HPLC法快速篩查抗痛風(fēng)類中成藥非法添加的6種化學(xué)藥品

龍玉瓊 湯 珺

（1 吉安市食品藥品檢驗檢測中心化學(xué)室，江西 吉安 343000；2 吉安市食品藥品檢驗檢測中心生測室，江西 吉安 343000）

痛風(fēng) (gout)是嘌呤類物質(zhì)代謝紊亂，其生化標(biāo)志是高尿酸血癥，已成為威脅人類健康的嚴(yán)重代謝性疾病。西醫(yī)治療痛風(fēng)[1-2]需要長期服藥，其藥物不良反應(yīng)大。中醫(yī)治療痛風(fēng)具有標(biāo)本兼治，且不良反應(yīng)小的優(yōu)勢[3]，故很多患者使用中成藥治療痛風(fēng)。但中成藥見效緩慢，造假者為了達到“神奇療效”擅自添加化學(xué)藥后見效快，患者信以為真，具有很強的欺騙性[4-6]。查閱相關(guān)報道及文獻[7-8]抗痛風(fēng)類中成藥中最常非法添加的化學(xué)藥為非甾體抗炎藥和糖皮質(zhì)激素。這兩類雖見效快，但不良反應(yīng)嚴(yán)重。本方法簡單、有效，可快速篩查出抗痛風(fēng)類中成藥中是否添加4種糖皮質(zhì)激素氫化可的松、地塞米松、醋酸潑尼松、醋酸地塞米松和2種非甾體抗炎藥吲哚美辛、布洛芬。且各市地級藥檢所實驗條件有限，選擇檢驗中常用的高效液相色譜法，能使該檢測方法在更多的藥檢所及檢驗單位中推廣使用。為藥品檢驗機構(gòu)和藥品監(jiān)管部門提供技術(shù)支持。

1 儀器與試藥

Agilent1260InfinityⅡ高效液相色譜儀（安捷倫公司）；BP211D電子分析天平（賽多利斯公司）；AR2140電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；STARTER2100PH計（奧豪斯儀器上海有限公司）；KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司） 色譜柱：AnglientZORBAXSB-C18，5 μm，4.6×150 mm；DAD檢測器；吲哚美辛對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號100258-200904，純度99.9%），布洛芬對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號100179-201406，純度99.5%），氫化可的松，地塞米松對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號100129-201506，純度99.8%）；醋酸潑尼松對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號100012-201407，純度99.5%）；醋酸地塞米松對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號100122-201206，純度100.0%），乙腈為色譜純；水為超純水；醋酸銨為分析純；抗痛風(fēng)類中成藥樣品3批，依次為痛風(fēng)舒片、痛風(fēng)定膠囊、二十五味驢血丸，均由本地藥店購買。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：AnglientZORBAXSB-C18，5 μm，4.6×150 mm；柱溫:35℃；流速：1.0 mL/min；進樣量：10 μL；流動相：乙腈-0.02 mol/L醋酸銨溶液（磷酸調(diào)PH至3.6） （45∶55）；檢測器：二極管陣列檢測器，檢測波長：263 nm，以及190~400 nm紫外掃描光譜。此色譜條件下，6種待測化學(xué)物質(zhì)的對照品與相鄰峰分離度大于1.5，拖尾因子符合要求，典型的色譜圖見圖A。

2.2 供試品溶液的制備 取樣品，研細，稱取0.5 g，置10 mL量瓶中，加入甲醇5 mL，超聲處理15 min，放冷，加甲醇至刻度，振搖使混勻放置取上清液濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 混合對照品溶液的制備 取各對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL中含氫化可的松、地塞米松、醋酸波尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛約0.17 mg，布洛芬約1.70 mg混合對照品溶液。

2.4 陰性對照溶液的制備 取處方中不含氫化可的松、地塞米松、醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、布洛芬6種化學(xué)成分的抗痛風(fēng)類中成藥，按2.2項下的方法制備，即得。

2.5 陽性對照溶液的制備 精密稱取氫化可的松、地塞米松、醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、布洛芬6種對照品，加入處方中不含上述6種化學(xué)成分的抗痛風(fēng)類中成藥中，混勻，按2.2的方法制備成每1 mL中含氫化可的松、地塞米松、醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛對照品約0.12 mg，含布洛芬2.38 mg的溶液，即得。

2.6 方法專屬性試驗 通過對混合對照品溶液、陰性對照溶液、陽性對照溶液按2.1項下色譜條件分別進行檢測，結(jié)果表明混合對照品分離度好，陰性對照溶液無干擾，陽性對照溶液能達到分離 (見圖1、2、3)。

圖1 混合對照品溶液色譜圖

圖2 陽性對照品溶液色譜圖

圖3 陰性對照品溶液色譜圖

2.7 線性關(guān)系的考察 分別精密稱取氫化可的松、地塞米松、醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、布洛芬6種對照品，加甲醇稀釋成一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，以對照品濃度為橫坐標(biāo)X，各自對應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)Y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，6種化學(xué)成分的線性回歸方程、r值及線性范圍見表1。

表1 6種化學(xué)成分的線性回歸方程、r值及線性范圍

2.8 精密度試驗 精密吸取2.3混合對照液，按2.1項下色譜條件和方法，注入液相色譜儀，連續(xù)進樣6次，氫化可的松、地塞米松、醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、布洛芬的RSD分別為0.05%，0.04%，0.04%，0.03%，0.04%，0.07%。

2.9 回收率試驗 采用加樣回收試驗，精密稱取同一批號陰性樣品9份，分別精密加入一定量的對照品，照2.2項下方法制備成供試品溶液，按上述方法進行測定，氫化可的松、地塞米松、醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、布洛芬平均回收率分別98.80%，99.48%，97.20%，97.92%，100.35%，102.37%，其RSD分別為1.85%，2.27%，1.80%，1.80%，1.85%，1.82%。

2.10 穩(wěn)定性試驗 精密吸取2.3項下混合對照液，按2.1項下色譜條件下，每2 h測定1次，連續(xù)12次，結(jié)果表明6種化學(xué)成分的峰面積在24h內(nèi)無明顯變化，氫化可的松、地塞米松、醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、布洛芬的RSD分別為0.34%，0.38%，0.40%，0.37%，0.33%，0.29%。

2.11 樣品的測定 取市售3批抗痛風(fēng)類中成藥制劑，分別按2.2項下方法提取各樣品供試品溶液，按2.1項下色譜條件下測定，結(jié)果血3批供試品色譜圖中均未呈現(xiàn)與對照品保留時間一致的色譜峰，即該3批樣品均未非法添加上述6種化學(xué)成分。

3 討論

3.1 高效液相色譜法檢測波長的選擇 參照中國藥典2015年版二部及有關(guān)文獻報道[8-10]，本試驗中采用DAD檢測器，同時選取254和276 nm及263 nm 3個參比波長進行比較，通過光譜圖對比，布洛芬峰高偏低，其濃度為其他成分10倍時，與其他成分峰高相當(dāng)，而其他5種成分在3個參比波長處均有較高峰高。故選用布洛芬的最大波長263 nm為本方法的檢定波長。

3.2 提取方法的選擇 氫化可的松、地塞米松、醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、布洛芬六種成分均在甲醇中溶解，故本試驗采用甲醇超聲溶解的提取方法，超聲時間超過15 min后，六種成分的含量無明顯差異，故確定超聲時間為15 min。

3.3 流動相的選擇 參照中國藥典2015年版二部及有關(guān)文獻報道[8-10]，實驗中比較了3種流動相：①水-乙腈（50:50）峰型不理想，拖尾嚴(yán)重；②乙腈-0.02 mol/L醋酸銨溶液（磷酸調(diào)PH至3.6） （50:50）峰型好，但分離度略差；③乙腈-0.02 mol/L醋酸銨溶液（磷酸調(diào)PH至3.6） （45:55）峰型好，且分離度符合要求，25 min內(nèi)6種成分全部出峰，故選擇乙腈-0.02 mol/L醋酸銨溶液（磷酸調(diào)PH至3.6） （45:55） 為流動相。

3.4 本方法的實用性 本方法可同時快速篩查抗痛風(fēng)類中成藥中氫化可的松、地塞米松、醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、布洛芬6種較為常見的抗痛風(fēng)類化學(xué)成分，目前高效液相色譜儀在各地市、縣、區(qū)食品藥品檢驗機構(gòu)已經(jīng)普及使用，該方法簡便快捷，可以滿足基層藥檢所及檢驗單位對此類藥物的快檢篩查。

3.5 本方法的適用范圍 本研究主要針對抗痛風(fēng)類中成藥中非法添加非甾體抗炎藥和糖皮質(zhì)激素兩類6種化學(xué)成分，但該方法不僅限于此類抗痛風(fēng)類中成藥，同時止痛類、抗炎類中成藥和保健品中非法添加上述6種化學(xué)成分，亦可采用本方法進行檢測分析。

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