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    NaCl和PEG脅迫對(duì)金花葵種子萌發(fā)的影響研究

    2018-03-06 03:48:43孫元新閆恩維胡偉謝晨陽(yáng)陳宇
    中國(guó)林副特產(chǎn) 2018年1期
    關(guān)鍵詞:培養(yǎng)皿金花發(fā)芽率

    孫元新,閆恩維,胡偉,謝晨陽(yáng),陳宇

    (1.牡丹江市林業(yè)局林業(yè)工作總站,黑龍江 牡丹江 157009;2.黑龍江省林副特產(chǎn)研究所,黑龍江省非木質(zhì)林產(chǎn)品研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,黑龍江 牡丹江 157011)

    金花葵[Abelmoschusmauihot( L. ) Medic],別名:菜芙蓉、野芙蓉等, 1年生草本植物,原產(chǎn)地河北省[1],瀕危植物,被稱為植物界的“大熊貓”。其花、嫩果富含總黃酮、氨基酸、微量元素、雄性激素等,種子富含不飽和脂肪酸、維生素E等,金花葵全株有降血脂、抗衰老、治療糖尿病、解熱抗炎、免疫調(diào)節(jié)、保肝護(hù)肝等功效。金花葵株型高大、花大美麗、淡黃色、花期長(zhǎng)等特點(diǎn),是庭院、公園、機(jī)關(guān)單位等綠化的優(yōu)質(zhì)經(jīng)濟(jì)植物[2]。目前北方地區(qū)金花葵人工引種栽培研究處于起步階段,分析其種子萌發(fā)特性及抗脅迫能力,對(duì)其北方地區(qū)引種栽培意義重大[3-4]。

    實(shí)驗(yàn)研究了金花葵種子形態(tài)及最佳萌發(fā)條件,探討了水分、光照和溫度等外部條件對(duì)種子處理萌發(fā)的影響,研究金花葵種子適宜的萌發(fā)條件,并對(duì)耐鹽(NaCl)脅迫和耐PEG(聚乙二醇)滲透脅迫下的種子萌發(fā)情況進(jìn)行分析[5],為金花葵優(yōu)質(zhì)種子選擇和苗木生產(chǎn)提供了科學(xué)參考。

    1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

    1.1 材料

    金花葵種子于2016年10月黑龍江省林口縣柳樹(shù)林場(chǎng)苗圃采種,種子采后,去雜質(zhì),選擇無(wú)病蟲害優(yōu)質(zhì)種子自然貯藏。

    1.2 時(shí)間

    2016年10~12月進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。(1)觀察金花葵種子的形態(tài),儀器測(cè)量種子千粒重。(2)進(jìn)行金花葵種子耐鹽(NaCl溶液)脅迫和耐PEG(聚乙二醇)脅迫能力實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

    1.3 方法

    1.3.1 種子形態(tài)與千粒重。觀測(cè)記錄金花葵種子形態(tài)。取貯藏種子100粒,測(cè)量并計(jì)算種子長(zhǎng)度和寬度的平均值。取貯藏種子1000粒,平均分配10組,分別稱重,取平均值計(jì)算種子千粒重。

    1.3.2 種子吸水。隨機(jī)取貯藏種子100粒,浸泡于25.5℃溫水中,保持恒溫,1h稱重1次,稱重時(shí)吸干種子表面水分,直到種子重量無(wú)變化時(shí)停止稱重和記錄。

    1.3.3 種子發(fā)芽。用清洗干凈的培養(yǎng)皿,在培養(yǎng)皿底部放置3層濾紙,按照不同的處理分組,加10mL處理液使濾紙吸液飽和,選取貯藏的種子,用1.0%的高錳酸鉀溶液浸泡10 min消毒,之后清水沖洗干凈,放置25.5℃溫水浸泡8h,之后將種子放置在處理好的培養(yǎng)皿中,一個(gè)培養(yǎng)皿放置種子60粒,培養(yǎng)皿和種子一起稱重,記為重量A,置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),培養(yǎng)箱溫度設(shè)置25.5℃,由于恒溫箱消耗種子和培養(yǎng)皿水分,所以隔6h加水至原重,每12h對(duì)萌發(fā)種子進(jìn)行1次計(jì)數(shù),發(fā)芽實(shí)驗(yàn)完成后測(cè)定其種子的胚根、胚軸長(zhǎng)度。各發(fā)芽指數(shù)計(jì)算方法如下:

    發(fā)芽率(%)=n/N×100% (n為萌發(fā)種子數(shù),N為供試種子總數(shù))

    發(fā)芽指數(shù)(GI) =∑(Gt/ Dt)(G是t日的發(fā)芽率,試驗(yàn)6.5 d;Dt為相對(duì)應(yīng)的發(fā)芽天數(shù))

    活力指數(shù)(VI) = GI×萌發(fā)種子長(zhǎng)度(胚根長(zhǎng)度+胚軸長(zhǎng)度)

    (1)金花葵種子在不同溫度和光照條件下萌發(fā)實(shí)驗(yàn):種子處理后,在20.5℃、24.5℃、28.5℃溫度條件下,用培養(yǎng)皿濾紙法測(cè)定金花葵種子,方法一:0~20h無(wú)光照;方法二:光照12h、無(wú)光照8h,計(jì)算2種方法種子的發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)和活力指數(shù)。

    (2)金花葵種子NaCl溶液處理的萌發(fā)實(shí)驗(yàn):根據(jù)上述實(shí)驗(yàn),選擇適宜的種子萌發(fā)條件,用培養(yǎng)皿濾紙法在0、50、100、150、200 mol/L NaCl溶液濃度下,進(jìn)行種子萌發(fā)實(shí)驗(yàn),累計(jì)各處理發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)和活力指數(shù)。實(shí)驗(yàn)參數(shù)見(jiàn)表1。

    (3)金花葵種子PEG-6000(聚乙二醇)溶液模擬處理萌發(fā)實(shí)驗(yàn):根據(jù)于軍[6]的方法,配置滲透勢(shì)不同的PEG-6000溶液。在適宜其種子萌發(fā)條件下,用培養(yǎng)皿濾紙法進(jìn)行實(shí)驗(yàn),種子在6%、12%、18%、24%、30%的PEG-6000溶液中,其種子的萌發(fā)率、發(fā)芽指數(shù)和活力指數(shù)。實(shí)驗(yàn)參數(shù)見(jiàn)表1。

    表1 NaCI處理液和PEG處理液相關(guān)參數(shù)

    1.3.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析。相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理和分析,用Microsoft Excel 2012, GraphPadPrism 7和SPSS 16. 0軟件計(jì)算完成。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差計(jì)算顯示。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 種子特性與千粒重

    金花葵種子呈深灰褐色,腎形,長(zhǎng)0. 4299cm±0. 039cm,寬0. 416cm士0.036cm,千粒重為20.493g±0. 04 g。

    2.2 種子吸水速度

    圖1是金花葵50粒干燥種子,在25.5℃溫水中浸種時(shí)種子質(zhì)量隨時(shí)間變化的曲線。實(shí)驗(yàn)表明,種子在浸種7.3h內(nèi)吸水速度快,7.3~9.9 h內(nèi)吸水速度逐漸減慢,約8h時(shí)種子吸水膨脹飽和。

    圖1 不同浸種處理種子質(zhì)量比較

    2.3 種子萌發(fā)條件比較

    圖2 金花葵不同溫度和光照條件發(fā)芽率比較

    根據(jù)圖2數(shù)據(jù)分析,金花葵種子在溫度 22℃和24℃時(shí)萌發(fā)較緩,總的發(fā)芽率平均為10.6%;在溫度28.5℃、光照14.5h、無(wú)光照10.5 h的條件下,種子的萌發(fā)速率和總的發(fā)芽率最高,累計(jì)種子發(fā)芽率達(dá)57.9 %。

    圖3-1 不同溫度和光照條件種子發(fā)芽指數(shù)

    圖3-2 不同溫度和光照條件種子活力指數(shù)

    根據(jù)圖3-1、圖3-2顯示分析,在溫度28.5℃、光照14.5 h、無(wú)光照10 .5h條件下,處理的種子萌發(fā)速率高。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析得出,溫度和光照是影響金花葵種子萌發(fā)的關(guān)鍵因子,其種子適宜在相對(duì)較高的溫度和光照、無(wú)光照條交替的條件下萌發(fā)。

    2.4 NaCl溶液處理對(duì)種子萌發(fā)的影響

    圖4 種子不同濃度AaCl處理發(fā)芽率比較

    數(shù)據(jù)圖4顯示,金花葵種子適宜在NaCl溶液0 mol/L的條件下進(jìn)行萌發(fā)處理,NaCl溶液濃度升高,種子的萌發(fā)和累計(jì)發(fā)芽率下降,3d后各個(gè)指標(biāo)逐漸趨于平穩(wěn)。濃度50 mol/L、100 mol/L和150mol/L NaCl溶液處理?xiàng)l件,發(fā)芽率差異不顯著。200mol/L NaCl溶液處理?xiàng)l件下,種子初始萌發(fā)速度慢,在3.3 d后才開(kāi)始少量萌發(fā),且發(fā)芽率較低。

    圖5-1 種子不同濃度NaCl處理發(fā)芽指數(shù)比較(a、b、c代表各處理0.5水平差異)

    從圖5分析得出,NaCl溶液濃度的逐漸升高,金花葵種子發(fā)芽指數(shù) (圖5-1)和活力指數(shù)(圖5-2)均逐步下降;100~200 mol/L NaCl溶液處理范圍內(nèi),種子發(fā)芽指數(shù)和活力指數(shù)降到最低。通過(guò)累計(jì)發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)和活力指數(shù)的比較, NaCl溶液脅迫能力對(duì)種子活力指數(shù)影響較大。200 mol/L NaCl溶液處理時(shí),只有少量的種子萌發(fā),而且,發(fā)芽的種子逐漸停止生長(zhǎng)直到死亡,種子活力指數(shù)為0。

    圖5-2 種子不同濃度NaCl處理活力指數(shù)比較(a、b、c代表各處理0.5水平差異)

    通過(guò)分析NaCl處理濃度和種子活力指數(shù),得回歸方程:

    y=-32.801x3+351.12x2-1167x-1371.9

    R2=0. 9972

    根據(jù)其方程計(jì)算,金花葵種子25 mol/L NaCI溶液處理時(shí),75.5%種子發(fā)芽且生長(zhǎng)較好,34.6mol/L NaCl處理,50%種子萌發(fā)良好,163 mol/L NaCl處理,10.3%種子萌發(fā)良好,分析得出金花葵種子不耐NaCI脅迫,可以在15~25mol/L NaCl處理區(qū)間種子萌發(fā)良好,種子萌發(fā)耐NaCl極限濃度為160~170 mol/L。

    圖6 種子不同濃度PEG處理累計(jì)發(fā)芽比較

    實(shí)驗(yàn)采用PEG-6000處理金花葵種子,采用滲透法進(jìn)行模擬實(shí)驗(yàn),分析金花葵種子發(fā)芽率。根據(jù)圖6顯示,其種子在PEG非滲透肋迫下萌發(fā)良好,PEG處理液0mol/L時(shí),種子萌發(fā)較快,累計(jì)發(fā)芽率高達(dá)57.9%;隨著PEG處理濃度的升高,萌發(fā)的種子數(shù)量和累計(jì)發(fā)芽率均呈下降趨勢(shì);20%和25 % PEG處理,種子初始萌發(fā)時(shí)間延遲1d多,累計(jì)發(fā)芽率較低,僅為10.7%和6.2%。

    圖7-1 種子不同濃度PEG處理發(fā)芽指數(shù)(a、b、c代表各處理關(guān)差異)

    圖7-2 種子不同濃度PEG處理活力指數(shù)(a、b、c代表各處理關(guān)差異)

    根據(jù)圖7-1、圖7-2分析,金花葵種子的發(fā)芽指數(shù)、活力指數(shù)隨著PEG處理濃度的升高而逐漸降低,0%濃度PEG處理,種子發(fā)芽指數(shù)和活力指數(shù)高,5% 濃度PEG滲透脅迫處理時(shí),種子發(fā)芽指數(shù)和活力指數(shù)明顯下降,說(shuō)明金花葵種子萌發(fā)期對(duì)滲透脅迫敏感。

    3 結(jié)論

    金花葵種子呈深灰褐色,腎形,長(zhǎng)0.4299cm±0.039cm,寬0.416cm±0.036cm,千粒重為20.493g±0.04g。種子無(wú)休眠特性;金花葵干燥種子,在25.5℃溫水中浸種時(shí)吸水最快,約8h時(shí)種子吸水膨脹飽和;金花葵種子在溫度28.5℃,光照14.5h和無(wú)光照10.5 h交替的條件下,種子萌發(fā)率最高,累計(jì)種子發(fā)芽率達(dá)57.9%。溫度和光照是影響金花葵種子萌發(fā)的關(guān)鍵因子,其種子適宜在相對(duì)較高的溫度和光照、無(wú)光照條交替的條件下萌發(fā)。金花葵種子適宜在NaCl溶液0 mol/L的條件下進(jìn)行萌發(fā)處理,NaCl溶液濃度升高,種子的萌發(fā)和累計(jì)發(fā)芽率下降,種子發(fā)芽指數(shù)和活力指數(shù)均逐步下降;金花葵種子的發(fā)芽指數(shù)、活力指數(shù)隨著PEG處理濃度的升高而逐漸降低,0%濃度PEG處理,種子發(fā)芽指數(shù)和活力指數(shù)高。說(shuō)明金花葵種子萌發(fā)期鹽脅迫和PEG滲透脅迫敏感。

    1)金花葵種子處理時(shí),受溫度、光照、濕度、NaCl濃度和PEG滲透勢(shì)等條件制約。NaCl溶液脅迫和PEG滲透條件下,金花葵種子萌發(fā)變化較大,其深層次原因,需要探討。

    2)在金花葵生產(chǎn)中,先在適宜的條件進(jìn)行育苗,之后進(jìn)行煉苗,增強(qiáng)苗木抗性,再進(jìn)行移栽,是金花葵目前掌握的最佳引種栽培技術(shù),配套的栽培技術(shù)需要繼續(xù)完善。

    3)金花葵幼苗對(duì)干旱、鹽、堿等肋迫能力,今后的實(shí)驗(yàn)需要深入研究。

    [1]吳名全.珍稀植物—金花葵[J].現(xiàn)代園藝,2008(10):16-17.

    [2]曹利華.苗明三. 金花葵的現(xiàn)代研究與綜合利用分析[J].中醫(yī)學(xué)報(bào),2016(12):1966-1968.

    [3]盧丹,賈瑞波.中藥金花葵的研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥物評(píng)價(jià),2015(02): 90-92.

    [4]曹東怡,虞泓,曾文波,等.金花葵不同部位化學(xué)成分分析[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2017(22):90-92.

    [5]郭艷超,孫昌禹,王文成,等.NaCI脅迫對(duì)芙蓉葵和黃秋葵種子萌發(fā)的影響[J].河北農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,15 (08) :10-14.

    [6]于軍,焦培培. 聚乙二醇(PEG6000)模擬干旱脅迫抑制矮沙冬青種子的萌發(fā)[J].基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué),2010(02). 355-360.

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