白藜蘆醇抑制小鼠皮膚移植排斥反應研究

史小四，高 強，騫秀芳

（武警北京總隊第二醫(yī)院藥劑科/醫(yī)務處，北京 100027）

白藜蘆醇（resveratrol）是一種提取自植物的多酚化合物，具有抗炎、抗氧化、抗血小板聚集、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等多種生物活性［1-2］。馬麗等［3］報道白藜蘆醇抗小鼠胰島樣細胞團移植排斥作用，是一種潛在的免疫抑制藥物。本研究探討白藜蘆醇對小鼠異體皮膚移植排斥反應的影響，以期為白藜蘆醇的深入開發(fā)及其在器官移植免疫抑制治療的應用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

實驗動物。12周齡BALB/c小鼠40只及C57BL/6小鼠50只，雄性，體質(zhì)量18～23g，由河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供。

藥品與試劑。白藜蘆醇（純度大于等于98%）、二甲基亞砜（DMSO）均購自美國Sigma-Aldrich公司；白藜蘆醇以DMSO溶解，用生理鹽水稀釋成所需濃度，現(xiàn)用現(xiàn)配。環(huán)孢素A（ciclosporin A），由瑞士諾華制藥有限公司提供，使用前以生理鹽水配成所需濃度。

建立異體皮膚移植模型。采用背-背皮膚移植法［4］。供體為BALB/c小鼠，受體為C57BL/6小鼠。取C57BL/6小鼠，1%戊巴比妥鈉按50mg/kg腹腔注射麻醉后，于背部移植區(qū)脫毛、消毒，剪去移植區(qū)皮膚，形成植皮創(chuàng)基備用。將BALB/c小鼠同樣條件麻醉、脫毛、消毒后，于其背部切取全層皮膚1塊，刮除其皮下脂肪和肉膜層，修剪成與C57BL/6小鼠創(chuàng)面大小相等的皮片，移植于C57BL/6小鼠植皮創(chuàng)基上，四周間斷縫合固定，輕壓皮片，使其與創(chuàng)面貼緊，用創(chuàng)可貼包扎，分籠飼養(yǎng)。

分組與給藥。術(shù)后受體小鼠隨機分為5組各10只，模型組用等體積生理鹽水，白藜蘆醇組用50mg/kg［5］，環(huán)孢素A組10mg/kg［6］，白藜蘆醇加亞劑量環(huán)孢素A組用白藜蘆醇50mg/kg加環(huán)孢素A5mg/kg［7］。另10只C57BL/6小鼠，移去移植區(qū)皮膚后再植入原位，作為假手術(shù)組，用等體積生理鹽水。各組均為手術(shù)當天開始腹腔注射給藥，每天1次，連續(xù)10天。

移植皮片存活觀察。術(shù)后每日定時觀察小鼠一般狀況和移植皮片的存活情況。若移植皮片質(zhì)地柔軟、顏色紅潤、邊緣融合，有部分毛發(fā)生長則判為存活或耐受。若移植皮片毛發(fā)脫落和表皮壞死為排斥開始。若皮片發(fā)黑變硬，形成干痂脫落或潰爛大于1/2，則認為完全被排斥。記錄各只小鼠移植皮片出現(xiàn)完全排斥反應的天數(shù)。

2 結(jié) 果

白藜蘆醇對移植皮片存活時間的影響。試驗期間各組小鼠均未出現(xiàn)感染死亡。假手術(shù)組移植皮片未出現(xiàn)排斥反應，不參與統(tǒng)計分析。白藜蘆醇組、環(huán)孢素A組、白藜蘆醇加環(huán)孢素A聯(lián)合組小鼠移植皮片存活時間分別延長為（12.87±3.63）、（14.59±2.30）、（16.94±2.16）天，與模型組（9.75±1.28）天比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。白藜蘆醇加環(huán)孢素A聯(lián)合組小鼠移植皮片存活時間比白藜蘆醇組長（P＜0.01），且比環(huán)孢素A組長（P＜0.05）。

3 討 論

異體移植的皮膚因其所涉及抗原的典型性，為移植組織器官中最難以存活。采用動物皮膚移植模型來研究免疫排斥反應是一種簡單而準確的免疫學方法［8］。環(huán)孢素A作為臨床器官移植常用的免疫抑制劑，抗排斥反應作用強大，但有嚴重的毒副作用如肝腎毒性、高血壓、骨質(zhì)疏松、代謝紊亂等。

白藜蘆醇是天然的抗氧化劑和自由基清除劑，其安全性已得到臨床研究證實。白藜蘆醇具有多種對機體有益的生物學作用，其中最引人注目的是抗炎、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)活性，白藜蘆醇對動物胰島或肝臟的移植排斥反應具有抑制作用［3-9］，可能是一種潛在的免疫抑制藥物。白藜蘆醇可使移植皮片的存活率明顯提高，平均存活時間延長，急性排斥反應顯著減輕。白藜蘆醇可增強環(huán)孢素A的抗排斥反應效果，減少免疫抑制劑的劑量以提高用藥安全性。Chander等［10］研究發(fā)現(xiàn)，白藜蘆醇對長期口服環(huán)孢素A造成的腎臟毒性有防治作用，提示白藜蘆醇與環(huán)孢素A聯(lián)合應用可能有減毒效果。Wu等［9］研究表明白藜蘆醇和環(huán)孢素A聯(lián)用比環(huán)孢素A單用免疫抑制效果要強，聯(lián)用可以下調(diào)外周血T淋巴細胞的NF-κB活性和血清中的IL-2和INF-水平。

［1］SVAJGER U，JERAS M． Anti-inflammatory effects of resveratrol and its potential use in therapy of immune-mediated diseases［J］．Int Rev Immunol，2012，31（3）：202-222．

［2］NOH K T，CHAE S H，Chun S H ，et al．Resveratrol suppresses tumor progression via the regulation of indoleamine 2，3-dioxygenase［J］．Biochem Biophys Res Commun，2013，431（2）：348-353．

［3］馬麗，張薇華，周光紀，等．白藜蘆醇對小鼠胰島樣細胞團的抗移植排斥作用及其IL-2、IL-10表達的影響［J］．解放軍醫(yī)學雜志，2012，37（6）：606-609．［4］成功，陳明，孫則禹，等．建立小鼠皮膚移植排斥模型穩(wěn)定獲得記憶T細胞［J］．中國比較醫(yī)學雜志，2008，18（4）：32-35．

［5］LAI X，PEI Q，SONG X ，et al．The enhancement of immune function and activation of NF-κB by resveratrol-treatment in immunosuppressive mice［J］．Int Immunopharmacol，2016，33：42-47．

［6］于艷秋，田偉，張海鵬，等．高壓氧與環(huán)孢素A對皮膚移植小鼠脾活性氧及一氧化氮含量的影響［J］．中國病理生理雜志，2000，16（12）：1286-1288．

［7］蔡振剛，于志軍，溫爽，等．青藤堿對大鼠肝移植急性排斥反應的影響［J］．遼寧中醫(yī)藥大學學報，2010，12（4）：112-114．

［8］DUYVERMAN AM，KOHNO M，DUDA DG ，et al．A transient parabiosis skin transplantation model in mice［J］．Nat Protoc，2012，7（4）：763-770．

［9］WU SL，PAN CE，YU L， et al．Immunosuppression by combined use of cyclosporine and resveratrol in a rat liver transplantation model［J］．Transplant Proc，2005，37（5）：2354-2359．

［10］CHANDER V，TIRKEY N，CHOPRA K．Resveratrol，a polyphenolic phytoalexin protects against cyclosporine-induced nephrotoxicity through nitric oxide dependent mechanism［J］．Toxicology，2005，210（1）：55-64．