這將為人類克服各種重大疾病帶來福音。

[1] Chen Y,Li Y,Gao J B,et al.Enzymatic PEGylated poly(lactone-co-β-aminoester) nanoparticles as biodegradable,biocompatible and stable vectors for gene delivery[J].ACS Appl Mater Interfaces,2016,8(1):490-501.

[2] Pavlov A M,Sukhorukov G B,Gould D J.Location of molecules in layer-by-layer assembled microcapsules influences activity,cell delivery and susceptibility to enzyme degradation[J].J Control Release,2013,172(1):22-29.

[3] 何勤,唐潔,劉亞圓，等.還原敏感性納米制劑在腫瘤靶向傳遞中的應(yīng)用[J].遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2015,38(4):321-331.

[4] 付敏,徐希明,余江南.PLGA多孔支架的制備及在基因傳遞系統(tǒng)中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].藥學(xué)進(jìn)展,2013,3(8):376-382.

[5] 陳紅麗,秦靖雯,南文濱,等．多功能化乳酸-羥基乙酸共聚物納米粒作為抗腫瘤藥物載體研究進(jìn)展[J].新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2016,33(5):349-351

[6] 榮利,張彥燾,胡巧紅.天然高分子聚合物膠束的研究進(jìn)展[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué),2010,27(13):1182-1187.

[7] Hubert B,Helmut R,Brigitta S,et al.Water soluble polymers in medicine[J].Die Angewandte Makromolekulare Chemie,1984,123(1):457-485.

[8] Allen C ,Han J,Yu Y,et al.Pol- ycaprolactone-b-poly(ethylene oxide) copolymer micelles as a delivery vehicle for dihydrotestosterone[J].J Control Release,2000,63(3):275-286.

[9] Ohyay C,Nishizawa H,Hara K,et al.Preparation of PEG-grafted chitosan nanoparticles as peptide drug carriers[J].STP Pharma Sciences,2000,10(1):7-82.

[10]Kazunori K,Glenn S K,Masayuki Y,et al.Block copolymer micelles as vehicles for drug delivery[J].J Control Release,1993,24(3):119-132.

[11]Rafiei P,Haddadi A.Docetaxel-loaded PLGA and PLGA-PEG nanoparticles for intravenous application:pharmacokinetics and biodistribution profile[J].Int J Nanomedicine,2017,12:935-947.

[12]Park J,Fong P M,Lu J,et al.Paclitaxel-loaded PEGylated PLGA-based nanoparticles in vitro and in vivo evaluation[J].J Control Release,2009,133(1):11-17.

[13]Riley T,Stolnik S,Heald C R,et al.Physicochemical evaluation of nano- particles assembled from poly(lactic acid)-poly(ethylene glycol) (PLA-PEG) block copolymer asdrug delivery vehicles[J].Langmuir,2001,17(11):3168-3174.

[14]Shuai X T,Thomas M,Florian U,et al.Novel biodegradable ternary copolymers hy-PEI-g- PCL-b-PEG:synthesis,characterization,and potential as efficient nonviral gene delivery vectors[J].Macromolecules,2003,36(15):5751-5759.

[15]Min J H,Ju M S,You H B,et al.Caprolactonic poloxamer analog:PEG-PCL-PEG[J].Biomacromolecules,2005,6(2):885-890.

[16]Chen J,Wu Q,Luo L,et al.Dual tumor-targeted poly(lactic-co-glycolic acid)-polyethylene glycol-folic acid nanoparticles:a novel biodegradable nano- carrier for secure and efficient antitumor drug delivery[J].Int J Nano medicine,2017,12:5745-5760.

[17]董曉明,袁寶明,陳炳鵬，等.載萬古霉素PLGA-PEG-PLGA溫度敏感水凝膠的體外抗菌性能[J].高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué)報,2017,38(5):866-871.

[18]Gajendiran M，Gopi V，Elangovan V,et al.Isoniazid loaded core shell nanoparticles derived from PLGA-PEG-PLGA tri-block copolymers:In vitro and in vivo drug release[J].Colloids and Surfaces,B.Biointerfaces,2013,104(1):107-115.

[19]馬桂蕾,趙順新,金旭，等.葉酸修飾星型端氨基PEG．PLGA納米膠束的制備及腫瘤細(xì)胞靶向作用[J].高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué)報,2012,33(8):1853-1859.

[20]黃靜,魏洪芬,楊菁，等.多西他賽共聚物納米膠束的制備及性能研究[J].生物醫(yī)學(xué)工程與臨床,2011,15(2):99-102.

[21]宋佳蓉,馮潤良,宋智梅，等.姜黃素PLGA-PEG-PLGA膠束的制備及理化性質(zhì)研究[J].山東科學(xué)，2013,26(5):39-46.

[22]王巖,王笑英,呂言云，等.共同裝載吳茱萸堿和Fe304納米粒子的磁性藥物載體的制備[J].高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報,2013,3(12):2866-2870.

[23]Li Z Y,Cai Y,Zhao Y Q,et al.Polymeric mixed micelles loaded mitoxantrone for overcoming multidrug resistance in breast cancer via photo-dynamic therapy[J].Int J Nanomedicine,2017,12:6595-6604.

[24]Tan L W,Peng J R,Zhao Q，et al.A Novel MPEG-PDLLA-PLL Copolymer for Docetaxel Delivery in Breast Cancer Therapy[J].Theranostics,2017,7(10):2652-2672.

[25]Liu X J,Li L,Liu X J，et al.Mithramycin-loaded mPEG-PLGA nanoparticles exert potent antitumor efficacy against pancreatic carcinoma[J].Int J Nanomedicine,2017,12:5255- 5269.

[26]Chen J,Wu Q,Luo L,et al.Dual tumor-targeted poly(lactic-co-glycolic acid)-polyethylene glycol-folic acid nanoparticles:a novel biodegradable nanocarrier for secure and efficient antitumor drug delivery[J].Int J Nanomedicine,2017,12:5745-5760.

[27]He Z L,Huang J W，Sun W J，et al.Co-delivery of cisplatin and paclitaxel by folic acid con- jugated amphiphilic PEG-PLGA copolymer nano- particles for the treatment of non-small lung cancer[J].Oncotarget,2015,6(39):42150-42168.

[28]Zhu X W,Liu C,Yang J，et al.Synthesis of three-arm block copolymer poly(lactic-co- glycolic acid)-poly(ethylene glycol) with oxalyl chloride and its application in hydrophobic drug delivery[J].Int J Nanomedicine,2016,11:6065-6077.

[29]Yang W,Lee D Y,Ben D Y.The Roles of MicroRNAs in Tumorigenesis and Angiogenesis[J].J Physiol Pharmacol,2011,3(2):140-155.

[30]Devulapally R,Paulmurugan R.Polymer nanoparticles for drug and small silencing rna delivery to treat cancers of different phenotypes[J].Wiley Interdiscip Rev Nanomed Nanobiotechnol,2014,6(1):40-60.

[31]Meng F,Henson R,Wehbe-Janek H，et al.MicroRNA-21 regulates expression of the PTEN tumor suppressor gene in human hepatocellular cancer[J].Gastroenterology,2007,133(2):647-658.

[32]Rammohan D,Kira F,Ramasamy P,et al.Gemcitabine and Antisense-microRNA Co-encapsulated PLGA-PEG polymer nanoparticles for hepatocellular carcinoma therapy[J].Acs Appl Mater Interfaces ,2016,8(49):33412-33422.

[33]Koo B G,Morgan M J,Lee D G,et al．Methylation-dependent loss of RIP3 expression in cancer represses programmed necrosis in response to chemo- therapeutics [J].Cell Res,2015,25(6):707-725.

[34]Wang X,Li Y,Liu S,et al．Direct activation of RIP3/MLKL-dependent necrosis by herpes simplex virus 1 (HSV-1) protein ICP6 triggers host antiviral defense[J]．Proc Natl Acad Sci USA,2014,111(43):15438-15443.

[35]Yang C L,Hu T T,Cao H,et al.Chloroquine containing PLGA based pDNA delivery system for tumor and inflammatory targeting in vitro and in vivo[J].Mol Pharm,2015,12(6):2167-2179.

[36]Lü J M,Liang Z D,Wang X X,et al.New polymer of lactic-co-glycolic acid-modified polyethylenimine for nucleic acid delivery[J].Nanomedicine,2016,11(15):1971-1991.

[37]Zhao J L,Zhao M H,Li Y X,et al.Multifunctional folate receptor-targeting and pH responsive nanocarriers loaded with methotrexate for treatment of rheumatoid arthritis[J].INT J Nanomed,2017,12:6735-6746.

[38]Li Z J,Huang H,Duan Y R,et al.Prevention of oxidized low density lipoprotein-induced endothelial cell injury by DA-PLGA-PEG-cRGD nanoparticles combined with ultrasound[J].Int J Mol Sci,2017,18(4):815- 836.