兩套檢測(cè)系統(tǒng)糖化血紅蛋白檢測(cè)結(jié)果的一致性分析

羅映杰+林鳳+劉艷婷+肖光軍

摘 要：目的 探討兩套檢測(cè)系統(tǒng)糖化血紅蛋白（HbA1c）檢測(cè)結(jié)果的一致性。方法 按照EP9-A2文件的要求，以PRIMUS Ultra2 HbA1c分析儀為參比系統(tǒng)，PRIMUS PDQ-Plus HbA1c分析儀為待評(píng)系統(tǒng)，使用新鮮抗凝全血對(duì)兩套檢測(cè)系統(tǒng)的結(jié)果進(jìn)行比對(duì)分析，并評(píng)估其在不同醫(yī)學(xué)決定水平（XC）處的相對(duì)偏倚（SE%）。結(jié)果 兩套檢測(cè)系統(tǒng)HbA1c檢測(cè)結(jié)果的回歸方程為Y=0.9927X+0.1208，相關(guān)系數(shù)r2=0.9944，不同XC處的SE%均小于1/2TEa，能被臨床所接受。結(jié)論 PRIMUS PDQ-Plus與PRIMUS Ultra2 HbA1c分析儀檢測(cè)結(jié)果具有良好的一致性，可使用相同的參考范圍，能滿(mǎn)足臨床對(duì)糖尿病患者的診斷、治療和監(jiān)測(cè)需求。

關(guān)鍵詞：糖化血紅蛋白分析儀；比對(duì)分析；偏倚評(píng)估；一致性

中圖分類(lèi)號(hào)：R446.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.01.026

文章編號(hào)：1006-1959（2018）01-0074-03

Consistency Analysis of the Results of Glycosylated Hemoglobin Detection in Two Detection Systems

LUO Ying-jie1，LIN Feng2，LIU Yan-ting1，XIAO Guang-jun1

（1.Department of Laboratory，Suining Central Hospital，Suining 629000，Sichuan，China；

2.Major in Medical Laboratory Technology，Ya'an Vocational and Technical College，Ya'an 625000，Sichuan，China）

Abstract：Objective To investigate the two detection system of glycosylated hemoglobin（HbA1c）the consistency of test results.Methods According to the requirements of the EP9-A2 documents，the PRIMUS Ultra2 HbA1c analyzer as the reference system，the PRIMUS PDQ-Plus HbA1c analyzer for evaluation system，the use of fresh anticoagulant blood were compared and analyzed the results of two detection system，and evaluate the medical decision level in different relative bias（XC）at（SE%）.Results Two the regression equation of HbA1c detection system was Y=0.9927X+0.1208， correlation coefficient r2=0.9944，and SE% at different XC were less than 1/2TEa，which could be accepted by clinical practice.Conclusion The results of PRIMUS PDQ-Plus and PRIMUS Ultra2 HbA1c analyzer have good consistency and can be used in the same reference range.It can meet the needs of clinical diagnosis，treatment and monitoring of diabetic patients.

Key words：Glycosylated hemoglobin analyzer；Comparison analysis；Bias assessment；Consistency

糖化血紅蛋白（HbA1c）是紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白（Hb）與糖類(lèi)（主要是葡萄糖）經(jīng)非酶促反應(yīng)結(jié)合而形成的化合物，可以反映患者測(cè)定前120 d的平均血糖水平，與血糖等傳統(tǒng)的糖尿病診斷指標(biāo)比較，其具有個(gè)體內(nèi)生物學(xué)變異?。?2%）、不易受血糖波動(dòng)的影響、無(wú)需空腹或特定時(shí)間取血、分析前不穩(wěn)定性小等特點(diǎn)[1-2]，因此HbA1c被作為評(píng)估長(zhǎng)期血糖控制狀況的金標(biāo)準(zhǔn)和是否需要調(diào)整治療方案的重要依據(jù)[3]，2010年美國(guó)糖尿病協(xié)會(huì)（ADA）并將HbA1c≥6.5%作為糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)之一，WHO 也于2011年建議在條件具備的國(guó)家和地區(qū)采用這一切點(diǎn)診斷糖尿病[4]。目前糖化血紅蛋白檢測(cè)儀器生產(chǎn)廠(chǎng)家多，其測(cè)定原理各不相同，檢測(cè)標(biāo)本時(shí)所測(cè)組分不同，其受干擾因素影響程度不同，導(dǎo)致不同檢測(cè)系統(tǒng)間檢測(cè)結(jié)果的一致性較差；另一方面，HbA1c在臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中存在儀器操作使用不規(guī)范、缺乏有效量值溯源體系、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品管理和使用不規(guī)范、對(duì)方法的干擾因素認(rèn)識(shí)不足等問(wèn)題[5]，進(jìn)一步加大了檢測(cè)系統(tǒng)間檢測(cè)結(jié)果的差異。我科室現(xiàn)有兩套檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行HbA1c檢測(cè)，僅PRIMUS Ultra 2 HbA1c檢測(cè)系統(tǒng)參加了衛(wèi)生部室間質(zhì)評(píng)活動(dòng)，而PRIMUS PDQ-Plus檢測(cè)系統(tǒng)僅進(jìn)行了室內(nèi)質(zhì)量控制，按照中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì)（CNAS）-CL02《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》[6]的要求，實(shí)驗(yàn)室需定期進(jìn)行比對(duì)，以觀(guān)察系統(tǒng)間檢測(cè)結(jié)果的一致性。本文參考美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)的EP9-A2文件[7]使用患者新鮮血液標(biāo)本對(duì)我科室兩套糖化血紅蛋白檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行了方法比對(duì)及偏倚評(píng)估，并對(duì)其在不同醫(yī)學(xué)決定水平處（Xc）的相對(duì)偏倚（SE%）進(jìn)行了臨床可接受性評(píng)價(jià)，以確保實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的可靠性和一致性。endprint

1材料與方法

1.1儀器與試劑 PRIMUS Ultra 2 HbA1c分析儀及配套試劑：清洗液（批號(hào)：5788）；緩沖液2A（批號(hào)：6005）；緩沖液B（批號(hào)：5878）；稀釋緩沖液（批號(hào)：5889）、層析柱（批號(hào)：0282-5907）及其配套校準(zhǔn)品； PRIMUS PDQ-Plus HbA1c分析儀及配套試劑：清洗液（批號(hào)：6008）、洗脫緩沖液1（批號(hào)：6714）、洗脫緩沖液2（批號(hào)：6657）、稀釋液（批號(hào)：6690）、層析柱（批號(hào)：0282-5907）及其配套校準(zhǔn)品。高、低雙水平凍干粉質(zhì)控品由美國(guó)伯樂(lè)生產(chǎn)，批號(hào)分別為33921和33922。

1.2標(biāo)本來(lái)源 每天使用EDTA-K2抗凝真空采血管采集8例住院患者的新鮮血液2 ml，剔除貧血、溶血、黃疸、脂血等異常標(biāo)本，連續(xù)8 d，共64例標(biāo)本，其中男38例、女26例；標(biāo)本中HbA1c的濃度范圍分布在4%～12%，均在兩套檢測(cè)系統(tǒng)的線(xiàn)性范圍內(nèi)，且至少50%標(biāo)本的測(cè)定結(jié)果處于實(shí)驗(yàn)室的參考區(qū)間之外[7]。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1儀器校準(zhǔn)和質(zhì)控 試驗(yàn)前，按照儀器使用說(shuō)明書(shū)及儀器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程分別使用配套校準(zhǔn)品對(duì)兩套檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn)。校準(zhǔn)成功后，在每天標(biāo)本檢測(cè)前、后均須進(jìn)行兩水平的質(zhì)控分析。檢測(cè)前質(zhì)控均在控后方可進(jìn)行標(biāo)本檢測(cè)；檢測(cè)后質(zhì)控均在控則說(shuō)明檢測(cè)結(jié)果可靠，數(shù)據(jù)可采用[8]。

1.3.2標(biāo)本測(cè)定 以連續(xù)5 a衛(wèi)生部HbA1c室間質(zhì)評(píng)結(jié)果均優(yōu)秀的PRIMUS Ultra-2 HbA1c分析儀為參比系統(tǒng)（X），PRIMUS PDQ-Plus HbA1c分析儀為待評(píng)系統(tǒng)（Y），將每天采集的8例新鮮抗凝全血標(biāo)本隨機(jī)編號(hào)（1～8）后，在兩套檢測(cè)系統(tǒng)上分別進(jìn)行雙份測(cè)定，第一次測(cè)定為順序（1～8），第二次測(cè)定標(biāo)本為反向順序（8～1）[7]。

1.3.3 離群值檢驗(yàn) 根據(jù)EP9-A2文件進(jìn)行方法內(nèi)及方法間的離群值檢驗(yàn)[7]。

1.3.4 檢測(cè)結(jié)果的線(xiàn)性回歸及相關(guān)性分析 以PRIMUS Ultra-2 HbA1c分析儀雙份測(cè)定的均值為X軸，分別以PRIMUS PDQ-Plus HbA1c分析儀雙份測(cè)定的均值和兩檢測(cè)系統(tǒng)每份標(biāo)本雙份測(cè)定的均值差為Y軸，繪制散點(diǎn)圖和偏倚圖，從而得到線(xiàn)性回歸方程（Y=bX+a）及其相關(guān)系數(shù)（r）。若r2≥0.95，表示X值取值范圍合適，則可用線(xiàn)性回歸來(lái)估計(jì)斜率和截距；若r2≤0.95，則必須分析更多的標(biāo)本以擴(kuò)大數(shù)據(jù)濃度分布范圍，然后再重新分析全部數(shù)據(jù)[2，7]。

1.3.5 臨床可接受性判斷 根據(jù)線(xiàn)性回歸方程計(jì)算不同Xc[2]的SE%， SE%=（Yc-Xc）×100/ Xc={（b-1） × Xc+a}×100/ Xc，然后以國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)（2017版）中HbA1c正確度驗(yàn)證規(guī)定的總允許誤差（TEa）的1/2為臨床可接受水平，即SE%≤1/2TEa屬臨床可接受水平，表示兩檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果具有一致性，檢測(cè)報(bào)告可使用相同的參考范圍。HbA1c正確度驗(yàn)證的TEa為6%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)均采用Excel 2003軟件進(jìn)行處理，并進(jìn)行兩套檢測(cè)系統(tǒng)間的線(xiàn)性回歸相關(guān)性及偏倚分析 。

2結(jié)果

2.1離群值檢驗(yàn) 經(jīng)方法內(nèi)離群值檢驗(yàn)及方法間離群值檢驗(yàn)，所有標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果均未發(fā)現(xiàn)離群值。

2.2兩套檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果的線(xiàn)性回歸方程及偏倚圖 以PRIMUS-Ultra 2全自動(dòng)糖化血紅蛋白分析儀為參比系統(tǒng)（X），PRIMUS-PDQ Plus 糖化血紅蛋白分析儀為待評(píng)系統(tǒng)（Y），對(duì)同一標(biāo)本分別在兩套檢測(cè)系統(tǒng)上兩次檢測(cè)結(jié)果的均值進(jìn)行線(xiàn)性回歸分析，見(jiàn)圖1。其相關(guān)系數(shù)r2為0.9944； PRIMUS-PDQ Plus儀各標(biāo)本HbA1c檢測(cè)結(jié)果均值的偏倚，見(jiàn)圖2。

2.3臨床可接受性判斷 PRIMUS PDQ-Plus HbA1c分析儀檢測(cè)結(jié)果在不同醫(yī)學(xué)決定水平處的相對(duì)偏倚（SE%），見(jiàn)表1。

3討論

雖然我國(guó)HbA1c檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化工作起步較晚，通過(guò)各方努力已取得明顯的成績(jī)，如上海市臨檢中心、衛(wèi)生部臨檢中心及北京市臨檢中心均先后建立了國(guó)際臨床化學(xué)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)聯(lián)合會(huì)[9]（IFCC）HbA1c檢測(cè)的一級(jí)參考方法；衛(wèi)生部臨檢中心成功研制出國(guó)家一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)[9]，并開(kāi)展了正確度驗(yàn)證計(jì)劃及室間質(zhì)量評(píng)價(jià)活動(dòng)；多家醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室通過(guò)了NGSP一級(jí)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證，其規(guī)范化操作流程和高質(zhì)量檢測(cè)能力得到了國(guó)際權(quán)威組織的認(rèn)可。但因我國(guó)地域遼闊，地理環(huán)境和各級(jí)實(shí)驗(yàn)室的條件差異較大、HbA1c檢測(cè)試劑種類(lèi)多、實(shí)驗(yàn)室操作不規(guī)范等，導(dǎo)致室間質(zhì)評(píng)相同儀器組內(nèi)及不同儀器間的變異系數(shù)（CV%）仍然較大，無(wú)法達(dá)到HbA1c檢測(cè)結(jié)果的互認(rèn)，故在2型糖尿病防治指南（2013年版）[4]中建議：“暫不推薦在我國(guó)將作為糖尿病切點(diǎn)，但對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)方法，并有嚴(yán)格質(zhì)量控制，正常參考值在4.0%～6.0%的醫(yī)院，HbA1c≥6.5%可作為診斷糖尿病的參考”。因此，提高HbA1c檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可比性以滿(mǎn)足臨床需求已成為關(guān)注的焦點(diǎn)，各級(jí)實(shí)驗(yàn)室必須對(duì)其檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行一致性評(píng)價(jià)。

本實(shí)驗(yàn)中兩套檢測(cè)系統(tǒng)均是由美國(guó)PRIMUS公司生產(chǎn)，采用親和高效液相層析法進(jìn)行HbA1c檢測(cè)，通過(guò)糖基化的Hb均可與硼酸鹽結(jié)合成可逆性復(fù)合物的原理將糖基化血紅蛋白分離，檢測(cè)結(jié)果是標(biāo)本中總糖化血紅蛋白的含量，再通過(guò)公式換算得到的HbA1c的量，其配套校準(zhǔn)品可溯源至美國(guó)糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃（NGSP）的糖尿病控制及并發(fā)癥試驗(yàn)（DCCT）。使用配套校準(zhǔn)品分別對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)校準(zhǔn)后，按照EP9-A2文件的要求，以Ultra2 HbA1c分析儀為參比系統(tǒng)，PDQ-Plus HbA1c分析儀為待評(píng)系統(tǒng)，使用新鮮抗凝全血對(duì)兩檢測(cè)系統(tǒng)的結(jié)果進(jìn)行比對(duì)分析，研究結(jié)果顯示，其線(xiàn)性回歸方程為Y=0.9927X+0.1208，相關(guān)系數(shù)r2=0.9944；從圖2可知PDQ-Plus HbA1c分析儀檢測(cè)結(jié)果的偏倚隨Ultra2 HbA1c分析儀均值呈隨機(jī)分布，但均≤0.3%，但是有傾斜的趨勢(shì)；在4.8%、6.5%、7.0%、11.1%、16%5個(gè)XC處的SE%均小于國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)（2017版）中HbA1c正確度驗(yàn)證所規(guī)定TEa的1/2，從而說(shuō)明兩檢測(cè)系統(tǒng)的檢測(cè)結(jié)果具有一致性，能被臨床所接受，檢測(cè)報(bào)告可使用相同的參考范圍。endprint

綜上所述，PRIMUS PDQ-Plus與PRIMUS Ultra2 HbA1c分析儀檢測(cè)結(jié)果具有一致性，檢測(cè)報(bào)告可使用相同的參考范圍，PRIMUS PDQ-Plus HbA1c分析儀檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，能滿(mǎn)足臨床對(duì)糖尿病患者的診斷及療效評(píng)估。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立科學(xué)、完善的質(zhì)量管理體系，按照《糖化血紅蛋白實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指南》[1]、《糖化血紅蛋白檢測(cè)（WS/T461-2015）》[8]等文件進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化的操作，加強(qiáng)相關(guān)人員的培訓(xùn)和與臨床的溝通，定期對(duì)醫(yī)院內(nèi)不同檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行方法比對(duì)和一致性分析，積極參加室間質(zhì)評(píng)活動(dòng)及正確度驗(yàn)證計(jì)劃以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

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收稿日期：2017-5-7；修回日期：2017-6-8

編輯/李樺e(cuò)ndprint