“延胡索-冰片”藥對(duì)抗小鼠心肌缺血的作用

溫紅娟 李 娜 尚 坤 隋永鵬 石曉征 李曉華 孫 野 韓 冬 邱智東 謝艷彬 唐迎雪

(山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 250355)

心肌缺血是各類心臟疾病的誘因，主要由心臟血液灌注減少無(wú)法為心臟供給足夠的“養(yǎng)料”所引起〔1〕。近年來(lái)，中藥療法以中醫(yī)基礎(chǔ)理論為指導(dǎo)，臨床療效較顯著。“藥對(duì)”使中醫(yī)的方劑和中藥的性味歸經(jīng)相結(jié)合，是歷代醫(yī)家臨床經(jīng)驗(yàn)的精華，不但可以在最大程度上優(yōu)化中藥的配伍，還可以緩和藥物間毒性。而“延胡索-冰片”是針對(duì)心腦血管疾病的一個(gè)藥對(duì)〔2〕，尤其對(duì)心肌缺血導(dǎo)致的冠心病心絞痛等疾病具有良好的臨床療效。本研究以“延胡索-冰片”藥對(duì)為主要干預(yù)藥物，觀察不同劑量“延胡索-冰片”藥對(duì)對(duì)異丙腎上腺素(ISO)致小鼠急性心肌缺血血清丙二醛(MDA)、過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮(NO)含量變化及其對(duì)心肌組織學(xué)的影響。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 特殊清潔級(jí)(SPF)C57BL/6小鼠，體重30～35 g，購(gòu)自北京市維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。

1.2主要試劑 “延胡索-冰片”藥對(duì)為棕褐色的粉末，氣香，長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)研發(fā)中心中藥藥劑實(shí)驗(yàn)室自制。ISO由注射液(批號(hào)：100166-201004)由中國(guó)藥品生物制品檢定所生產(chǎn)。CAT測(cè)試盒(20111221)、SOD試劑盒(20120821；20121012)、MDA試劑盒(20120801；20121009)及NO檢測(cè)試劑盒(20120713)均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.3動(dòng)物分組及給藥 70只小鼠經(jīng)適應(yīng)性飼養(yǎng)1 w后，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組及“延胡索-冰片”藥對(duì)50.0、25.0、12.5、5.0和1.0 mg/kg給藥組，每組10只?！把雍?冰片”藥對(duì)給藥組按上述劑量進(jìn)行灌胃給藥，模型組、空白對(duì)照組給予等量蒸餾水，1次/d。自給藥第8天起，除空白對(duì)照組外，其余各組小鼠均腹腔注射ISO 0.01 g/kg，1次/d，連續(xù)10 d。

1.4血清學(xué)指標(biāo)檢測(cè) 最后1次給藥后麻醉，腹主動(dòng)脈取血，分離血清，按照試劑盒說明書對(duì)CAT、NO、SOD及MDA的含量進(jìn)行生化分析儀檢測(cè)。

1.5心肌組織蘇木素-伊紅(HE)染色 處死各組動(dòng)物，取心室組織于4℃10%甲醛中固定24～72 h，通過石蠟包埋，制備成4 μm切片，HE染色，光鏡下觀察心肌組織形態(tài)。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS12.0軟件行方差分析。

2 結(jié) 果

2.1“延胡索-冰片”藥對(duì)對(duì)各組小鼠血清酶學(xué)水平的影響 與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠血清中CAT、SOD、NO水平明顯降低而MDA水平顯著提高(P<0.05)；與模型組比較，“延胡索-冰片”藥對(duì)12.5和50.0 mg/kg體重給藥組血清CAT水平顯著提高(P<0.05)，“延胡索-冰片”藥對(duì)12.5、25.0和50.0 mg/kg體重給藥組血清SOD水平顯著提高(P<0.05)，“延胡索-冰片”藥對(duì)治療各劑量組血清NO、MDA水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 “延胡索-冰片”藥對(duì)對(duì)各組小鼠血清酶學(xué)水平的影響

與空白對(duì)照組比較：1)P<0.05；與模型組比較：2)P<0.05

2.2“延胡索-冰片”藥對(duì)對(duì)急性心肌缺血小鼠心肌組織學(xué)改變的影響 空白對(duì)照組小鼠心肌纖維排列整齊，心肌間質(zhì)未見炎細(xì)胞浸潤(rùn)。模型組小鼠心肌可見境界清楚的灶狀壞死，部分壞死灶融合形成片狀，壞死灶內(nèi)心肌細(xì)胞溶解，壞死組織周圍可見心肌纖維變性，心肌細(xì)胞間質(zhì)水腫，壞死灶內(nèi)及周圍較多炎細(xì)胞浸潤(rùn)?！把雍?冰片”藥對(duì)組心肌組織肌纖維變性、壞死、水腫程度明顯降低。見圖1。

圖1 HE染色觀察結(jié)果(×200)

3 討 論

冠狀動(dòng)脈血流量降低、心肌氧供應(yīng)減少均可引起心肌缺血。在中醫(yī)學(xué)的理論體系中，心肌缺血屬于心痛胸痹。心痛胸痹是以心脈痹阻不暢為主要癥狀的一種疾病〔3〕?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，延胡索屬于活血、行氣、止痛藥，臨床上多應(yīng)用于治療心痛、胸痹，改善心肌缺氧、缺血〔4〕。冰片具有“通諸竅、散郁火”的功效。將延胡索和冰片二味中藥配伍形成“藥對(duì)”是國(guó)內(nèi)著名中醫(yī)藥專家施今墨教授多年治療心腦血管疾病的經(jīng)驗(yàn)結(jié)晶，經(jīng)驗(yàn)證尤其對(duì)心肌缺血導(dǎo)致的冠心病心絞痛等疾病具有良好的臨床療效〔5〕。

MDA是膜脂過氧化最重要的產(chǎn)物之一。CAT、NO、SOD大量存在于心肌細(xì)胞的胞質(zhì)或線粒體中，當(dāng)機(jī)體的心臟組織受到缺血影響而出現(xiàn)損傷時(shí)，心肌細(xì)胞中大量酶釋放入血，上述指標(biāo)迅速升高。

作為調(diào)節(jié)心臟循環(huán)系統(tǒng)功能的重要因子，NO在抑制血小板的黏附和聚集、抑制白細(xì)胞的趨化激活、抗氧自由基過氧化損傷等方面有著優(yōu)異的作用〔6，7〕。根據(jù)現(xiàn)代研究表明，NO還可以通過上調(diào)SOD的活性間接減少氧化損傷〔5〕。通常認(rèn)為，NO與血管內(nèi)皮素(ET)共同維持血管及血液內(nèi)環(huán)境的平衡。當(dāng)機(jī)體在急性心肌缺血的狀態(tài)下，缺血的心肌細(xì)胞與外周血中的內(nèi)皮素含量均會(huì)不同程度升高，使內(nèi)皮素與NO的釋放量失去平衡，提高高血壓等心血管疾病的發(fā)病率。研究表明，NO的生成起到抗心肌缺血的作用〔8〕。

現(xiàn)代研究通常將血清心肌酶學(xué)作為評(píng)價(jià)心肌缺血程度的指標(biāo)之一，當(dāng)心臟出現(xiàn)急性心肌缺血時(shí)，心肌細(xì)胞會(huì)很快出現(xiàn)凋亡，其最主要的形態(tài)學(xué)改變出現(xiàn)在心肌細(xì)胞的細(xì)胞核〔9〕。本研究結(jié)果表明，“延胡索-冰片”藥對(duì)25.0 mg·kg-1·d-1可明顯減輕小鼠急性心肌缺血程度，對(duì)由急性心肌缺血引發(fā)的心肌酶露出有明顯的改善作用?！把雍?冰片”藥對(duì)相組合，行氣活血、化瘀止痛的臨床應(yīng)用價(jià)值較高，能在一定程度上避免藥物間的相互作用，產(chǎn)生藥效，降低毒副作用，具有良好臨床療效。

1魯 端.臨床心肌缺血與心律失?！睯〕.醫(yī)師進(jìn)修雜志(內(nèi)科版)，2004；27(1)：52-4.

2尚 坤，于清華，石 光，等.穴位敷貼療法治療冠心病心絞痛76例〔J〕.吉林中醫(yī)藥，2014；34(5)：519-22.

3王永炎.中醫(yī)內(nèi)科學(xué)〔M〕.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1998：108.

4魯春梅，張春森，姜立勇.延胡索化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展〔J〕.中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2011；5(15)：126-7.

5陳林志.延胡索-冰片藥對(duì)對(duì)實(shí)驗(yàn)性心肌損傷保護(hù)作用的研究〔D〕.長(zhǎng)春：長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，2015.

6Rubbo H，Radi R，Anselmi D，etal.Nitric oxide reaction with lipid peroxylradicals spares alpha-tocopherol during lipid peroxidation：greater oxidantprotection from the pair nitric oxide/alpha-tocopherol than alpha-tocopherol/ascorbate〔J〕.J Biol Chem，2000；275：10-2.

7孫帥軍，王新宇，黃小玲，等.丹酚酸 B 對(duì)大鼠缺血心肌組織溶酶體功能的影響〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志，2016；36(8)：1789-91.

8陳俊林，吳偉康，韓玉蓮，等.鄧氏通冠膠囊改善缺血心肌供血的時(shí)效量效關(guān)系及NO機(jī)制研究〔J〕.廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007；24(4)：301-5.

9歐立娟，孫曉萍，劉啟德，等.干姜、陳皮提取物對(duì)大鼠心肌缺血的影響〔J〕.中藥材，2009；32(11)：1723.