微生物鑒定技術(shù)在藥品生產(chǎn)中運(yùn)用研究

萬清峰

【摘要】文章通過闡述微生物鑒定技術(shù)的內(nèi)涵特征，對(duì)微生物鑒定技術(shù)在藥品生產(chǎn)中運(yùn)用及藥品生產(chǎn)中的微生物污染控制策略展開探討，旨在為研究如何促進(jìn)藥品生產(chǎn)的安全有序開展提供必要思路。

【關(guān)鍵詞】微生物鑒定技術(shù);藥品;生產(chǎn)

藥品微生物檢測(cè)結(jié)果受諸多因素影響，例如產(chǎn)品抗菌性及抑菌性、微生物分布不均勻等。所以，對(duì)于藥品生產(chǎn)而言，要想保證檢測(cè)結(jié)果的可靠性，務(wù)必要依據(jù)對(duì)應(yīng)方法開展有效的方法驗(yàn)證，依據(jù)驗(yàn)證完畢的檢測(cè)方法對(duì)其開展微生物鑒定[1]。由此可見，對(duì)微生物鑒定技術(shù)在藥品生產(chǎn)中運(yùn)用開展研究，有著十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。

1 微生物鑒定技術(shù)

1.1 PCR技術(shù)

PCR是一項(xiàng)體外快速擴(kuò)增特定DNA片段的技術(shù)。PCR技術(shù)自上世紀(jì)80年代被美國(guó)生物化學(xué)家穆里斯發(fā)明以來已經(jīng)在醫(yī)療衛(wèi)生、現(xiàn)代農(nóng)業(yè)、食品加工等諸多行業(yè)領(lǐng)域得到廣泛推廣。該項(xiàng)技術(shù)的運(yùn)行原理在于在體外將引物及目標(biāo)DNA經(jīng)由變性、退火、延伸等流程達(dá)成對(duì)目標(biāo)DNA的快速、特異性擴(kuò)增[2]。Taq DNA聚合酶的誕生很大程度上推動(dòng)了PCR技術(shù)的發(fā)展進(jìn)步。在實(shí)際工作中，PCR技術(shù)往往被應(yīng)用于與核酸測(cè)序技術(shù)開展有效相融，以實(shí)現(xiàn)對(duì)微生物基因型的鑒定。16s rDNA可呈現(xiàn)微生物特有的進(jìn)化信息，在微生物中呈現(xiàn)出廣泛的序列多態(tài)性以及保守性，其基因序列己然轉(zhuǎn)變成微生物鑒定的一項(xiàng)有力依據(jù)?，F(xiàn)階段，由PCR技術(shù)衍生的各式各樣相關(guān)技術(shù)，諸如不對(duì)稱PCR技術(shù)、引物標(biāo)記PCR技術(shù)、多重PCR技術(shù)等，己在微生物分型及檢測(cè)領(lǐng)域得到廣泛推廣。

1.2 基因芯片技術(shù)

基因芯片，亦可稱之為生物芯片、DNA芯片，其運(yùn)行機(jī)制在于核酸經(jīng)由與己知序列的、在基片表面固定標(biāo)記過的核酸探針雜交，進(jìn)而開展核苷酸測(cè)序的方法。該項(xiàng)技術(shù)是1998年自然科學(xué)領(lǐng)域的重要進(jìn)展之一，現(xiàn)階段己在諸多行業(yè)領(lǐng)域得到廣泛推廣，諸如藥物篩選、微生物檢測(cè)、臨床診斷等?；蛐酒邆漭^強(qiáng)的自動(dòng)化、并行性以及微型化，可同時(shí)于一張芯片上開展不同微生物的快速檢測(cè)?；蛐酒夹g(shù)擁有良好的靈敏性、特異性，并且還可縮減化學(xué)試劑的使用量，屬于一項(xiàng)環(huán)境友好型的技術(shù)。作為一項(xiàng)快速、準(zhǔn)確、大規(guī)模的微生物鑒定技術(shù)，基因芯片技術(shù)尚未廣泛轉(zhuǎn)化成商品化產(chǎn)品應(yīng)用?；蛐酒夹g(shù)所需運(yùn)用到的諸如寡核苷酸合成儀、掃描儀等設(shè)備成本昂貴，并且對(duì)基因芯片檢測(cè)結(jié)果評(píng)定現(xiàn)階段尚未有構(gòu)建起全面統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，樣品制備難度大也一定程度上制約了基因芯片技術(shù)的廣泛推廣。伴隨微生物鑒定技術(shù)的不斷發(fā)展成熟，微生物基因庫越來越豐富，基因芯片技術(shù)在藥品微生物鑒定領(lǐng)域勢(shì)必能夠得到越來越廣泛的推廣。

2 微生物鑒定技術(shù)在藥品生產(chǎn)中運(yùn)用

藥品生產(chǎn)中安全問題是一項(xiàng)十分重要的問題，其主要涉及到質(zhì)量、成分營(yíng)養(yǎng)性及依賴性等方面的問題，本次研究側(cè)重于研究質(zhì)量安全。近年來，不論是在國(guó)際還是在國(guó)內(nèi)不斷發(fā)生有藥品安全問題，由此使得藥品安全越來越為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域及生產(chǎn)領(lǐng)域所廣泛關(guān)注。需要注意的是，藥品中微生物的鑒定可視作藥品質(zhì)量安全的一項(xiàng)重要權(quán)衡標(biāo)準(zhǔn)，也可將其作為鑒定的一項(xiàng)重要參考依據(jù)，所以要對(duì)藥品中各式各樣微生物開展高水平的鑒定，微生物相關(guān)鑒定技術(shù)在當(dāng)前藥品生產(chǎn)中的運(yùn)用，包括有：

2.1 PCR技術(shù)在藥品生產(chǎn)中運(yùn)用

PCR技術(shù)依托體外多聚酶鏈反應(yīng)合成特異性DNA片段，然后經(jīng)由擴(kuò)增產(chǎn)物，使DNA迅猛增長(zhǎng)，數(shù)量可驟升至原本的百倍，再對(duì)熒光條帶進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)微生物種類的確定。PCR技術(shù)既具備較高靈敏度、較強(qiáng)的特異性以及快速檢測(cè)等特征，自理論層面而言，在檢測(cè)細(xì)菌過程中，運(yùn)用PCR技術(shù)可檢測(cè)出一個(gè)細(xì)菌的拷貝基因，進(jìn)一步在短暫時(shí)間內(nèi)增菌或不增菌，在細(xì)菌檢測(cè)中極大水平縮減時(shí)間投入，可定量鑒定出大腸桿菌、沙門桿菌、肉毒桿菌等，極大水平擴(kuò)大檢測(cè)范圍。同時(shí)，PCR技術(shù)還可鑒定出藥品中含有治療金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、李斯特桿菌等多種不同成分。舉例而言，相關(guān)研究人員在尚未開展富集化培養(yǎng)便引入免疫磁珠方法、熒光定量PCR技術(shù)開展有效相融，實(shí)現(xiàn)了對(duì)藥品的快速準(zhǔn)確檢測(cè)，鑒定出藥品中含有治療李斯特菌、大腸埃希氏菌等成分：還有相關(guān)研究人員運(yùn)用熒光定量PCR技術(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)菌株展開檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)藥品中大部分菌株呈陰性，且含有少部分溶血弧菌呈陽性[3]。值得一提的是，PCR技術(shù)同樣存在一些缺點(diǎn)，好比因?yàn)樵鼍囵B(yǎng)基或其他相關(guān)微生物DNA會(huì)對(duì)水生棲熱菌產(chǎn)生一定抑制作用，進(jìn)一步導(dǎo)致鑒定結(jié)果呈假陰性，對(duì)結(jié)果帶來不利影響。

2.2 基因芯片技術(shù)在藥品生產(chǎn)中運(yùn)用

基因芯片技術(shù)是指利用微電子技術(shù)及微加工技術(shù)，將一大批基因寡核苷酸開展高密度、有序排列，并使其排列于硅片、纖維膜等載體上，進(jìn)一步形成雜交信號(hào)對(duì)目的基因予以檢測(cè)。運(yùn)用基因芯片技術(shù)對(duì)樣品DNA依托PCR技術(shù)擴(kuò)增后制備的探針點(diǎn)樣于基因芯片表面，通過熒光標(biāo)記的寡核苷酸點(diǎn)及芯片表面探針開展雜交，再選取掃描儀對(duì)芯片上呈現(xiàn)的熒光予以檢測(cè)分析，進(jìn)一步鑒定出樣品DNA中含有相關(guān)特定微生物與否。基因芯片技術(shù)還可于寡核苷酸探針中加入一定探針，進(jìn)而使檢測(cè)范圍得到有效擴(kuò)大，并且經(jīng)由加入及調(diào)節(jié)探針，使基因芯片檢測(cè)準(zhǔn)確性得到顯著提升。自理論層面而言，運(yùn)用基因芯片技術(shù)可于一次試驗(yàn)中有限檢測(cè)出所有潛在的致病原，或于一張基因芯片中檢測(cè)出一種致病原的遺傳學(xué)指標(biāo)，極大水平提高基因芯片技術(shù)的檢測(cè)速度、便捷性及靈敏度，彌補(bǔ)傳統(tǒng)檢測(cè)中操作復(fù)雜、效率低及自動(dòng)化水平低等不足。

3 藥品生產(chǎn)中的微生物污染控制策略

新形勢(shì)下，藥品生產(chǎn)行業(yè)要緊緊跟隨社會(huì)前進(jìn)腳步，加大改革創(chuàng)新力度，加強(qiáng)對(duì)國(guó)內(nèi)外成功發(fā)展經(jīng)驗(yàn)的學(xué)習(xí)引入，切實(shí)開展好對(duì)藥品生產(chǎn)中的微生物污染控制工作。如何進(jìn)一步促進(jìn)藥品生產(chǎn)的安全有序開展可以將以下策略作為切入點(diǎn)：其一，開展好藥品生產(chǎn)原料控制。對(duì)買入的藥品生產(chǎn)原料開展嚴(yán)格驗(yàn)收檢測(cè)，保證達(dá)標(biāo)的原料投入生產(chǎn)。進(jìn)廠的生產(chǎn)原料應(yīng)當(dāng)首先對(duì)包裝情況開展檢測(cè)，確保外包裝完好，各項(xiàng)標(biāo)簽記錄完整，依據(jù)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)開展染菌情況檢測(cè)。同時(shí)，還應(yīng)當(dāng)開閘好物料儲(chǔ)存保管工作，運(yùn)用達(dá)標(biāo)的原材料，結(jié)合各種劑型實(shí)際要求，藥品生產(chǎn)前對(duì)原材料開展篩選、清洗、滅菌等處理。直接入藥的藥材在配料前鑒定微生物滿足標(biāo)準(zhǔn)與否，確保成品衛(wèi)生學(xué)指標(biāo)達(dá)標(biāo)，對(duì)直接入藥含菌量高的中藥材依據(jù)其特性逐一開展滅菌處理。制劑包裝對(duì)確保制劑質(zhì)量至關(guān)重要，應(yīng)當(dāng)提高重視，要滿足藥品監(jiān)管部門相關(guān)規(guī)定，防止包裝材料在儲(chǔ)存、運(yùn)輸?shù)拳h(huán)節(jié)遭受污染，倘若包裝材料污染細(xì)菌不滿足標(biāo)準(zhǔn)，則應(yīng)當(dāng)開展滅菌處理方可投入使用。其二，確保生產(chǎn)用水質(zhì)量。生產(chǎn)用水應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)開展控制，例如控制好制粒過程中運(yùn)用的粘合液，應(yīng)當(dāng)運(yùn)用經(jīng)高溫煮沸殺菌處理的純水，應(yīng)當(dāng)運(yùn)用流動(dòng)水對(duì)藥材進(jìn)行洗滌，運(yùn)用完畢的水不可再用于洗滌其他藥材。適時(shí)對(duì)生產(chǎn)用水質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)，加大對(duì)純化水防污染管理力度，保證儲(chǔ)藏、輸送純化水容器及管道材質(zhì)的穩(wěn)定性，應(yīng)當(dāng)運(yùn)用可靠的不銹鋼材質(zhì)，縮減管線死角，定期對(duì)輸送管道、容器進(jìn)行消毒處理。最后，適時(shí)依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)對(duì)純化水、自來水開展質(zhì)量控制。其三，加大對(duì)環(huán)境與設(shè)備的有效管理。構(gòu)建科學(xué)健全的管理制度，確保潔凈區(qū)個(gè)環(huán)境指標(biāo)達(dá)標(biāo)，并按照規(guī)定進(jìn)行滅菌、使用、維護(hù)、保養(yǎng)等，并進(jìn)行詳細(xì)記錄。藥品生產(chǎn)設(shè)備應(yīng)當(dāng)結(jié)合生產(chǎn)工藝要求及生產(chǎn)規(guī)模而定，只要與產(chǎn)品直接接觸的設(shè)備，便應(yīng)當(dāng)確保設(shè)備內(nèi)表面光滑無死角。各個(gè)生產(chǎn)環(huán)節(jié)盡可能縮減微生物污染，應(yīng)適時(shí)清洗、消毒。藥品生產(chǎn)前應(yīng)當(dāng)檢測(cè)容器、設(shè)備、輸送藥液潔凈與否或者是否需要消毒，否則不可開展新產(chǎn)品生產(chǎn)。

4 結(jié)束語

總而言之，在藥品生產(chǎn)中，對(duì)原料、生產(chǎn)場(chǎng)所、生產(chǎn)過程的微生物控制是確保藥品質(zhì)量的重要前提，因而運(yùn)用微生物鑒定技術(shù)高效、準(zhǔn)確地獲取檢測(cè)結(jié)果，對(duì)現(xiàn)階段藥品微生物檢測(cè)工作而言至關(guān)重要。新形勢(shì)下，藥品生產(chǎn)行業(yè)相關(guān)人員應(yīng)當(dāng)加大研究力度，提高對(duì)微生物鑒定技術(shù)內(nèi)涵特征的有效認(rèn)識(shí)，推進(jìn)對(duì)微生物鑒定技術(shù)的科學(xué)合理應(yīng)用，“開展好藥品生產(chǎn)原料控制”、“確保生產(chǎn)用水質(zhì)量”、“加大對(duì)環(huán)境與設(shè)備的有效管理”等，積極促進(jìn)藥品生產(chǎn)的安全有序開展。

參考文獻(xiàn)

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