誘導(dǎo)型啟動(dòng)子在植物基因工程中的研究進(jìn)展

楊瑞娟 ，白建榮 ，李 銳 ，常利芳

（1.山西大學(xué)生物工程學(xué)院，山西 太原 030006；2.山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所，山西 太原 030031）

啟動(dòng)子是位于基因的上游，能夠被RNA聚合酶特異性識(shí)別的一段DNA序列。它像“開關(guān)”，控制基因表達(dá)的起始時(shí)間和程度。啟動(dòng)子組成包括核心啟動(dòng)子與上游啟動(dòng)子元件。核心啟動(dòng)子由轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)、TATA框和5'UTR序列組成[1-2]。上游啟動(dòng)子元件包括CAAT框、GC框和一些組成型及特異型元件，這些元件結(jié)合相應(yīng)的蛋白因子能夠提高轉(zhuǎn)錄效率[3]。啟動(dòng)子按功能及作用方式可分為誘導(dǎo)型啟動(dòng)子、組織特異型啟動(dòng)子和組成型啟動(dòng)子[4]。但是某些條件下，一個(gè)啟動(dòng)子可能有2類啟動(dòng)子的特性[5]。

植物基因工程是將外源基因?qū)胧荏w細(xì)胞，使其與受體染色體整合，改變受體植物遺傳特性的一種方法。它不但可以克服物種間的生殖隔離，還可以大大加快植物育種進(jìn)程。外源基因的表達(dá)必須有啟動(dòng)子的驅(qū)動(dòng)。傳統(tǒng)的基因工程中使用的大多是組成型啟動(dòng)子，它在植物的整個(gè)生命周期中都高強(qiáng)度表達(dá)，導(dǎo)致基因產(chǎn)物過度累積以及隨之而來的代謝紊亂甚至植物死亡。誘導(dǎo)型啟動(dòng)子是在植物適應(yīng)環(huán)境和長(zhǎng)期進(jìn)化過程中形成的，能夠響應(yīng)特殊的生物、物理、化學(xué)信號(hào)，進(jìn)而提高特定基因轉(zhuǎn)錄水平，來適應(yīng)一定范圍內(nèi)環(huán)境變化的一類啟動(dòng)子。在沒有誘導(dǎo)因子存在的條件下，它控制的編碼基因不表達(dá)或本底表達(dá)，一旦環(huán)境中出現(xiàn)誘導(dǎo)因素，編碼基因表達(dá)迅速增加。按照響應(yīng)環(huán)境的不同可以分為生物脅迫誘導(dǎo)的啟動(dòng)子、物理脅迫誘導(dǎo)的啟動(dòng)子、化學(xué)脅迫誘導(dǎo)的啟動(dòng)子[6]。誘導(dǎo)型啟動(dòng)子不但可以避免目的基因的持續(xù)表達(dá)對(duì)植物能量的過度消耗，而且可以消除基因產(chǎn)物積累對(duì)植物本身造成的傷害，成為近年來植物基因工程的研究熱點(diǎn)。

筆者從生物、物理、化學(xué)3個(gè)誘導(dǎo)方面對(duì)抗逆相關(guān)誘導(dǎo)型啟動(dòng)子的研究進(jìn)行了綜述，以期為相關(guān)學(xué)者的研究提供依據(jù)。

1 生物脅迫誘導(dǎo)型啟動(dòng)子

植物在生長(zhǎng)發(fā)育過程中會(huì)受到病原微生物如病毒、細(xì)菌、真菌等的侵染以及害蟲的吞食侵害，從而導(dǎo)致存活率下降。生物脅迫誘導(dǎo)型啟動(dòng)子是指在植物受到生物脅迫時(shí)可以激活保護(hù)蛋白基因并調(diào)控其相關(guān)表達(dá)，從而消除有害代謝產(chǎn)物對(duì)植物自身起到保護(hù)作用。目前相關(guān)研究已取得一定進(jìn)展（表1）。

表1 生物脅迫誘導(dǎo)型啟動(dòng)子

1.1 病原菌誘導(dǎo)型啟動(dòng)子

WRKYs轉(zhuǎn)錄因子在植物抗病反應(yīng)中起重要作用，PETITOT等[7]克隆了咖啡WRKY轉(zhuǎn)錄因子的同源基因啟動(dòng)子CaWRKY1a和CaW-RKY1b，發(fā)現(xiàn)真菌脅迫可以誘導(dǎo)該啟動(dòng)子。何康[8]通過研究水稻抗紋枯病基因OS2H16啟動(dòng)子POs2H16，確定AATCA片段能夠獨(dú)立響應(yīng)紋枯病菌誘導(dǎo)。牟少亮等[9]研究發(fā)現(xiàn)，OsERF96基因可應(yīng)答白葉枯病或稻瘟病病原菌的侵染，其啟動(dòng)子可以應(yīng)答病原菌侵染誘導(dǎo)。

1.2 害蟲誘導(dǎo)型啟動(dòng)子

當(dāng)受到害蟲吞食后植物體內(nèi)水楊酸（SA）劇增，促使相關(guān)基因表達(dá)。KUMAR等[22]將煙草病害蛋白啟動(dòng)子PR-1a嵌合CaMV35S導(dǎo)入棉花，發(fā)現(xiàn)昆蟲吞食能夠驅(qū)動(dòng)cry1EC基因表達(dá)，同時(shí)噴施SA可以提高棉花的抗蟲性。有研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)擬南芥根部有線蟲寄生時(shí)，3種細(xì)菌防衛(wèi)素基因（Pdf2.1，Pdf2.2，Pdf2.3）被誘導(dǎo)表達(dá)。SIDDIQUE等[23]將Pdf2.1啟動(dòng)子與GUS基因融合轉(zhuǎn)入擬南芥之后用線蟲感染，發(fā)現(xiàn)GUS基因在其根中特異性表達(dá)。關(guān)麗梅等[24]將從秈稻基因組中獲得的Os01g73940啟動(dòng)子片段BPHIP連接到帶有GUS報(bào)告基因的植物表達(dá)載體上，并轉(zhuǎn)入中花11。通過GUS組織化學(xué)染色和定量RT-PCR檢測(cè)證明，BPHIP是一個(gè)受褐飛虱和茉莉酸處理誘導(dǎo)上調(diào)的啟動(dòng)子。

2 物理脅迫誘導(dǎo)型啟動(dòng)子

物理脅迫誘導(dǎo)型啟動(dòng)子是指響應(yīng)光、極端溫度、干旱等逆境脅迫使植物適應(yīng)非正常光照、溫度和干旱等惡劣環(huán)境，維持生長(zhǎng)發(fā)育。這類啟動(dòng)子的研究開始的較早，研究成果最多（表2）。

2.1 光誘導(dǎo)型啟動(dòng)子

光在植物生長(zhǎng)發(fā)育中起重要作用，如光合作用、光形態(tài)建成。常見的光誘導(dǎo)型啟動(dòng)子有cab啟動(dòng)子和rbcS基因啟動(dòng)子。一般光誘導(dǎo)啟動(dòng)子同時(shí)具有綠色組織特異性[5，25]。王旭靜等[25]研究發(fā)現(xiàn)，中棉Gacab啟動(dòng)子含有GT1元件I-box和G-box等光誘導(dǎo)元件并且具有光誘導(dǎo)性。習(xí)雨琳等[5]將A－tRBCS-1A啟動(dòng)子片段轉(zhuǎn)化擬南芥，分析不同光照條件下的表達(dá)模式，結(jié)果顯示，該啟動(dòng)子是光誘導(dǎo)型和組織特異型啟動(dòng)子。

2.2 溫度誘導(dǎo)型啟動(dòng)子

2.2.1 高溫誘導(dǎo)型啟動(dòng)子 高溫脅迫條件下植物體內(nèi)會(huì)大量合成如HSP70，HSP90和HSP100等熱激蛋白來減輕脅迫引起的傷害[26]，當(dāng)熱激元件HSE與熱激因子HSF相互作用才能激活熱激蛋白基因的轉(zhuǎn)錄活性。RR?NDL等[27]研究發(fā)現(xiàn)，大豆Gmhsp17.32B啟動(dòng)子具有一段熱誘導(dǎo)因子（HSE）的同功序列。FREEMAN等[28]研究表明，大麥Hvhsp17基因啟動(dòng)子在高溫下能驅(qū)動(dòng)Hvhsp17基因在水稻中表達(dá)。

2.2.2 冷凍誘導(dǎo)型啟動(dòng)子 低溫條件下，植物體內(nèi)會(huì)發(fā)生如改變蛋白質(zhì)、碳水化合物組分或合成一些新的物質(zhì)等一系列生化反應(yīng)。冷響應(yīng)基因COR（cold-regulated）含有順式作用元件CRT和DRE[29]。BELINTANI等[30]研究發(fā)現(xiàn)，甘蔗ipt基因啟動(dòng)子ATCOR15a可使ipt基因在冷凍脅迫下表達(dá)量增加，減少冷凍引起植物的損傷。WANG等[31]分離了玉米中受低溫、干旱誘導(dǎo)顯著表達(dá)的蛋白激酶基因ZmCKS2的啟動(dòng)子，并對(duì)其進(jìn)行功能驗(yàn)證。結(jié)果表明，ZmCKS2啟動(dòng)子受干旱、低溫脅迫和不同激素（ABA，MeJA，SA）的多因素誘導(dǎo)，缺失啟動(dòng)子片段P2（367 bp）是受低溫、MeJA和SA誘導(dǎo)的最小的啟動(dòng)子片段。呂兆勇等[32]研究證明，葡萄PCAN啟動(dòng)子具有低溫和干旱脅迫下誘導(dǎo)表達(dá)的特性（表2）。

表2 物理脅迫誘導(dǎo)型啟動(dòng)子

2.3 干旱誘導(dǎo)型啟動(dòng)子

干旱條件下，植物根毛細(xì)胞感知水分脅迫信號(hào)并進(jìn)行信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，誘導(dǎo)水分脅迫相關(guān)基因的表達(dá)。1992年YAMAGUCHI-SHINOZAKI等[53]首次從擬南芥中分離并且克隆出逆境誘導(dǎo)型啟動(dòng)子rd29。BIHMIDINE等[54]研究發(fā)現(xiàn)，rd29A，rd29B基因啟動(dòng)子在干旱條件下均被明顯激活，是抗旱型啟動(dòng)子。楊梅等[55]分離了干旱脅迫強(qiáng)烈誘導(dǎo)的水稻內(nèi)源基因Oshox24的啟動(dòng)子Oshox24P，并通過GUS活性檢測(cè)證明，該啟動(dòng)子是干旱誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，可以調(diào)控目標(biāo)基因在水稻中的表達(dá)。

3 化學(xué)脅迫誘導(dǎo)型啟動(dòng)子

化學(xué)脅迫誘導(dǎo)型啟動(dòng)子是指在激素、高鹽、營(yíng)養(yǎng)元素缺乏和含量過高等逆境條件下使植物可以生長(zhǎng)的一類啟動(dòng)子。這類啟動(dòng)子的誘導(dǎo)因素受人類活動(dòng)影響較大，比如為了作物增產(chǎn)而過量施肥，導(dǎo)致土地鹽堿化和土壤板結(jié)，使農(nóng)作物受到新的脅迫，導(dǎo)致減產(chǎn)。與物理脅迫誘導(dǎo)型啟動(dòng)子相比，該類啟動(dòng)子研究較少（表3）。

表3 化學(xué)脅迫誘導(dǎo)型啟動(dòng)子

3.1 激素誘導(dǎo)型啟動(dòng)子

植物的生長(zhǎng)發(fā)育過程受激素的調(diào)節(jié)作用，但是激素不能直接作用于啟動(dòng)子序列，而是先與植物體內(nèi)受體結(jié)合，激活受體蛋白，然后再由作用于啟動(dòng)子中相應(yīng)激素應(yīng)答元件，驅(qū)動(dòng)下游基因的表達(dá)，從而引起一系列生理反應(yīng)[87]。XU等[70]分離了白松PsPR10啟動(dòng)子，并構(gòu)建融合報(bào)告基因載體轉(zhuǎn)入煙草，分別用 SA，ABA，JA，NaCl，甘露醇和 PEG-6000 處理轉(zhuǎn)基因植株，分別分析各種脅迫條件下GUS基因在根、莖、葉中的表達(dá)。結(jié)果表明，在所有脅迫條件下根的GUS活性均比對(duì)照組高，而莖和葉中GUS活性只在SA，ABA和JA條件下有增高。余建等[74]克隆了桑樹MnACO基因MnACO1啟動(dòng)子片段，對(duì)序列進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，含有響應(yīng)赤霉素的GARE-motif和響應(yīng)植物激素的AuxRE元件。GUS活性分析表明，MnACO1為誘導(dǎo)型啟動(dòng)子兼具組成型啟動(dòng)子特性。

3.2 鹽誘導(dǎo)型啟動(dòng)子

最早被克隆并進(jìn)行功能分析的鹽誘導(dǎo)型啟動(dòng)子是擬南芥rd29A基因的啟動(dòng)子[53]。張新宇等[82]對(duì)經(jīng)300 mmol/LNaCl處理前后的轉(zhuǎn)AtPUB18基因啟動(dòng)子的擬南芥幼苗進(jìn)行組織化學(xué)染色，結(jié)果表明，處理后GUS基因的表達(dá)量明顯上調(diào)，說明At－PUB18基因啟動(dòng)子是高鹽誘導(dǎo)型啟動(dòng)子。SUN等[83]研究發(fā)現(xiàn)，旱稻液泡膜質(zhì)子轉(zhuǎn)運(yùn)焦磷酸酶啟動(dòng)子TsVP1在高鹽誘導(dǎo)下有較強(qiáng)的活性。

3.3 營(yíng)養(yǎng)元素相關(guān)誘導(dǎo)型啟動(dòng)子

營(yíng)養(yǎng)元素在植物的生命活動(dòng)中起重要作用，是植物正常的生長(zhǎng)發(fā)育不可缺少的因素。在一定的濃度范圍內(nèi)，植物可以正常吸收外界環(huán)境中的營(yíng)養(yǎng)元素，然而當(dāng)環(huán)境中元素濃度不足或者過高，卻會(huì)對(duì)植物造成脅迫，影響植物生長(zhǎng)發(fā)育。

氮是植物蛋白質(zhì)、核酸和葉綠素的重要組成部分，氮素的含量直接影響葉片中葉綠素的含量，土壤中氮素缺乏會(huì)導(dǎo)致植物葉片黃化、根系量減少。劉生等[84]克隆了2個(gè)在大豆葉片或根系高豐度表達(dá)且響應(yīng)低氮脅迫的基因（RNDI和LNDI）的啟動(dòng)子，并分別融合GUS基因轉(zhuǎn)化擬南芥。GUS染色表明，2個(gè)基因的啟動(dòng)子都對(duì)低氮脅迫有響應(yīng)，在氮素脅迫環(huán)境條件下能夠調(diào)控組合的功能基因表達(dá)。銅是植物體多種酶類（細(xì)胞色素氧化酶、抗壞血酸氧化酶、多酚氧化酶等）的組成成分，還與光合作用有關(guān)。但植物正常生長(zhǎng)對(duì)銅需要少，土壤中銅含量由于污水灌溉和施用農(nóng)藥遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了植物所需，導(dǎo)致植物生長(zhǎng)受抑制甚至死亡。鐘活權(quán)[86]研究發(fā)現(xiàn)，擬南芥AtRD22啟動(dòng)子含有多個(gè)銅響應(yīng)元件CURECORECR，把該啟動(dòng)子與連接GUS報(bào)告基因轉(zhuǎn)化擬南芥后，發(fā)現(xiàn)高Cu2+脅迫條件下，AtRD22啟動(dòng)子能明顯誘導(dǎo)GUS基因在轉(zhuǎn)基因擬南芥莖和葉中表達(dá)。

4 小結(jié)與展望

誘導(dǎo)型啟動(dòng)子是僅在轉(zhuǎn)基因植物受到外界脅迫時(shí)驅(qū)動(dòng)外源基因表達(dá)的一種啟動(dòng)子，相比組成型啟動(dòng)子的表達(dá)模式，誘導(dǎo)型啟動(dòng)子可以節(jié)約植物體能量，減輕代謝負(fù)擔(dān)，在避免目的基因過量表達(dá)對(duì)植物的負(fù)面影響的同時(shí)提高植物抗逆性，具有重要的科研價(jià)值和商業(yè)價(jià)值。啟動(dòng)子主要通過順式作用元件來調(diào)控基因表達(dá)。一種啟動(dòng)子常常存在多種順式作用元件，這些元件以特殊組合方式調(diào)控相關(guān)抗逆基因的表達(dá)。目前脅迫誘導(dǎo)啟動(dòng)子研究主要集中在極端溫度、干旱和高鹽等方面，而關(guān)于營(yíng)養(yǎng)元素相關(guān)的誘導(dǎo)型啟動(dòng)子報(bào)道較少。

綜上所述，研究誘導(dǎo)型啟動(dòng)子作用方式和信號(hào)傳遞途徑之間聯(lián)系，可以為外源基因在轉(zhuǎn)基因植株精細(xì)調(diào)節(jié)提供理論依據(jù)。同時(shí)開展誘導(dǎo)型啟動(dòng)子尤其是營(yíng)養(yǎng)元素相關(guān)的啟動(dòng)子研究，培育營(yíng)養(yǎng)元素高吸收利用和重金屬耐受性新品種。最終將相關(guān)研究結(jié)果大規(guī)模應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐，加速植物基因工程改良植物的進(jìn)程。

［1］BASEHOAR AD，ZANTONS J，PUGH B F.Identification and distinct regulation of yeast TATA box-containing genes[J].Cell，2004，116（5）：699-709.

［2］ BRADY J，RADONOVICH M，THOREN M，et al.Simian virus 40 major late promoter：an upstream DNA sequence required for efficient in vitro transcription[J].Molecular&Cellular Biology，1984，4（1）：133-141.

［3］張曉楓.抗草甘膦基因植物雙價(jià)表達(dá)載體的構(gòu)建 [D].烏魯木齊：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008.

［4］王關(guān)林，方宏筠.植物基因工程 [M].2版.北京：科學(xué)出版社，2002.

［5］習(xí)雨琳，周朋，宋梅芳，等.擬南芥RBCS-1A基因受光調(diào)節(jié)表達(dá)模式及其啟動(dòng)子遺傳轉(zhuǎn)化應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].作物學(xué)報(bào)，2012，38（9）：1561-1569.

［6］肖興國(guó)，韓蕾.一種植物氣孔特異性啟動(dòng)子及其應(yīng)用：中國(guó)，CN 102433338 B[P].2012-05-02.

［7］ PETITOT A S，BARSALOBRES-CAVALLARI C，RAMIRO D，et al.Promoter analysis ofthe WRKYtranscription factors CaWRKY1a and CaWRKY1b homoeologous genes in coffee（Coffea arabica）[J].Plant Cell Reports，2013，32（8）：1263.

［8］何康.水稻病原誘導(dǎo)啟動(dòng)子POs2H16順式作用元件的分離與鑒定[D].泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2016.

［9］牟少亮，申磊，石星辰.水稻OsERF96應(yīng)答病原菌的表達(dá)及啟動(dòng)子的功能分析[J].植物遺傳資源學(xué)報(bào)，2017，18（1）：133-138.

［10］ SONG F M，GOODMAN R M.Cloning and identification of the promoter of the tobacco Sar8.2b gene，a gene involved in systemic acquired resistance[J].Gene，2002，290：115-124.

［11］ LI A，CHEN L，REN H，et al.Analysis of the essential DNA region for OsEBP-89 promoter in response tomethyljasmonic acid[J].Science in China Series C：Life Sciences，2008，51（3）：280-285.

［12］COUTOS-THéVENOT P，POINSSOT B，BONOMELLI A，et al.In vitro tolerance to Botrytis cinerea of grapevine 41B rootstock in transgenic plants expressing the stiibene synthase Vst1 gene under the control of a pathogen-inducible PR 10 promoter[J].J Exp Bot，2001，52：901-910.

［13］ SA Q，WANG Y，LI W，et al.The promoter of an antifungal protein gene from Gastrodia elata confers tissue-specific and fungus-inducible expression patterns and responds to both salicylic acid and jasmonic acid[J].Plant Cell Reports，2003，22（1）：79-84.

［14］李云鋒，朱蕊，謝龍旭，等.大麥 β-1，3- 葡聚糖酶基因（GIII）啟動(dòng)子在轉(zhuǎn)基因水稻中的誘導(dǎo)表達(dá) [J].植物生理與分子生物學(xué)學(xué)報(bào)，2005，31（2）：143-148.

［15］GAO Y，ZAN X L，WU X F，et al.Identification of fungus-responsive cis-acting element in the promoter of Brassica juncea chitinase gene，BjCHI1[J].Plant Science An International Journal of Experimental Plant Biology，2014，215/216：190-198.

［16］CHAI C，LINY，SHEND.Identification and functional characterization of the soybean GmaPPO12 promoter conferringPhytophthora sojae induced expression[J].Plos One，2013，8（6）：e67670.

［17］ ZHENG H Q，LIN S Z，QIAN Z，et al.Isolation and analysis of a TIR-specific promoter from poplar[J].Forest Ecosystems，2007，9（2）：95-106.

［18］CHOI J J，KLOSTERMAN S J.A promoter from pea gene DRR206 is suitable to regulate an elicitor-coding gene and develop disease resistance[J].Phytopathology，2004，94（6）：651-660.

［19］劉志欽，楊晟，蔡金森，等.辣椒CaWRKY5啟動(dòng)子的分離及其調(diào)控元件分析 [J].應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào)，2013，19（3）：389-394.

［20］ ADAMS-PHILLIPS L，BRIGGS A G.Disruption of poly（ADP-ribosyl）ation mechanisms alters responses of Arabidopsis to biotic stress[J].Plant Physiology，2010，152（1）：267-280.

［21］ ZHANG X C，LI M Y，RUAN M B，et al.Isolation of AtNUDT5，gene promoter and characterization of its activity in transgenic Arabidopsis thaliana [J].Applied Biochemistry&Biotechnology，2013，169（5）：1557-1565.

［22］KUMAR M，SHUKLA A K，SINGH H，et al.Development of insect resistant transgenic cotton lines expressing cry1EC gene from an insect bite and wound inducible promoter[J].Journal of Biotechnology，2009，140（3/4）：143-148.

［23］SIDDIQUE S，WIECZOREK K，SZAKASITS D，et al.The promoter of a plant defensin gene directs specific expression in nematode-induced syncytia in Arabidopsis roots[J].Plant Physiology&BiochemistryPpb，2011，49（10）：1100-1107.

［24］關(guān)麗梅，馬偉華，林擁軍，等.一個(gè)水稻褐飛虱為害誘導(dǎo)型啟動(dòng)子的克隆[J].植物保護(hù)，2016，42（1）：19-25.

［25］王旭靜，李為民，唐巧玲，等.中棉（Gossypium arboreum）光誘導(dǎo)基因Gacab啟動(dòng)子在轉(zhuǎn)基因煙草中的功能缺失分析 [J].作物學(xué)報(bào)，2009，35（6）：1006-1012.

［26］張晶紅，那杰.植物逆境脅迫耐受性啟動(dòng)子的研究進(jìn)展[J].植物生理學(xué)報(bào)，2014（6）：707-710.

［27］ PR?NDL R，SCH?FFL F.Heat shock elements are involved in heat shock promoter activation during tobacco seed maturation[J].Plant Molecular Biology，1996，31（1）：157-162.

［28］FREEMAN J，WEST J，SHEWRY P R，et al.Temporal and spatial control of transgene expression using a heat-inducible promoter in transgenic wheat[J].Plant Biotechnology Journal，2011，9（7）：788-796.

［29］YONG H C，CHANG H S，GUPTA R，et al.Transcriptional profiling reveals novel interactions between wounding，pathogen，abiotic stress，and hormonal responses in Arabidopsis[J].Plant Physiology，2002，129（2）：661-677.

［30］BELINTANI NG，GUERZONI J TS，MOREIRAR MP，et al.Improving low-temperature tolerance in sugarcane by expressing the ipt gene under a cold inducible promoter[J].Biologia Plantarum，2012，56（1）：71-77.

［31］ WANG F，LIU J，LI J，et al.Functional analyses of the maize CKS2，gene promoter in response to abiotic stresses and hormones[J].Acta Physiologiae Plantarum，2014，36（7）：1867-1878.

［32］呂兆勇，趙春梅，薛仁鎬.葡萄逆境脅迫誘導(dǎo)啟動(dòng)子的克隆及表達(dá)分析[J].華北農(nóng)學(xué)報(bào)，2016，31（1）：77-82.

［33］GAYLE LAMPPA，F(xiàn)ERENCNAGY，NAM-HAI CHUA.Light-reg ulated and organ-specific expression of a wheat Cab gene in transgenic tobacco[J].Nature，1985，316：750-752.

［34］ TADA Y，SAKAMOTO M，MATSUOKA M，et al.Expression of a monocot LHCP promoter in transgenic rice[J].The EMBO Journal，1991，10（7）：1803-1808.

［35］王念捷，程奇.水稻4CL基因啟動(dòng)子引導(dǎo)的GUS在紫外誘導(dǎo)下的組織特異性表達(dá)[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，1996，29（1）：73-77.

［36］ INABA T，NAGANO Y，REID J B，et al.DE1，a 12-base pair cis-regulatory element sufficient to confer dark-inducible and light down-regulated expression to a minimal promoter in pea[J].Journal of Biological Chemistry，2000，275（26）：19723-19727.

［37］WELSCH R，MEDINAJ，GIULIANOG，et al.Structural and functional characterization of the phytoene synthase promoter from Arabidopsis thaliana[J].Planta，2003，216（3）：523-534.

［38］黃海群，林擁軍.水稻rbcS基因啟動(dòng)子的克隆及結(jié)構(gòu)功能分析[J].農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2007，15（3）：451-458.

［39］LI J，LIANG D，LI M，et al.Light and abiotic stresses regulate the expression of GDP-L-galactosephosphorylase and levels of ascorbicacid in two kiwifruit genotypes via light-responsive and stress-inducible cis-elements in their promoters [J].Planta，2013，238（3）：535-547.

［40］瞿韻，張寧，常璟，等.馬鈴薯光誘導(dǎo)型莖葉特異表達(dá)啟動(dòng)子ST-LS1的克隆與功能分析 [J].農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2013，21（7）：828-837.

［41］ COCA M A，ALMOGUERA C，THOMAS T L，et al.Differential regulation of small heat-shock genes in plants:analysis of a water-stress-inducible and developmentally activated sunflower promoter[J].Plant Molecular Biology，1996，31（4）：863-876.

［42］ DUNN M A，WHITE A J，VURAL S，et al.Identification of promoter elements in a low-temperature-responsive gene（blt4.9）from barley （Hordeum vulgare L.）[J].Plant Molecular Biology，1998，38（4）：551-564.

［43］ROJAS A，ALMOGUERA C，JORDANO J.Transcriptional activation of a heat shock gene promoter in sunflower embryos：synergism between ABI3 and heat shock factors[J].The Plant Journal，1999，20（5）：601-610.

［44］伊淑瑩，孫愛清，趙春梅，等.番茄多脅迫誘導(dǎo)型LeMTshsp啟動(dòng)子的分子克隆及其功能分析 [J].植物分類與資源學(xué)報(bào)，2007，29（2）：223-230.

［45］ NAVARRE C，SALLETS A，GAUTHY E，et al.Isolation of heat shock-induced Nicotiana tabacum，transcription promoters and their potential as a tool for plant research and biotechnology[J].Transgenic Research，2011，20（4）：799-810.

［46］BROWN A P C，DUNN MA，GODDARD N J，et al.Identification of a novel low-temperature-response element in the promoter of the barley（Hordeum vulgare L）gene blt101.1[J].Planta，2001，213（5）：770-780.

［47］DOLFERUS R，JACOBS M，PEACOCK W J，et al.Differential interactions of promoter stress responses of the Arabidopsis elements in Adh gene[J].Plant Physiol，1994，105（4）：1075-1087.

［48］ KASUGA M，MIURA S，SHINOZAKI K，et al.A combination of the Arabidopsis DREB1A gene and stress-inducible rD29A promoter improved drought and low-temperature stress tolerance in tobacco by gene transfer[J].Plant Cell Physiol，2004，45（3）：346-350.

［49］杜娟，朱禎，李晚忱.植物逆境誘導(dǎo)啟動(dòng)子mwcs120的克隆及表達(dá)特性研究[J].作物學(xué)報(bào)，2005，31（10）：1328-1332.

［50］ TAKUMI S，KOIKE A，NAKATA M，et al.Cold-specific and light-stimulated expression of a wheat（Triticum aestivum L.）Cor gene Wcor15 encodinga chloroplast-targeted protein[J].Journal of Experimental Botany，2003，54：2265-2274.

［51］KOVALCHUK N，JIA W，EINI O，et al.Optimization of TaDREB3 gene expression in transgenic barley using cold-inducible promoters[J].Plant Biotechnol J，2013，11（6）：659-670.

［52］ LI M，WANG X，CAO Y，et al.Strength comparison between cold-inducible promoters of Arabidopsis cor15a and cor15b genes in potato and tobacco [J].Plant Physiology&Biochemistry，2013，71（2）：77-86.

［53］ YAMAGUCHI-SHINOZAKI K，SHINOZAKI K.Characterization of the expression of a desiccation-responsive rd29 gene of Arabidopsis thaliana and analysis of its promoter in transgenic plants[J].Molecular and General Genetics，1993，236（2/3）：331-340.

［54］BIHMIDINE S，LIN J，STONE J M，et al.Activity of the Arabidopsis，RD29A and RD29B promoter elements in soybean under water stress[J].Planta，2013，237（1）：55-64.

［55］楊梅，熊立仲.水稻干旱誘導(dǎo)型啟動(dòng)子Oshox24P的分離與鑒定[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2011，30（5）：525-531.

［56］ZAHUR M，MAQBOOL A，IRFAN M，et al.Functional analysis of cotton small heat shock protein promoter region in response to abiotic stresses in tobacco using Agrobacterium-mediated transient assay[J].Molecular BiologyReports，2009，36（7）：1915-1921.

［57］ BEHNAM B，IUCHI S，F(xiàn)UJITA M，et al.Characterization of the promoter region of an Arabidopsis gene for 9-cis-epoxycarotenoid dioxygenaseinvolved in dehydration-inducible transcription[J].DNAResearch，2013，20（4）：315-324.

［58］李麗麗，李甜甜，高利芬，等.二穗短柄草逆境誘導(dǎo)型啟動(dòng)子pBdDREB-47的克隆及功能驗(yàn)證 [J].分子植物育種，2017，15（1）：58-64.

［59］ AYADI M，MIEULET D，F(xiàn)ABRE D，et al.Functional analysis of the durum wheat gene TdPIP2；1 and its promoter region in response toabiotic stress in rice[J].Plant Physiology&Biochemistry，2014，79（3）：98-108.

［60］INJUNG KIM，JEONGYEO LEE，JEONGA HAN，et al.Citrus Lea promoter confers fruit-preferential and stressinducible gene expression in Arabidopsis[J].Canadian Journal of Plant Science，2013，91（3）：459-466.

［61］劉習(xí)文，暢文軍，朱家紅，等.海馬齒SpSCL1基因啟動(dòng)子克隆及序列分析[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，40（4）：124-127.

［62］LEE SC，KIMSH，KIMS R.Drought inducible OsDhn1，promoter is activated by OsDREB1A and OsDREB1D[J].Journal of Plant Biology，2013，56（2）：115-121.

［63］陰霞，陳雯，王磊，等.激素和非生物脅迫對(duì)月季RhPIP1；1啟動(dòng)子活性的調(diào)節(jié)作用[J].園藝學(xué)報(bào)，2014，41（1）：107-117.

［64］FANG H，LIU X，THORN G，et al.Expression analysis of histone acetyltransferases in rice under drought stress[J].Biochemical&Biophysical Research Communications，2014，443（2）：400-405.

［65］XU D，MC ELROY D，THORNBURG R W，et al.Systemic induction of a potato pin2 promoter by wounding，methyl jasmonate，and abscisicacid in transgenic rice plants[J].Plant Molecular Biology，1993，22（4）：573-588.

［66］RAI M，HE C K，WU R.Comparative functional analysis of three abiotic stress-inducible promoters in transgenic rice[J].Transgenic Research，2009，18（5）：787-799.

［67］NARUSAKA Y，NAKASHIMA K，SHINWARI Z K，et al.Interaction betweentwocis-acting elements，ABRE and DRE，in ABA-dependent expression of Arabidopsis rd29A gene in response to dehydration and high-salinity stresses [J].Plant Journal，2003，34：137-148.

［68］XU D Q，LI J G，GANGAPPA SREERAMAIAH N，et al.Convergence of light and ABA signaling on the ABI5 promoter[J].PLoS Genetics，2014，10（2）：e1004197.

［69］ YANG Y Z，TAN B C.A distal ABA responsive element in At NCED3 promoter is required for positive feedback regulation of ABA bios-ynthesis in Arabidopsis[J].PLoS Genetics，2014，9（1）：e87283.

［70］XU X B，GUO S，CHEN K，et al.A 796 bp PsPR10 gene promoter fragment increased root-specific expression of the GUS reporter gene under the abiotic stresses and signal molecules in tobacco[J].BiotechnologyLetters，2010，32（10）：1533-1539.

［71］YOON I S，PARK D H，MORI H，et al.Characterization of an auxin-inducible 1-aminocyclopropane-1-carboxylate synthase gene，VR-ACS6，of mungbean（Vignaradiata L.Wilczek）and hormonal interactions on the promoter activityin transgenic tobacco[J].Plant Cell Physiol，1999，40（4）：431-438.

［72］孫濤，柴團(tuán)耀，張玉秀.擬南芥GH3基因家族啟動(dòng)子序列分析[J].中國(guó)科學(xué)院大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，27（6）：847-852.

［73］ WANG X，REPLOGLE A，DAVIS E L，et al.The tobacco Cel7 gene promoter is auxin-responsive and locally induced in nematode feedingsite of heterologous plan[J].Molecular Plant Pathology，2007，8（4）：423-436.

［74］余建，劉長(zhǎng)英，趙愛春，等.桑樹1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸氧化酶基因（MnACO）啟動(dòng)子功能分析[J].作物學(xué)報(bào)，2017，43（6）：839-848.

［75］余麗，楊世湖，晉玉寬，等.Pib啟動(dòng)子中茉莉酸和乙烯響應(yīng)元件的轉(zhuǎn)基因分析[J].遺傳，2010，32（1）：73-80.

［76］葉凌鳳，劉琳，張志高，等.玉米ZmPGP1基因啟動(dòng)子的克隆及結(jié)構(gòu)功能分析[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，22（3）：1-5.

［77］李嬋娟，楊世湖，武亮，等.pib基因啟動(dòng)子及其誘導(dǎo)啟動(dòng)性初探[J].遺傳，2006，28（6）：689-694.

［78］ LI Q，YIN H，LI D，et al.Isolation and characterization of CMO gene promoter from halophyte Suaeda liaotungensis K.[J].Journal of Genetics&Genomics，2007，34（4）：355-361.

［79］ BHUIYAN N H，HAMADA A，YAMADA N，et al.Regulation of betaine synthesis by precursor supply and choline monooxygenase expression in Amaranthus tricolor[J].Journal of Experimental Botany，2007，58（15/16）：4203-4212.

［80］GUTHALR，REDDYA R.Rice DREB1B promoter shows distinct stress-specific responses，and the overexpression of cDNA in tobaccoconfers improved abiotic and biotic stress tolerance[J].Plant Molecular Biology，2008，68（6）：533-555.

［81］ WOODROW P，PONTECORVO G，CIARMIELLO L F.Ttd1a，promoter is involved in DNA-protein binding by salt and light stresses[J].Molecular BiologyReports，2011，38（6）：3787-3794.

［82］張新宇，趙蘭杰，李艷軍，等.鹽脅迫對(duì)擬南芥AtPUB18基因的誘導(dǎo)表達(dá)及其啟動(dòng)子分析 [J].西北植物學(xué)報(bào)，2014，34（1）：54-59.

［83］ SUN Q，GAO F，ZHAO L，et al.Identification of a new 130 bp cis-acting element in the TsVP1 promoter involved in the salt stress response fromThellungiella halophila[J].Bmc Plant Biology，2010，10（1）：90.

［84］劉生，蘇晶，夏銅梅，等.兩個(gè)大豆低氮響應(yīng)啟動(dòng)子的克隆及初步功能驗(yàn)證[C]//全國(guó)大豆科研生產(chǎn)研討會(huì).大慶：中國(guó)作物學(xué)會(huì)大豆專業(yè)委員會(huì)，2012.

［85］孔佑賓，李喜煥，張彩英.大豆紫色酸性磷酸酶基因GmPAP4啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)與活性分析 [J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，50（3）：582-590.

［86］鐘活權(quán).Cu2+脅迫下擬南芥AtRD22的表達(dá)及作用分析[D].深圳：深圳大學(xué)，2017.

［87］孫芳芳，宋洪元.植物誘導(dǎo)型啟動(dòng)子研究進(jìn)展 [J].南方園藝，2014，25（2）：51-56.