復(fù)方苦參注射液聯(lián)合白細(xì)胞介素-2預(yù)防性阻斷亞臨床期原發(fā)性肝癌

劉梅訊 譚 利 龍海燕 雷鳳琴 李德梅

(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院醫(yī)學(xué)影像中心，湖北 十堰 442000)

原發(fā)性肝癌(PHC)起病隱匿，早期缺乏典型臨床癥狀和體征。一旦確診往往已發(fā)展成中、晚期癌，病程已不可逆轉(zhuǎn)，治療效果與預(yù)后極差〔1～4〕。然而，研究表明在PHC的亞臨床期，人的免疫系統(tǒng)還沒有太多損傷，是腫瘤治療與逆轉(zhuǎn)的最佳時(shí)機(jī)〔5～7〕。腫瘤標(biāo)志物(TM)是腫瘤細(xì)胞合成或是機(jī)體細(xì)胞對(duì)腫瘤反應(yīng)而異常表達(dá)的一類物質(zhì)。與PHC關(guān)系密切的TM有腫瘤異常蛋白(TAP)、甲胎蛋白(AFP)及AFP mRNA等。本研究應(yīng)用復(fù)方苦參注射液(CMI)聯(lián)合白細(xì)胞介素(IL)-2干預(yù)治療亞臨床期PHC，通過觀察各組患者TAP、AFP及AFP mRNA的表達(dá)變化，探討CMI聯(lián)合IL-2預(yù)防性阻斷亞臨床期PHC的效果。

1 資料與方法

1.1研究對(duì)象 選取2013年1月至2015年12月在十堰市太和醫(yī)院門診或住院治療的亞臨床期PHC患者203例，男135例，女68例；中位年齡51.5～20.5歲，均有病毒性肝炎病史，符合病毒性肝炎后代償性肝硬化診斷標(biāo)準(zhǔn)。采用隨機(jī)數(shù)字表法將入選病例隨機(jī)分為CMI組、IL-2組、CMI聯(lián)合IL-2組(聯(lián)合組)和對(duì)照組，分別為49例、51例、53例和50例。治療前各組性別、年齡、病情比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，具有可比性，見表1。

表1 治療前各組性別、年齡及病情臨床基線比較

1.2治療方法 各組均給予常規(guī)抗病毒、護(hù)肝及對(duì)癥支持治療：肝安注射液250 ml/d，靜脈點(diǎn)滴，阿德福韋酯10 mg/d口服。CMI組加用復(fù)方苦參堿注射液，將復(fù)方苦參注射液20 ml加入250 ml生理鹽水中靜脈滴注，每日1次，連用3個(gè)月；治療1個(gè)月后評(píng)價(jià)療效及毒副反應(yīng)。IL-2組加用IL-2靜脈滴注，每次(2.5～5.0)萬U，每日1次，連用3個(gè)月。聯(lián)合組同時(shí)加用CMI、IL-2。1個(gè)療程為3個(gè)月，各組均進(jìn)行2個(gè)療程的治療干預(yù)。

1.3檢測指標(biāo)與方法 分別于治療前、治療3個(gè)月、治療6個(gè)月及隨訪3年時(shí)，檢測各組TAP、AFP和AFP mRNA陽性表達(dá)情況。①TAP檢測：采用TAP檢測系統(tǒng)和TAP凝聚助劑(浙江瑞生醫(yī)療科技有限公司)；②AFP檢測：運(yùn)用微粒子發(fā)光法(美國雅培公司)；③熒光定量PCR檢測AFP mRNA，自動(dòng)熒光PCR分析儀采用PE7700自動(dòng)熒光PCR儀(美國Perkin)；④隨訪3年時(shí)，對(duì)每個(gè)入選對(duì)象進(jìn)行肝臟B超或CT或MRI檢查，發(fā)現(xiàn)腫塊即行肝穿、病理學(xué)檢查，并統(tǒng)計(jì)PHC確診例數(shù)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0軟件進(jìn)行方差分析及χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

治療3個(gè)月時(shí)，與對(duì)照組TAP、AFP和AFP mRNA陽性表達(dá)比較，聯(lián)合組、CMI組及IL-2組均顯著下降(均P<0.01)；但CMI組與IL-2組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；而聯(lián)合組均較CMI組和IL-2組顯著降低(P均<0.01)。與治療3個(gè)月時(shí)比較，治療6個(gè)月時(shí)對(duì)照組TAP、AFP和AFP mRNA陽性表達(dá)無明顯下降(P均>0.05)。與對(duì)照組比較，聯(lián)合組、CMI組及IL-2組均進(jìn)一步下降(P均<0.05)；但CMI組與IL-2組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)；而聯(lián)合組分別較CMI組和IL-2組顯著下降(P均<0.05)，見表2。隨訪3年時(shí)，與對(duì)照組TAP、AFP和AFP mRNA陽性表達(dá)與PHC確診率分別比較，聯(lián)合組、CMI組及IL-2組均顯著下降(P均<0.01)；但CMI組與IL-2組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)；而聯(lián)合組較CMI組和IL-2組均明顯下降(P均<0.01)，見表3。

表2 治療前后各組TAP、AFP、AFP mRNA陽性表達(dá)比較〔n(%)〕

與對(duì)照組比較：1)P<0.01,2)P<0.05；與聯(lián)合組比較：3)P<0.01，4)P<0.05，下表同

表3 隨訪3年時(shí)各組TAP、AFP、AFP mRNA陽性表達(dá)與PHC確診率比較〔n(%)〕

3 討 論

PHC是惡性度極高的腫瘤，在十堰地區(qū)呈現(xiàn)相對(duì)集中的高發(fā)區(qū)，尤其在城區(qū)〔1〕。亞臨床腫瘤的發(fā)展是一個(gè)雙向轉(zhuǎn)化的動(dòng)態(tài)過程，此時(shí)腫瘤細(xì)胞數(shù)<108個(gè)，未形成腫塊及其營養(yǎng)血管，亦無臨床癥狀、體征與身體危害，通過中醫(yī)中藥、提高免疫力等干預(yù)可以逆轉(zhuǎn)〔8～10〕。然而，臨床期腫瘤細(xì)胞數(shù)通常>109個(gè)，已處于不可逆的中、晚期，其中一部分患者已出現(xiàn)了腫瘤轉(zhuǎn)移，喪失了最佳治療期。因此，腫瘤防治的根本原則是“早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療”，即“三早”；而“三早”的關(guān)鍵是早期發(fā)現(xiàn)處于亞臨床期的腫瘤，也就是對(duì)腫瘤高危人群的科學(xué)篩查、管理及有效干預(yù)。研究表明，以血清AFP 400 μg/L作為PHC診斷標(biāo)準(zhǔn)，敏感性不到50%〔11～13〕；約70%PHC患者AFP可呈陽性，但另有30%PHC患者陰性及部分慢性肝炎、肝硬化患者AFP陽性，影響了AFP對(duì)PHC的診斷價(jià)值。

TAP是腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物，是具有“異常糖鏈”的TM，亞臨床期即可被檢測，為PHC早期診斷提供了新方法。臨床研究證明，TAP檢測對(duì)惡性腫瘤的靈敏度達(dá)93.2%、特異性達(dá)92.6%，且與AFP陽性不重疊。當(dāng)癌細(xì)胞的數(shù)量達(dá)到約105個(gè)及以上時(shí)，在指端血液中可檢出TAP；癌細(xì)胞數(shù)量從105個(gè)發(fā)展至109個(gè)，至少需要1～3年，即TAP檢測陽性比臨床體征/癥狀/腫塊出現(xiàn)要早1～3年〔2〕。AFP mRNA是成人肝細(xì)胞癌變后AFP基因表達(dá)產(chǎn)物。由于AFP mRNA不僅是基因在轉(zhuǎn)錄水平的表現(xiàn)，也可作為細(xì)胞表型的標(biāo)志，能在細(xì)胞無任何形態(tài)變化的情況下判斷該細(xì)胞的表現(xiàn)型，因此，其作為PHC診斷指標(biāo)可以發(fā)現(xiàn)一些早期甚至是亞臨床期的PHC。目前，采用外周血循環(huán)細(xì)胞RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄PCR、檢測腫瘤標(biāo)志物的表達(dá)情況，由此判斷是否存在癌細(xì)胞，以達(dá)到早期診斷腫瘤的目的。在部分PHC患者中，由于AFP基因在表達(dá)過程中翻譯缺失而停止轉(zhuǎn)錄之后，血清AFP表達(dá)為陰性〔14～16〕，而AFP mRNA則為陽性，故檢測AFP mRNA可對(duì)血清AFP陰性的患者做出早期診斷，彌補(bǔ)了現(xiàn)行單純以AFP作為診斷依據(jù)的不足。

CMI是由苦參、白茯苓等組成的純中藥制劑，其中的苦參堿是一類生物活性較強(qiáng)物質(zhì)，其抗腫瘤的作用是全面而廣泛的，如拮抗腫瘤增殖、浸潤和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、抑制腫瘤新生血管形成、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、降低化療不良反應(yīng)等。目前CMI主要適用于失去手術(shù)、放療、化療時(shí)機(jī)的晚期癌癥患者，能夠發(fā)揮抗癌、鎮(zhèn)痛、止血、提高免疫功能等作用〔17，18〕。

本研究表明，CMI、IL-2均有較好的抗癌變能力。CMI具有清熱利濕、涼血解毒、散結(jié)止痛等抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用，其機(jī)制可能是誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、阻滯細(xì)胞于G0/G1期，而IL-2可以通過誘導(dǎo)和激活機(jī)體免疫活性細(xì)胞如自然殺傷(NK)細(xì)胞、腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞(TIL)、淋巴細(xì)胞激活殺傷(LAK)細(xì)胞及細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)等殺傷癌細(xì)胞；二者從不同方面、以不同機(jī)制逆轉(zhuǎn)癌變過程，且二者聯(lián)合應(yīng)用治療亞臨床期PHC能起到協(xié)同增效的作用〔19～21〕。本研究中隨訪3年時(shí)，確診為PHC的例數(shù)，在聯(lián)合組最少，CMI組、IL-2組次之，對(duì)照組最多。這表明CMI、IL-2均具有預(yù)防性阻斷治療亞臨床期PHC的作用，以CMI、IL-2聯(lián)合治療的效果更好；同時(shí)表明早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早預(yù)防性阻斷治療PHC高?；颊?，是必要的、有效的。

1施南峰.腫瘤異常蛋白(TAP)篩查早期惡性腫瘤應(yīng)用研究〔J〕.中國公共衛(wèi)生管理,2010;26(2):187-9.

2楊志惠.腫瘤異常蛋白在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)〔J〕.河北醫(yī)藥,2013;35(13):2030.

3吳永梅,張霽雯.慢性萎縮性胃炎TAP測定及相關(guān)研究〔J〕.中國傷殘醫(yī)學(xué),2014;22(9):55-6.

4趙云鵬,高春芳.N-糖組在消化系統(tǒng)惡性腫瘤中的研究〔D〕.上海：第二軍醫(yī)大學(xué)東方肝膽外科醫(yī)院,2011.

5張 銳.腫瘤異常蛋白與AFP mRNA檢測在肝癌診斷中的價(jià)值〔J〕.吉林醫(yī)學(xué),2010;31(10):1355-7.

6衣常紅,高春芳.異常糖基化修飾IgG的實(shí)驗(yàn)診斷價(jià)值和病理意義研究〔D〕.上海：第二軍醫(yī)大學(xué)東方肝膽外科醫(yī)院,2012.

7吳葆華.癌胚抗原、糖類抗原125、糖類抗原50聯(lián)合檢測對(duì)老年胃癌的診斷價(jià)值〔J〕.中國老年學(xué)雜志,2014;34(2):525-6.

8覃紅斌,張 潔,張京偉.復(fù)方苦參注射液聯(lián)合FOLFOX4化療方案治療晚期胃癌的作用〔J〕.武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2012;33(2):215-8.

9趙先文,江 波,韓存芝.大腸癌患者血清腫瘤標(biāo)志物含量測定與臨床研究〔J〕.中華腫瘤雜志,2005;27(5):286-8.

10周 琦,張 瓊,魏 來.聯(lián)合檢測CA19-9、CEA、CA72-4、MG-Ag對(duì)胃癌的診斷價(jià)值〔J〕.世界華人消化雜志,2010;18(25):2698-701.

11Wu J,Xie XL,Nie S,etal.Altered expression of sialylated glycoproteins in ovarian cancer sera using lectin-based ELISA assay and quantitative glycoproteomics analysis〔J〕.J Proteome Res,2013;8(12):3342-52.

12Shetty V,Hafner J,Shah P,etal.Investigation of ovarian cancer associated sialylation changes in N-linked glycopeptides by quantitative proteomics〔J〕.Clin Proteom,2012;6(9):10.

13邵建華,施南峰.采用腫瘤異常蛋白篩查早期惡性腫瘤結(jié)果分析〔J〕.疾病監(jiān)測,2007;22(9):645-6.

14高利平,周迎會(huì).多聚乳糖胺型N-聚糖與結(jié)腸癌細(xì)胞株SW620耐藥性的關(guān)系探討〔D〕.蘇州：蘇州大學(xué),2014.

15楊 娟,陳 杰.N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶-Ⅴ與惡性腫瘤增殖和侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系〔J〕.華西醫(yī)學(xué),2014;29(9):1779-82.

16張利國,周 杰,林建華,等.聯(lián)合檢測外周血AFP mRNA、h-TERT mRNA對(duì)肝細(xì)胞肝癌的診斷價(jià)值〔J〕.重慶醫(yī)學(xué),2010;39(13):1672-3,1676.

17解智慧,王明榮.一種新的介導(dǎo)細(xì)胞間粘附的肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白KIAA1522在食管癌中作用及其機(jī)制的研究〔D〕.北京：協(xié)和醫(yī)學(xué)院,2014.

18張玉榮,付 穎,袁 芳,等.腫瘤異常蛋白在預(yù)測子宮內(nèi)膜癌術(shù)后復(fù)發(fā)中的臨床價(jià)值〔J〕.醫(yī)學(xué)動(dòng)物防制,2013;29(7):809-10.

19徐建業(yè),林 丁,李偉道,等.甲胎蛋白診斷原發(fā)性肝癌準(zhǔn)確性的系統(tǒng)評(píng)價(jià)〔J〕.中國循證醫(yī)學(xué)雜志,2009;9(5):525-30.

20李 瑩,于海明,楊俊蘭,等.白細(xì)胞介素-2在人早期乳腺癌組織中的表達(dá)及預(yù)后意義〔J〕.解放軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2014;35(2):161-5.

21劉曉鳳,簡曉順.復(fù)方苦參注射液對(duì)人肝癌SMMC7721細(xì)胞增殖的抑制作用〔J〕.中國藥房,2015;26(16):2190-2.