柴胡疏肝散對抑郁癥大鼠行為學(xué)及曠場實驗的影響※

吳曉玲 張貴鋒*

（1 肇慶醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)?；A(chǔ)醫(yī)學(xué)部，廣東 肇慶 526020；2 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510642；3 肇慶醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校中醫(yī)系，廣東 肇慶 526020）

抑郁癥（depression）是基因與環(huán)境交互影響的異質(zhì)性重大精神疾病，主要表現(xiàn)為心境低落、興趣減少、思維緩慢、運動遲滯、記憶力減退及睡眠障礙等，嚴重者可出現(xiàn)自殺傾向，具有高患病率、高復(fù)發(fā)率、高致殘率、低治愈率等特點，嚴重威脅人們的生命健康。統(tǒng)計研究顯示，近年來我國的抑郁癥發(fā)病率有增高趨勢，給社會造成了極大危害[1-2]。有研究認為腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的缺乏是抑郁癥的生物學(xué)基礎(chǔ)[3]。抑郁癥屬于中醫(yī)“郁證”等疾病范疇，多由情志不舒、肝氣郁結(jié)引起，臨床治療時多采用疏肝理氣法。研究表明，疏肝解郁的經(jīng)典方劑柴胡疏肝散（《景岳全書》）對抑郁癥臨床癥狀有顯著改善作用，但其具體機理尚未明確[4]。為闡明柴胡疏肝散治療抑郁癥的療效機制，本研究選取清潔級健康成年雄性Wistar大鼠建立抑郁癥大鼠模型，觀察柴胡疏肝散對抑郁癥大鼠行為學(xué)及曠場實驗的影響。

1 材料與方法

1.1 動物及分組 清潔級健康成年雄性Wistar大鼠32只，2～3月齡，體質(zhì)量180～210 g，平均體質(zhì)量 (197.36±8.69)g，由南方醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。將全部大鼠先進行常規(guī)適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d，飼養(yǎng)條件為：室溫18～28℃，濕度60%～80%。根據(jù)隨機數(shù)字表法將實驗大鼠隨機分為正常對照組8只、造模組24只。正常對照組大鼠常規(guī)飼養(yǎng)，造模組大鼠采用慢性不可預(yù)知性應(yīng)激對進行造模。

1.2 造模方法 慢性不可預(yù)知性應(yīng)激。第8天開始，造模大鼠每籠飼養(yǎng)1只，共接受21 d隨機應(yīng)激，含電擊大鼠足底 (電流強度10 mA，每隔1 min刺激1次，每次持續(xù)10 s，共30次)、搖晃 (1次/s，15 min)、夾尾1 min、冰水游泳（4℃，5 min)、熱應(yīng)激 (45℃，5min)、禁水24 h、禁食24 h、晝夜顛倒，每日隨機給予1種刺激，使大鼠不能預(yù)料刺激的發(fā)生，避免產(chǎn)生適應(yīng)性。

1.3 干預(yù)方法 第28天造模結(jié)束，以糖水偏好實驗、曠場實驗等行為學(xué)指標為評價標準，判斷造模是否成功。根據(jù)隨機數(shù)字表法將造模成功后的24只大鼠隨機分為柴胡疏肝散組8只、帕羅西汀組8只、模型組8只。從第29天開始，對各組大鼠分別進行2周不同的干預(yù)。①柴胡疏肝散組：每日予柴胡疏肝散灌胃治療，按生藥6.3 g（kg·d） 給藥。2次/d，共治療2周。②帕羅西汀組：每日予帕羅西汀灌胃治療，按1.8 mg/kg給藥。③模型組：給予蒸餾水灌胃處理，蒸餾水灌胃量同帕羅西汀組。④正常對照組：常規(guī)飼養(yǎng)，不予任何處理。各組均自由飲水攝食。

本研究的柴胡疏肝散采用中藥配方顆粒（廣東一方制藥有限公司生產(chǎn)），按照中藥飲片柴胡6 g，醋炒陳皮6 g，白芍4.5 g，麩炒枳殼4.5 g，川芎4.5 g，香附4.5 g，炙甘草1.5 g的比例組方，將中藥配方顆粒換算成中藥飲片劑量；帕羅西汀采用鹽酸帕羅西汀片（中美天津史克制藥有限公司生產(chǎn)，批準文號:H10950043，規(guī)格：20 mg×10片×1板/盒）。

1.4 觀察指標 分別于實驗第1天、第14天、第28天、第35天、第42天進行體重測定、糖水偏好實驗 (SPT)、曠場實驗 (OFT)，記錄相關(guān)數(shù)據(jù)。

1.4.1 體重測定 分別測定并記錄4組大鼠的體重，然后計算比較各組大鼠體重的變化。

1.4.2 SPT①安靜環(huán)境內(nèi)訓(xùn)練大鼠適應(yīng)含糖飲水，每籠放2個相同飲水瓶。第1個24 h內(nèi)，2瓶為同等重量1%庶糖水；第二個24 h內(nèi)，1瓶為1%庶糖水，1瓶為同等重量純凈水。隨后禁食禁水23 h；②同時予2個相同飲水瓶，1瓶為1%庶糖水，1瓶為同等重量純凈水，1 h后測量消耗量。測量指標：糖水消耗量、糖水偏好度（糖水消耗量/總液體消耗量×100%）。

1.4.3 OFT①實驗箱底部平均劃為25格，中央9格為中央?yún)^(qū)域，其余16格為外周區(qū)域；②在安靜且昏暗的房間，捏住大鼠尾巴（距根部1/3處）輕放入實驗箱中央，觀察其在5 min內(nèi)總活動路程和中央?yún)^(qū)域停留時間，紅外照明，攝像頭記錄過程；③1次OFT后清理箱內(nèi)糞便等殘留物，噴灑酒精并用紗布拭擦干凈，以除去上一只大鼠的氣味，避免影響下一只大鼠實驗結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用數(shù)據(jù)處理軟件SPSS 21.0進行分析，組間計量數(shù)據(jù)以計，比較采用單因素方差分析，組間多重比較用LSD法；采用重復(fù)測量資料方差分析比較不同時間點體重，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠體重變化比較 造模前4組大鼠體重之間比較差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＞0.05)，具有可比性。實驗第14天、28天、35天、42天，4組大鼠體重均依次增加。實驗第35天、42天，帕羅西汀組、柴胡疏肝散組大鼠體重比模型組大鼠體重增加更為明顯，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜0.05)；柴胡疏肝散組大鼠體重增加與帕羅西汀組體重增加比較無顯著性差異 (P＞0.05)。見表1。

表1 各組大鼠體重變化比較 （x±s，g）

2.2 第42天各組大鼠行為學(xué)檢測結(jié)果 模型組、帕羅西汀組、柴胡疏肝散組大鼠糖水偏好百分比均明顯低于正常對照組，帕羅西汀組、柴胡疏肝散組大鼠糖水偏好百分比均明顯高于模型組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；模型組、帕羅西汀組、柴胡疏肝散組大鼠懸尾不動時間、逃避潛伏期均明顯長于正常對照組 (P＜0.05)，帕羅西汀組、柴胡疏肝散組大鼠懸尾不動時間、逃避潛伏期均明顯短于模型組 (P＜0.05)；柴胡疏肝散組大鼠懸尾不動時間、逃避潛伏期短于帕羅西汀組，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義 (P＞0.05)。見表2。

表2 第42天各組大鼠行為學(xué)檢測結(jié)果比較 （x±s）

2.3 第42天各組大鼠曠場實驗結(jié)果比較 各組大鼠之間接觸時間、跨格次數(shù)以及豎起次數(shù)相比較差異明顯，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜0.05)；模型組、帕羅西汀組、柴胡疏肝散組接觸時間、跨格次數(shù)以及豎起次數(shù)均明顯高于正常對照組 (P＜0.05)；帕羅西汀組、柴胡疏肝散組大鼠接觸時間、跨格次數(shù)以及豎起次數(shù)均明顯低于模型組 (P＜0.05)；柴胡疏肝散組大鼠接觸時間明顯低于帕羅西汀組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜0.05)，但2組跨格次數(shù)、豎起次數(shù)比較無顯著差異 (P＞0.05)。見表3。

表3 4組大鼠曠場實驗結(jié)果比較 （x±s）

3 討論

抑郁癥是一種臨床上十分常見的心境障礙，世界衛(wèi)生組織（WHO）資料顯示，每年全球有1.21億患者倍受抑郁癥折磨，2020年抑郁癥將成為危害人類健康的第二大疾病，占全球疾病負擔的15%[5]。1項關(guān)于因病傷殘 (功能缺損)原因的統(tǒng)計結(jié)果發(fā)現(xiàn)，抑郁癥致殘僅次于慢性阻塞性肺部疾病，且在未來20年將成為人類尤其是女性死亡及殘疾的首要原因，故有關(guān)抑郁癥的防治研究已成為各國衛(wèi)生醫(yī)療機構(gòu)研究的熱點問題[6-7]。

近年來，有關(guān)抑郁癥發(fā)病機制方面的研究已取得了一定進展，但對于抑郁癥的臨床治療效果仍不甚理想；目前的抗抑郁藥物僅對70%左右的患者有效，治愈率僅為30%，起效時間2～4周，存在起效較慢、治愈率不高、不良反應(yīng)多等問題，不能滿足患者對治療及時起效的需要以及對治療結(jié)局的期待[8]?；谥嗅t(yī)藥不良反應(yīng)少、整體調(diào)節(jié)等優(yōu)勢，中醫(yī)藥抗抑郁作用近年來引起了國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注。大量的臨床研究和實踐表明，中藥復(fù)方治療抑郁癥尤其是癥狀較多及病程較長的抑郁癥，有顯著治療效果[9]。因此，通過發(fā)揮中醫(yī)藥特色及優(yōu)勢來研發(fā)治療抑郁癥的中藥新藥有非常好的前景[10]。柴胡疏肝散出自《景岳全書》，方中柴胡、白芍、香附、郁金疏肝理氣，川芎、當歸活血化瘀，陳皮、茯苓健脾化痰，諸藥合用共奏疏肝理氣解郁之功，用于情志失調(diào)所致病證，是中醫(yī)治療肝氣郁結(jié)證的常用基礎(chǔ)方劑[11]。實驗研究證實，柴胡疏肝散在治療多種抑郁性精神障礙方面均具有顯著療效，分析可能是與中藥具有多層次多靶點和整體調(diào)整的作用有關(guān)[12]。

已有研究表明，抑郁癥大鼠的行為學(xué)會發(fā)生改變，行為學(xué)評價及曠場實驗結(jié)果可用于判定抑郁癥大鼠造模是否成功和藥物干預(yù)效果的觀察指標[13]。本研究結(jié)果顯示，柴胡疏肝散對抑郁癥大鼠的行為學(xué)及曠場實驗均有顯著影響：實驗第35天、42天，對比模型組，帕羅西汀組、柴胡疏肝散組大鼠體重增加更為明顯。實驗第42天，對比正常對照組，模型組、帕羅西汀組、柴胡疏肝散組大鼠糖水偏好百分比均顯著偏低，懸尾不動時間、逃避潛伏期顯著延長，接觸時間、跨格次數(shù)、豎起次數(shù)均明顯增高；對比模型組，帕羅西汀組、柴胡疏肝散組大鼠糖水偏好百分比均明顯增高，懸尾不動時間、逃避潛伏期顯著縮短，大鼠接觸時間、跨格次數(shù)、豎起次數(shù)均明顯降低。但柴胡疏肝散組與帕羅西汀組大鼠體重增加量、懸尾不動時間、逃避潛伏期、跨格次數(shù)、豎起次數(shù)比較沒有顯著差異。以上研究結(jié)果提示，柴胡疏肝散可明顯緩解抑郁癥大鼠的情緒低落、興趣感減退、精神意志運動遲滯及記憶力減退等癥狀，但不能在短時間內(nèi)使抑郁癥狀完全恢復(fù)正常；柴胡疏肝散抗抑郁效果與帕羅西汀無顯著差異。

綜上所述，柴胡疏肝散對抑郁癥大鼠具有明顯的抗抑郁作用。但是，本研究選用大鼠數(shù)量偏少，觀測指標不全面，需要進一步完善。

[1]劉繼剛，袁楊，臧蔚，等.柴胡疏肝散對抑郁大鼠海馬微管相關(guān)蛋白-2磷酸化的影響[J].貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2016，41(4):387-390.

[2]Guo MJ，Suo YR，Gao Q，et al.The protective mechanism of Ginkgolides and Ginkgo flavonoids on the TNF-α induced apoptosis of rat hippocampal neurons and its mechanisms in vitro[J].Heliyon，2015，11(36):20-24.

[3]劉英，徐愛軍，田艷霞，等.柴胡疏肝散對抑郁癥大鼠海馬5-HT及5-HT1A表達的影響[J].河北北方學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué)版)，2013，29(5):65-67，70.

[4]金衛(wèi)東，邢葆平，王鶴秋，等.柴胡疏肝散治療抑郁癥對照研究臨床療效的 Meta 分析[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2009，277（7）：1397-1399.

[5]王永志，杜儀，韓玉，等.柴胡疏肝散對抑郁癥大鼠海馬神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響[J].北京中醫(yī)藥，2014，33(1):50-53.

[6]孟盼，趙洪慶，杜青，等.左歸降糖解郁方對糖尿病并發(fā)抑郁癥大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的影響[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2016，23(9):78-81.

[7]王永志，趙靜潔，杜儀，等.柴胡疏肝散對抑郁癥大鼠行為學(xué)的影響[J].北京中醫(yī)藥，2012，31(10):783-785.

[8]徐愛軍，劉昊，田艷霞，等.柴胡疏肝散對抑郁癥大鼠行為學(xué)和海馬神經(jīng)元凋亡及自噬的影響[J].吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2014，40(4):801-804.

[9]朱玉英，紀榮靜，熊佩黎，等.抑郁癥大鼠海馬神經(jīng)元凋亡率和自噬相關(guān)蛋白的改變[J].中國組織化學(xué)與細胞化學(xué)雜志，2013，22(6):471-474.

[10]凌佳，楊琴，劉檢，等.左歸降糖解郁方對模擬糖尿病并發(fā)抑郁癥環(huán)境下模型大鼠海馬神經(jīng)元凋亡相關(guān)蛋白的影響[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2017，24(10):35-39.

[11]馬書娟，姚建平，樊蔚虹，等.柴胡疏肝散對抑郁癥模型大鼠HPA軸功能的影響[J].中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2014，20(9):1210，1280.

[12]曹美群，陳德珩，張春虎，等.抑郁模型大鼠海馬內(nèi)特異性microRNAs的篩選以及柴胡疏肝散的干預(yù)作用[J].中國中藥雜志，2013，38(10):1585-1589.

[13]薛濤，鄔麗莎，劉新民，等.抑郁癥動物模型及評價方法研究進展[J].中國實驗動物學(xué)報，2015，23（3）：321-324.