田麗芳 ,閆永平,張 濤
(1.保定職業(yè)技術(shù)學(xué)院畜牧獸醫(yī)系 070051;2.北京農(nóng)學(xué)院獸醫(yī)學(xué)(中醫(yī)藥)北京市重點實驗室102206)
小腸是動物機(jī)體營養(yǎng)吸收的主要場所,生長發(fā)育良好的畜禽其腸道絨毛發(fā)育良好,隱窩深度淺,消化酶活性高,腸道有益菌數(shù)量多[1-2]。牛膝多糖經(jīng)硫酸、醋酸—吡啶酯化后的產(chǎn)物—牛膝多糖硫酸酯,不僅刺激免疫、抗氧化、抗腫瘤和改善消化道微生態(tài)平衡等活性大大增強,同時還具備了較強的抗病毒和抑菌殺蟲等藥理活性[3-4]。對于酯化牛膝多糖對產(chǎn)蛋雞腸道微生物及黏膜結(jié)構(gòu)和生產(chǎn)性能是否有影響,未見研究報道。本試驗旨在探討牛膝多糖硫酸酯對產(chǎn)蛋雞腸道微生物和小腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響能力,為開發(fā)新型綠色的飼料添加劑的開發(fā)應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。
采用單因子試驗設(shè)計,以38周齡的京粉1號商品代蛋雞、體重相近的蛋雞200只為試驗動物。隨機(jī)分為5組,每組設(shè)6個重復(fù),每個重復(fù)8只雞。試驗CK組設(shè)為對照組,飼喂玉米-豆粕型基礎(chǔ)日糧,試驗I-IV組為酯化牛膝多糖處理組,分別在基礎(chǔ)日糧中添加 50mg/kg、100mg/kg、150mg/kg、200mg/kg 的酯化牛膝多糖,預(yù)試期7d,正試期60d。
試驗期周期結(jié)束時隨機(jī)選擇各組試驗雞,每組12只,無菌操作集盲腸、結(jié)腸、直腸糞便內(nèi)容物約3g,用稀釋液逐級稀釋至l0-7接種培養(yǎng),麥康凱瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸桿菌;改良番茄瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)乳酸桿菌;雙歧桿菌采用雙歧桿菌選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng),測定3種細(xì)菌的數(shù)量;平板菌落計數(shù)法進(jìn)行統(tǒng)計細(xì)菌數(shù)量,每克樣本所含細(xì)菌數(shù)=菌落數(shù)均值×稀釋倍數(shù)/樣品質(zhì)量。
將十二指腸、空腸及回腸各切取長約2cm的腸塊置于3.8%的福爾馬林液中固定,經(jīng)組織切片制作染色(HE),10倍光學(xué)顯微鏡下選擇選5個典型視野,在應(yīng)用DT2000通用圖像分析軟件2.0測量小腸絨毛高度和隱窩深度,小腸絨毛高度指的是腸腺開口至絨毛頂端的垂直高度,隱窩深度為絨毛根部上皮凹陷到固有層的距離。
試驗Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ在抑制腸道中大腸桿菌和提高雙歧桿菌、乳酸桿菌的效果好于對照組(P<0.05或P<0.01)。酯化牛膝多糖試驗Ⅲ,Ⅳ組在抑制腸道大腸桿菌和促進(jìn)腸道有益菌顯著好于對照組(P<0.05或P<0.01),試驗組之間隨著添加量的增加,其抑制腸道大腸桿菌和促進(jìn)腸道有益菌的效果逐漸提高,Ⅱ和Ⅳ組之間差異顯著或極顯著(P<0.05或P<0.01),結(jié)果見表1。
表1 牛膝多糖對蛋雞腸道微生物的影響結(jié)果
十二指腸段上皮細(xì)胞層厚度各組相比均無顯著性差異,空腸段和回腸段上皮細(xì)胞層厚度隨著試驗Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組多糖添加量的增加而增加,顯著或極顯著大于對照組和試驗I組(P<0.01或P<0.05);在十二指腸段,腸絨毛高度和降低隱窩深度試驗Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組明顯好于對照組(P<0.01或P<0.05),空腸和回腸的隱窩深度之間沒有顯著差異,試驗Ⅲ、Ⅳ組各測定指標(biāo)之間差異不明顯,這說明酯化牛膝多糖添加量在150mg/kg和200mg/kg時對腸道的上皮細(xì)胞、絨毛高度和隱窩深度的影響沒有顯著差異。
十二指腸
空腸
回腸
表2 酯化牛膝多糖對肉雞不同腸段腸黏膜形態(tài)學(xué)指標(biāo)的影響結(jié)果
禽類的消化道菌群穩(wěn)定、維持機(jī)體微生態(tài)的平衡,這對禽類的消化吸收,免疫起著至關(guān)重要作用。李樹鵬等(2002)研究表明黃芪多糖能減少雛雞腸道大腸桿菌的數(shù)量,增加乳酸桿菌和雙歧桿菌的數(shù)量,回腸和盲腸的絨毛變長、變粗,排列緊密[5]。高楊等(2011)研究顯示適量黃芪多糖可降低產(chǎn)蛋雞盲腸中大腸桿菌數(shù)量,增加乳酸菌和雙歧桿菌的數(shù)量[1]。陳清華等(2007)研究顯示牛膝多糖能夠抑制仔豬腸道中大腸桿菌的生長,促進(jìn)腸道中乳酸菌和雙歧桿菌的增殖[6]。本試驗結(jié)果表明酯化牛膝多糖能抑制生產(chǎn)蛋雞腸道大腸桿菌的生產(chǎn),增殖雙歧桿菌和乳酸桿菌 ,且隨劑量的增加效果越明顯。這與前人的研究結(jié)果一致。
營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收主要在肝臟和腸道進(jìn)行,腸道菌群的穩(wěn)定和黏膜結(jié)構(gòu)的健康與否將直接影響動物對飼料的利用程度。陳清華等(2007)研究表明牛膝多糖能顯著增加腸道上皮細(xì)胞層厚度,增加腸絨毛高度,顯著降低隱窩深度 (P<0.05或P<0.01),增強機(jī)體消化吸收能力,從而提高仔豬的生產(chǎn)性能[6]。成年產(chǎn)蛋雞腸道菌群穩(wěn)定,腸黏膜結(jié)構(gòu)形態(tài)趨于完善,研究結(jié)果表明酯化牛膝多糖的添加有改善腸道結(jié)構(gòu)的趨勢,改善空腸、回腸上皮細(xì)胞層厚度的效果比十二指腸好;能顯著改善十二指腸腸絨毛高度和降低隱窩深度(P<0.05或P<0.01),這與陳清華等人的研究結(jié)果相似。
酯化牛膝多糖能抑制產(chǎn)蛋雞腸道中大腸桿菌的生長,增殖乳酸菌和雙歧桿菌,顯著增加空腸和回腸上皮細(xì)胞層厚度、絨毛高度,降低十二指腸隱窩深度。結(jié)果表明酯化牛膝多糖可以有效增強產(chǎn)蛋雞的消化吸收能力,提高蛋雞的生產(chǎn)性能(結(jié)果另報),推薦使用量150mg/kg·飼料。