一起水貂巴氏桿菌病的診治報告

孫鑫鵬王文佳董馨李夢瑩許立華（寧夏大學(xué)農(nóng)學(xué)院寧夏銀川750021）

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一起水貂巴氏桿菌病的診治報告

孫鑫鵬 王文佳 董馨 李夢瑩 許立華*（寧夏大學(xué)農(nóng)學(xué)院 寧夏 銀川 750021）

2017年8月初，山東威海某水貂養(yǎng)殖場水貂發(fā)生死亡，剖檢病死水貂并進(jìn)行細(xì)菌分離、鑒定，確診為巴氏桿菌感染。經(jīng)藥敏試驗(yàn)篩選、使用敏感藥物，結(jié)合消毒等措施，有效控制病情?，F(xiàn)將診治結(jié)果報告如下。

1 發(fā)病情況

山東威海某水貂養(yǎng)殖場養(yǎng)殖丹麥紅眼白貂1200只，其中皮用貂900只、種用貂300只。2017年8月初貂群發(fā)病，3 d內(nèi)共死亡30只，其中種用貂死亡21只，皮用貂死亡9只，給養(yǎng)殖場造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。

2 臨床癥狀

病貂精神不振，呼吸急迫，未見明顯癥狀便已死亡。

3 剖檢變化

就診當(dāng)日，剖檢6只病死貂，其病變大致相同，主要表現(xiàn)為肺淤血，切開有大量泡沫液體；心肌發(fā)紺，冠狀血管充血、有點(diǎn)狀出血點(diǎn)；肝臟腫大、充血，表面可見針尖大小灰白色壞死點(diǎn)；脾臟腫大，呈暗紅色等。

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1 細(xì)菌分離和鑒定 取病變明顯的臟器觸片后染色鏡檢，均能見大量革蘭氏陰性兩端鈍圓小桿菌。取病死貂肝、肺，接種綿羊鮮血瓊脂(100ml/L)，37℃培養(yǎng)18~24h后觀察。在血液瓊脂平板上，形成灰白色、濕潤、不溶血的露珠狀菌落。

4.2 生化試驗(yàn) 對分離菌進(jìn)行生化試驗(yàn)，結(jié)果表明本菌發(fā)酵葡萄糖、蔗糖，不能發(fā)酵阿拉伯糖、鼠李糖、乳糖；不水解明膠；氧化酶、吲哚試驗(yàn)為陽性。上述試驗(yàn)結(jié)果與巴氏桿菌的生化反應(yīng)結(jié)果基本一致[1]。

4.3 分子生物學(xué)診斷 提取細(xì)菌基因組DNA，參照文獻(xiàn)報道的方法合成一對用于擴(kuò)增細(xì)菌16S rRNA基因序列的通用引物[2]，上游引物：5′-AGAGTTTGATCATGGCTC AG-3′；下游引物：5′-ACGGTTACCTTGTTACGACTT-3′。以基因組DNA為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳，在1000~2000bp之間出現(xiàn)目的條帶。將PCR產(chǎn)物送交寶生物工程(大連)有限公司測序，利用NCBI的BLAST工具將測序結(jié)果進(jìn)行同源性比對，結(jié)果顯示擴(kuò)增序列與多殺性巴氏桿菌(GenBank序列號CP 020405.1)16S rRNA的基因序列同源性為100%，因此可確定分離菌株為多殺性巴氏桿菌。

4.4 致病性試驗(yàn) 將分離菌接種于腦心浸液中于37℃培養(yǎng)18~24h。選取10只健康體重相近的ICR小白鼠，5只腹腔注射菌液0.25ml菌液(2.48×108CFU/ml)，5只腹腔注射等量無菌腦心浸液。小鼠攻毒后連續(xù)觀察7d。結(jié)果攻毒小鼠在36h內(nèi)全部死亡，并能從死亡小鼠體內(nèi)分離到巴氏桿菌。對照小鼠全部健活。

附圖 PCR 擴(kuò)增分離菌16S rRNA基因結(jié)果

M. DNA標(biāo)準(zhǔn)DL2000; 1. 分離菌；2，陰性對照

5 藥敏試驗(yàn)

選擇14種藥敏紙片(購自杭州濱和微生物試劑有限公司)對分離菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。結(jié)果顯示該株分離菌對頭孢他啶、頭孢哌酮、鏈霉素、慶大霉素、卡那霉素、頭孢曲松、哌拉西林、氨芐西林、頭孢噻肟高度敏感；對強(qiáng)力霉素、阿米卡星、新霉素中度敏感；對左氧氟沙星、氧氟沙星耐藥。

6 治療措施

對發(fā)病貂群用頭孢他啶25mg/kg拌料口服，用15%石灰乳消毒過道、糞便等，甲醛熏蒸貂舍，籠具、食槽等用癸甲溴銨消毒并于太陽下暴曬。2d以后沒有死亡出現(xiàn)，5d以后全群好轉(zhuǎn)，隨訪5周，未再出現(xiàn)新的病例，說明該病得以控制。

7 討論

調(diào)查期間發(fā)現(xiàn)該養(yǎng)殖場所用飼料均新鮮無霉變且未經(jīng)細(xì)菌污染，同時貂舍通風(fēng)、衛(wèi)生良好，故而排除因飼料、應(yīng)激等因素而導(dǎo)致貂群發(fā)病。本次發(fā)病主要發(fā)生在種用貂，皮用貂發(fā)病較少。深入調(diào)查發(fā)現(xiàn)該養(yǎng)殖場曾發(fā)病前1周購進(jìn)一批種貂，只隔離3d便進(jìn)行混群，推測可能是由于外購種貂攜帶巴氏桿菌而導(dǎo)致此次巴氏桿菌病的暴發(fā)。因此，建議養(yǎng)殖場外購種畜時一定要進(jìn)行隔離觀察，確認(rèn)不攜帶病原微生物在進(jìn)行混群。此外，在貂群發(fā)病時，該養(yǎng)殖場一直采取左氧氟沙星拌料口服進(jìn)行治療，但效果不佳。故而當(dāng)暴發(fā)細(xì)菌性疾病時，應(yīng)當(dāng)結(jié)合藥敏試驗(yàn)，選擇敏感藥物進(jìn)行治療，及早控制病情，降低損失。

[1] 李一經(jīng). 獸醫(yī)微生物學(xué)[M]. 北京: 高等教育出版社, 2011: 170.

[2] 陳香碧, 蘇以榮, 何尋陽等. 喀斯特原生土壤與退化生態(tài)系統(tǒng)土壤細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)[J]. 應(yīng)用生態(tài)學(xué)報, 2009, 20(4): 863-871.

（2017–10–06）

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