雞病原性大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗

孫 杰

（天津市薊州區(qū)畜牧業(yè)發(fā)展服務中心，天津 薊縣 301900）

雞大腸桿菌病是由大腸桿菌引起的表現(xiàn)多種臨床癥狀及病理變化的一類疾病，該病在養(yǎng)雞業(yè)中很常見，給養(yǎng)雞業(yè)造成一定的經濟損失?，F(xiàn)在養(yǎng)雞形式多以集約化飼養(yǎng)為主，養(yǎng)殖密度的增大加劇了該病的發(fā)生及流行，另外抗菌藥物使用不當時有發(fā)生，使耐藥性的產生更趨嚴重，給大腸桿菌病的防治帶來諸多困難。

筆者分別從不同養(yǎng)雞廠的病死雞中分離出9株大腸桿菌，對分離出的9株大腸桿菌進行培養(yǎng)、染色、形態(tài)與生化特性及藥敏試驗，以期為臨床防治雞大腸桿菌病提供一定的參考依據。

1 材料及方法

1.1 病 料采取自天津薊縣周邊不同肉養(yǎng)雞廠具有典型病變病死雞的心血及臟器。

1.2 培養(yǎng)基及試劑普通瓊脂平板，營養(yǎng)肉湯，麥康凱平板，微量發(fā)酵管，M-R試劑，V-P試劑。

1.3 試驗動物1日齡健康雛雞。

1.4 試驗藥品（1）氧氟沙星；（2）鹽酸環(huán)丙沙星；（3）乳酸環(huán)丙沙星；（4） 沙拉沙星；（5） 恩諾沙星；（6） 洛美沙星；（7）培氟沙星；（8）雙氟沙星。均為原粉，市購，含量均達到90%以上，按試驗要求配制成所需濃度，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 分離培養(yǎng)采取癥狀典型病死雞的心血、肝臟和脾臟，接種于麥康凱瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24h。挑取麥康凱瓊脂平板上的粉紅色菌落，按常規(guī)方法進行涂片、革蘭氏染色、鏡檢。

1.6 病原鑒定

1.6.1 生化試驗 挑取麥康凱瓊脂平板上的粉紅色菌落，接種于肉湯37℃培養(yǎng)18h。然后將肉湯培養(yǎng)物接種于微量發(fā)酵管進行發(fā)酵試驗，并進行生化反應試驗。

1.6.2 致病性試驗 選取10只10日齡健康雛雞并分成2組，每組5只，第1組按照0.5mL/只的劑量腹腔接種肉湯培養(yǎng)物，第2組按照0.5mL/只的劑量腹腔注射生理鹽水，觀察各組發(fā)病情況。

1.7 藥敏試驗判定標準：抑菌圈直徑平均值小于10mm為抗菌；10mm輕度敏感；11～15mm中度敏感；16～20mm高度敏感。

2 結 果

2.1 致病菌株的培養(yǎng)特性分離培養(yǎng)及純培養(yǎng)結果表明其培養(yǎng)特性具有共同的特點，在普通瓊脂平板上為灰白色、半透明、圓形光滑的中等大小菌落；在普通肉湯中可使肉湯均勻渾濁有腥臭味，試管底有沉淀物呈灰白色，輕搖后呈云霧狀散開；在麥康凱平板上為磚紅色、圓形微凸、邊緣整齊、光滑濕潤的小菌落。

2.2 菌株的形態(tài)學特征培養(yǎng)的菌株經涂片染色、鏡檢，可見多數(shù)散在的兩端鈍圓的革蘭氏陰性短桿菌，偶有2～3個相連，無莢膜，無芽孢。

2.3 致病性試驗結果24h后第一組的5只雛雞死亡，剖檢可見纖維素性心包炎、肝周炎、肝臟腫大，表面被覆一層薄膜狀的纖維滲出，取病死雛雞雞心血、脾臟、肝臟進行涂片，染色鏡檢，可見兩端鈍圓，革蘭氏陰性的短桿菌，與接種菌一致，對照組的5只雛雞全部健康，7d后剖檢未見異常，心、臟器處未分離出大腸桿菌。

2.4 菌株的生化特性結果見表1。

2.5 藥敏試驗結果

9株不同地區(qū)雞致病性大腸桿菌(編號DC-1～DC-9)對8種氟喹諾酮類藥物的敏感性試驗見表2。

藥敏試驗表明：氧氟沙星，鹽酸環(huán)丙沙星，乳酸環(huán)丙沙星高度敏感；沙拉沙星，恩諾沙星，洛美沙星呈現(xiàn)中度敏感；而培氟沙星和雙氟沙星不敏感。

3 討論

3.1 本試驗共分離出9株大腸桿菌,其培養(yǎng)、染色、形態(tài)、生化等特性相同，與雞致病性大腸桿菌特征一致，為藥敏試驗和疾病防制提供了依據，受條件和時間限制未能進行病原的血清型鑒定。

3.2 大腸桿菌易產生耐藥性，建議用藥前先進行藥敏試驗，選擇敏感藥物，同時要定期更換或交叉抗菌藥物。

3.3 加強衛(wèi)生消毒工作，及時清掃雞舍內的糞便，保持良好的通風。定期對雞舍及其周圍環(huán)境進行消毒。提高飼養(yǎng)管理水平減少應激因素。保持雞舍內適宜的溫度、濕度。飲水可中加入抗應激藥物，可增強機體對大腸桿菌的抵抗力。凈化雞群內環(huán)境，引種要選擇管理嚴格，無大腸桿菌病史、正規(guī)的種雞場，及時淘汰弱殘雛，清除經蛋傳播到雛雞體內的大腸桿菌。

表1 雞致病性大腸桿菌的生化試驗

表2雞致病性大腸桿菌的藥敏試驗