仙靈骨葆單獨(dú)及與奧美拉唑聯(lián)合應(yīng)用的肝毒性研究

丁雁南，馬紅紅，石富國(guó)，徐亞沙，王 洋，魯艷柳，陸遠(yuǎn)富

(遵義醫(yī)科大學(xué) 基礎(chǔ)藥理教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室暨特色民族藥教育部國(guó)際合作聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室，貴州 遵義 563099)

藥物性肝損傷(drug-induced liver injury,DILI)是由藥物及其代謝產(chǎn)物等所誘發(fā)的肝損傷[1]，是最常見(jiàn)的藥物不良反應(yīng)之一，嚴(yán)重者可導(dǎo)致急性肝衰竭甚至死亡[2-3]，在中國(guó)，中草藥所致的肝損傷是DILI發(fā)生的重要原因[4-5]。仙靈骨葆由淫羊藿、續(xù)斷、補(bǔ)骨脂、丹參、地黃、知母六味中藥材組成，臨床用于治療骨關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松、骨折等疾病[6]。近年來(lái)有仙靈骨葆單獨(dú)或與其它藥物聯(lián)合應(yīng)用導(dǎo)致肝損傷的病例報(bào)道，其中有聯(lián)合用藥患者因肝衰竭而死亡[7-11]，2016年國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局要求該藥品說(shuō)明書(shū)中增設(shè)肝損傷風(fēng)險(xiǎn)警示[12-13]。目前針對(duì)仙靈骨葆的實(shí)驗(yàn)研究多為療效研究，毒性研究?jī)H見(jiàn)兩篇文獻(xiàn)報(bào)道，一篇顯示仙靈骨葆水提物在臨床劑量10～50倍下可造成原代肝細(xì)胞線(xiàn)粒體損傷[14]。另一篇報(bào)道給予大鼠仙靈骨葆26周未見(jiàn)明顯肝毒性[15]，但該研究用藥頻次與臨床不符，且通過(guò)嚙齒類(lèi)動(dòng)物研究肝毒性時(shí)，與大鼠相比，小鼠的基因及代謝系統(tǒng)與人更接近[16-18]，因此本研究將在小鼠模型上考察仙靈骨葆的潛在肝毒性。

臨床上藥物聯(lián)用時(shí)藥物相互作用也是導(dǎo)致DILI發(fā)生的重要原因，藥物相互作用(Drug-drug interaction，DDI)引起的藥物不良反應(yīng)約占不良反應(yīng)總數(shù)的30%[19]，由代謝酶活性變化引起的代謝型相互作用是DDI發(fā)生的主要類(lèi)型[20-22]。奧美拉唑是臨床消化系統(tǒng)疾病常用藥，其主要經(jīng)CYP2C19及CYP3A4代謝，并影響多種P450酶活性：如激動(dòng)CYP1A2，抑制CYP2C19等[23-24]，與其他藥物聯(lián)用時(shí)可能發(fā)生代謝型DDI。目前臨床有病例報(bào)道仙靈骨葆與奧美拉唑聯(lián)用產(chǎn)生肝損傷，但缺乏相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[11]。

為明確仙靈骨葆自身的肝毒性及其與奧美拉唑聯(lián)用的安全性，本研究將考察給予小鼠27周臨床劑量及8倍臨床劑量的仙靈骨葆和聯(lián)用奧美拉唑后的肝毒性以及對(duì)小鼠主要代謝酶的影響，以期為仙靈骨葆臨床合理和安全用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑 仙靈骨葆膠囊(Xian-Ling-Gu-Bao，XLGB，0.5 g×30粒，批號(hào)：1704001，國(guó)藥集團(tuán)同濟(jì)堂貴州制藥有限公司)；注射用奧美拉唑(Omeprazole，OME，40 mg，批號(hào)：B1710071，江蘇奧賽康藥業(yè)股份有限公司)。谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase，ALT)試劑盒(批號(hào)：20180102)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotransferase，AST)試劑盒(批號(hào)：20180105)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)試劑盒(批號(hào)：20180416)均購(gòu)自南京建成公司；Trizol(100 mL，批號(hào)：AKA5601)、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(批號(hào)：AK6501)均購(gòu)自Takara公司；Power SYBR Green(批號(hào)：64148508，美國(guó)BIO-RAD公司)；DEPC水(100 mL，生工生物工程(上海)股份有限公司)；PCR所用引物序列如表1，均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

表1實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物序列

基因Genbank號(hào) 上游引物 5’-3’ 下游引物 5’-3’擴(kuò)增片段(bp)GapdhNM_008084TGAGGCCGGTGCTGAGTATGTCAGTCTTCTGGGTGGCAGTGAT299Cyp1a1NM_009992GGCCACTTTGACCCTTACAACAGGTAACGGAGGACAGGAA186Cyp1a2NM_009993AGGGACACCTCACTGAATGGCCGAAGAGCATCACCTTCTC182Cyp2b9NM_010000GGACATTGACCTCACTCCCAAACATGCCTTGGAGCTTTGG223Cyp2c37NM_010001ACATCTGCCAATCCTTCACCAGTGAGAAACGCCTCGTGTT238Cyp2d9NM_010006GGACTTCTCGTTACCCACCACTCTCCACAGGTCAACAGCA203Cyp2e1NM_021282CCTACATGGATGCTGTGGTGCTGGAAACTCATGGCTGTCA171Cyp3a11NM_007818CAGCTTGGTGCTCCTCTACCCTCTGGGTCTGTGACAGCAA214Cyp3a25NM_019712GCCTTGCTTCAAACCAGAAGCATCATAGCCCCCGAAGATA147AhrNM_013464ATGGAGGCCAGGACCAGTGTAGTGCTGTGACAACCAGCACAAAG107CarNM_009803CTCAAGGAAAGCAGGGTCAGAGTTCCTCGGCCCATATTCT150PxrNM_010936CCCATCAACGTAGAGGAGGATCTGAAAAACCCCTTGCATC117

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 CPA225D電子天平(德國(guó)Sartorius公司)；MILLI-Q超純水純化系統(tǒng)(法國(guó)Millipore公司)；5417R高速冷凍離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司)；CSF-3A超聲清洗器(上海超聲波儀器廠)；TP1020自動(dòng)脫水機(jī)(德國(guó)Leica公司)；EG1150石蠟包埋機(jī)(德國(guó)Leica公司)；RM2245轉(zhuǎn)輪式切片機(jī)(德國(guó)Leica公司)；DX43+DP2b正置顯微鏡(日本Olympus公司)；985370手持式勻漿機(jī)(美國(guó)Biospec公司)；ND2000超微量分光光度計(jì)(美國(guó)Thermo公司)；22331多功能梯度PCR儀(德國(guó)Eppendorf公司)；CFX Connect實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(美國(guó)BIO-RAD公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 30只SPF級(jí)健康雄性C57小鼠，體重(20～24)g，購(gòu)于斯貝福(北京)生物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)：SCXK(京)2016-0002，于遵義醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)藥理教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室SPF級(jí)動(dòng)物房飼養(yǎng)，許可證號(hào)：SYXK(黔)2014-003，自由進(jìn)食飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后開(kāi)始給藥。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作程序符合國(guó)家《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》。

1.4 實(shí)驗(yàn)分組及給藥方案 將小鼠隨機(jī)分為6組：空白對(duì)照組(Control)、仙靈骨葆低劑量組(L-XLGB，臨床劑量，308 mg/kg)、仙靈骨葆高劑量組(H-XLGB，8倍臨床劑量，2 464 mg/kg)、奧美拉唑組(OME，臨床劑量，8.22 mg/kg)、仙靈骨葆低劑量聯(lián)用奧美拉唑組(L-XLGB+OME,308 mg/kg+8.22 mg/kg)、仙靈骨葆高劑量聯(lián)用奧美拉唑組(H-XLGB+OME,2 464 mg/kg+8.22 mg/kg)，每組3～6只。仙靈骨葆按實(shí)驗(yàn)劑量每天2次灌胃給藥，持續(xù)27周，奧美拉唑組及空白組用蒸餾水代替仙靈骨葆進(jìn)行灌胃，聯(lián)合用藥組及奧美拉唑組于第14周開(kāi)始腹腔注射奧美拉唑，每天1次，持續(xù)14周，空白組用生理鹽水腹腔注射。

1.5 小鼠體重變化及體重增長(zhǎng)率觀察 給藥期間每周定時(shí)測(cè)定小鼠禁食12 h后的體重，末次給藥后禁食12 h測(cè)定小鼠體重，計(jì)算小鼠體重增長(zhǎng)率，體重增長(zhǎng)率(%)=(給藥結(jié)束后體重﹣給藥前體重)/ 給藥前體重×100 %。

1.6 血清生化指標(biāo)檢測(cè)、肝系數(shù)及肝臟組織形態(tài)學(xué)觀察 末次給藥后禁食12 h，摘眼球取血，頸椎脫臼法處死小鼠，收集肝臟并稱(chēng)重，計(jì)算肝系數(shù)，肝系數(shù)(%)=肝臟重量/體重×100%。全血3 000 rpm離心10 min，分離血清，按試劑盒說(shuō)明書(shū)方法檢測(cè)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶的活力。取新鮮肝臟左側(cè)外葉組織，用4%甲醛固定，石蠟包埋，常規(guī)切片，厚度約為5 μm，采用H&E染色后觀察肝臟組織形態(tài)學(xué)變化。

1.7 RT-PCR法測(cè)定肝CYP450酶的mRNA表達(dá) 取肝臟組織50 mg，用Trizol試劑提取總RNA，通過(guò)超微量分光光度計(jì)檢測(cè)提取的總RNA的濃度與純度，將OD260/OD280的比值在1.8～2.0范圍內(nèi)的RNA調(diào)整總濃度為100 ng/μL進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄(37 ℃，15 min；85 ℃，5 s)，所得cDNA進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)，PCR反應(yīng)體系為15 μL，95 ℃，3 min 預(yù)變性；95 ℃，15 s變性；60 ℃，45 s退火，40循環(huán)。結(jié)果采用相對(duì)定量法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，PCR結(jié)果以GAPDH作為內(nèi)參照。

2 結(jié)果

2.1 單獨(dú)給予仙靈骨葆及聯(lián)合奧美拉唑用藥對(duì)小鼠體重的影響 從給藥第6周開(kāi)始至給藥結(jié)束，各給藥組小鼠體重均低于空白對(duì)照組(見(jiàn)圖1A)。給藥27周后，各給藥組與空白對(duì)照組相比體重增長(zhǎng)率均顯著降低，其中仙靈骨葆聯(lián)用奧美拉唑組對(duì)體重的影響程度與仙靈骨葆單獨(dú)應(yīng)用組相當(dāng)，比奧美拉唑單獨(dú)應(yīng)用組影響程度高(見(jiàn)圖1B)。

A：給藥期間小鼠體重變化；B：小鼠體重增長(zhǎng)率；與對(duì)照組比較，*：P<0.05, Δ：P<0.001；與OME 組比較，#：P<0.05。圖1 仙靈骨葆單獨(dú)及聯(lián)合奧美拉唑用藥對(duì)小鼠體重的影響

2.2 單獨(dú)給予仙靈骨葆及聯(lián)合奧美拉唑用藥對(duì)小鼠肝系數(shù)及肝臟重量的影響 如圖2所示，各給藥組小鼠肝系數(shù)與空白對(duì)照組相比無(wú)明顯變化(見(jiàn)圖2A)，與空白對(duì)照組相比，仙靈骨葆高劑量聯(lián)用奧美拉唑組肝臟重量略有下降，其余各給藥組肝臟重量均顯著下降(見(jiàn)圖2B)，聯(lián)合用藥組與仙靈骨葆組、奧美拉唑組相比肝系數(shù)及肝臟重量均未體現(xiàn)出顯著差異。

A：小鼠肝系數(shù)變化；B：小鼠肝臟重量變化；與對(duì)照組比較，**:P<0.01。圖2 仙靈骨葆單獨(dú)及聯(lián)合奧美拉唑用藥對(duì)小鼠肝系數(shù)及肝臟重量的影響

2.3 單獨(dú)給予仙靈骨葆及聯(lián)合奧美拉唑用藥對(duì)小鼠血清生化指標(biāo)的影響 如圖3所示，仙靈骨葆高劑量聯(lián)用奧美拉唑組的血清ALT活性與空白對(duì)照組及奧美拉唑組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異、仙靈骨葆低劑量組的血清ALP活性與空白對(duì)照組及仙靈骨葆低劑量聯(lián)用奧美拉唑組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但數(shù)值上均未發(fā)生大幅變化，表明仙靈骨葆及其聯(lián)用奧美拉唑?qū)π∈驛LT、AST、ALP活力影響較小。

A：小鼠血清ALT活性；B：小鼠血清AST活性；C：小鼠血清ALP活性；圖3 仙靈骨葆單獨(dú)及聯(lián)合奧美拉唑用藥對(duì)小鼠血清生化指標(biāo)的影響

2.4 單獨(dú)給予仙靈骨葆及聯(lián)合奧美拉唑用藥對(duì)小鼠肝組織病理變化的影響 空白對(duì)照組小鼠肝臟肝小葉結(jié)構(gòu)清晰完好，肝索呈放射狀整齊排列，細(xì)胞核位于細(xì)胞中央，肝細(xì)胞形態(tài)正常(見(jiàn)圖4A)，仙靈骨葆低劑量組肝細(xì)胞腫脹、肝索排列輕微紊亂并出現(xiàn)散在的炎細(xì)胞浸潤(rùn)病灶(見(jiàn)圖4B)，仙靈骨葆高劑量組較低劑量組肝臟組織炎細(xì)胞浸潤(rùn)病灶數(shù)量增多，面積增大，匯管區(qū)擴(kuò)張，肝細(xì)胞腫脹，肝索排列紊亂(見(jiàn)圖4C)，奧美拉唑組肝臟組織出現(xiàn)輕微的肝細(xì)胞水腫(見(jiàn)圖4D)，仙靈骨葆低劑量聯(lián)用奧美拉唑組肝臟組織同樣出現(xiàn)散在的炎細(xì)胞浸潤(rùn)病灶(見(jiàn)圖4E)，仙靈骨葆高劑量聯(lián)用奧美拉唑組出現(xiàn)較多炎細(xì)胞浸潤(rùn)病灶，肝細(xì)胞腫脹，肝索排列紊亂(見(jiàn)圖4F)，仙靈骨葆聯(lián)用奧美拉唑組病理結(jié)果與仙靈骨葆單獨(dú)用藥組相比較，損傷類(lèi)型一致，損傷程度相當(dāng)。

A：空白對(duì)照組；B：仙靈骨葆低劑量組；C：仙靈骨葆高劑量組；D：奧美拉唑組；E：仙靈骨葆低劑量聯(lián)用奧美拉唑組；F：仙靈骨葆高劑量聯(lián)用奧美拉唑組；標(biāo)尺= 50 μm，紅色箭頭：炎細(xì)胞浸潤(rùn)。圖4 仙靈骨葆單獨(dú)及聯(lián)合奧美拉唑用藥對(duì)小鼠肝組織病理變化的影響

2.5 單獨(dú)給予仙靈骨葆及聯(lián)合奧美拉唑用藥對(duì)小鼠肝臟主要P450酶及核受體mRNA的影響 如圖5所示，仙靈骨葆低、高劑量及仙靈骨葆高劑量聯(lián)合奧美拉唑可以增加小鼠肝臟Cyp1a2 mRNA的表達(dá)，仙靈骨葆高劑量聯(lián)合奧美拉唑組小鼠肝臟Cyp1a2 mRNA的表達(dá)與奧美拉唑組相比顯著增加。仙靈骨葆高劑量及仙靈骨葆高劑量聯(lián)合奧美拉唑可以增加小鼠肝臟Cyp2c37 mRNA的表達(dá)，仙靈骨葆高劑量聯(lián)合奧美拉唑可以增加小鼠肝臟Cyp1a1 mRNA的表達(dá)，仙靈骨葆低、高劑量可以增加小鼠肝臟Cyp2b9 mRNA的表達(dá)但個(gè)體差異明顯，仙靈骨葆低、高劑量均會(huì)抑制奧美拉唑?qū)π∈蟾闻KCyp3a11、Cyp2d9 mRNA表達(dá)的誘導(dǎo)作用，各給藥組對(duì)核受體的影響并不明顯。

A：Cyp1a2 mRNA相對(duì)表達(dá)量；B：Cyp2c37 mRNA相對(duì)表達(dá)量；C：Cyp3a25 mRNA相對(duì)表達(dá)量；D：Cyp3a11 mRNA相對(duì)表達(dá)量；E：Cyp2d9 mRNA相對(duì)表達(dá)量；F：Cyp2b9 mRNA相對(duì)表達(dá)量；G：Cyp1a1 mRNA相對(duì)表達(dá)量；H：Pxr mRNA相對(duì)表達(dá)量；I：Ahr mRNA相對(duì)表達(dá)量；J：Car mRNA相對(duì)表達(dá)量 = 3～6；與對(duì)照組比較，*：P<0.05,**： P <0.01,Δ：P<0.001；與OME組比較，#： P<0.05,##：P<0.01)。圖5 仙靈骨葆單獨(dú)及聯(lián)合奧美拉唑用藥對(duì)小鼠肝臟主要P450酶和核受體mRNA的影響

3 討論

本實(shí)驗(yàn)主要從體重、肝臟重量、肝系數(shù)、血清生化指標(biāo)、肝臟病理幾個(gè)方面考察了仙靈骨葆單獨(dú)及聯(lián)用奧美拉唑?qū)π∈蟮母味拘?。其中體重指標(biāo)反映生長(zhǎng)率，是毒理學(xué)考察的指標(biāo)之一，對(duì)低毒化合物的毒性觀察尤為重要[25]。在本實(shí)驗(yàn)中我們觀察到從第6周至給藥結(jié)束，各給藥組體重均低于空白對(duì)照組，且隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)，給藥組與空白對(duì)照組體重差異呈增大趨勢(shì)。給藥結(jié)束后各給藥組體重增長(zhǎng)率與空白對(duì)照組相比有顯著下降，仙靈骨葆組與其聯(lián)用奧美拉唑組體重增長(zhǎng)率下降程度相當(dāng)，影響均較為顯著，奧美拉唑組體重增長(zhǎng)率下降程度較仙靈骨葆單用組和聯(lián)用組低，這提示仙靈骨葆單用或合用奧美拉唑?qū)π∈蟮纳L(zhǎng)具有不利的影響，影響程度大于奧美拉唑單獨(dú)應(yīng)用，且仙靈骨葆組與聯(lián)合用藥組之間體重增長(zhǎng)率無(wú)顯著性差異，提示聯(lián)合用藥組的體重增長(zhǎng)率下降主要是由仙靈骨葆所引起的。

給藥27周后，給藥組小鼠的肝系數(shù)較空白對(duì)照組未發(fā)生明顯變化，肝臟重量較空白對(duì)照組有顯著下降，但聯(lián)用組與單獨(dú)用藥組相比未體現(xiàn)出顯著差異。肝臟重量的下降提示小鼠肝臟可能存在萎縮或發(fā)育不良，肝臟可能是仙靈骨葆毒作用的靶器官。肝系數(shù)未發(fā)生明顯變化，分析可能是由于給藥組小鼠的體重增長(zhǎng)減緩，給藥結(jié)束后體重明顯低于空白對(duì)照組，導(dǎo)致給藥組小鼠肝臟重量與體重的比值與空白組相比未出現(xiàn)明顯差異。

肝臟生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)是判斷有無(wú)肝臟損害、評(píng)估肝病嚴(yán)重程度、追蹤肝病進(jìn)展以及判斷治療效果和預(yù)后的重要臨床檢驗(yàn)指標(biāo)[26]，但在本實(shí)驗(yàn)的肝損傷考察中，發(fā)現(xiàn)給藥組小鼠肝臟組織出現(xiàn)明顯病理變化，而血清生化指標(biāo)變化并不明顯，這可能是由于影響生化實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素較多，氨基轉(zhuǎn)移酶水平高低與肝損害嚴(yán)重程度有時(shí)并不完全平行，臨床上也觀察到有5%～10%的慢性乙型肝炎、15%慢性丙型肝炎和非酒精性脂肪肝炎患者的血清氨基轉(zhuǎn)移酶水平正常[26]，國(guó)內(nèi)外均有文獻(xiàn)報(bào)道肝臟病變時(shí)，依據(jù)生化指標(biāo)的臨床分型與病理?yè)p傷模型的相關(guān)性有限[26-29]，僅以生化指標(biāo)判斷肝臟病變存在不足。其次，ALT、AST指標(biāo)是反映肝細(xì)胞損傷的敏感指標(biāo)，ALP指標(biāo)是反映膽管疾病的敏感指標(biāo)[26]，本實(shí)驗(yàn)的病理結(jié)果顯示給藥組小鼠肝臟出現(xiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)，但并未發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞的大量壞死或膽管阻塞等病變，所以ALT、AST、ALP活性未發(fā)生大幅升高。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示在肝臟生化指標(biāo)無(wú)異常情況下，仍然有肝組織病理變化存在。

肝臟病理檢查發(fā)現(xiàn)空白對(duì)照組小鼠肝臟形態(tài)正常，而給藥組小鼠肝臟均出現(xiàn)不同程度的炎細(xì)胞浸潤(rùn)，且炎細(xì)胞浸潤(rùn)程度隨給藥劑量增加而加重，提示仙靈骨葆可導(dǎo)致小鼠產(chǎn)生肝臟炎癥反應(yīng)。肝臟炎癥是多種肝臟疾病的基礎(chǔ)病變，與肝細(xì)胞的破壞及肝纖維化等肝臟疾病發(fā)展密切相關(guān)[30]。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)仙靈骨葆臨床劑量單獨(dú)應(yīng)用可導(dǎo)致以炎細(xì)胞浸潤(rùn)為主要病理特征的肝組織損傷，且隨給藥劑量增加炎細(xì)胞浸潤(rùn)加重，這與文獻(xiàn)報(bào)道大鼠給予仙靈骨葆臨床劑量及3倍臨床劑量26周[15]均未見(jiàn)明顯肝毒性不符，這可能與所采用實(shí)驗(yàn)對(duì)象和用藥頻次不同有關(guān)。仙靈骨葆聯(lián)用奧美拉唑組病理結(jié)果與仙靈骨葆單獨(dú)用藥組相比較，損傷類(lèi)型一致，損傷程度相當(dāng)，這提示聯(lián)合應(yīng)用奧美拉唑并未增加仙靈骨葆的小鼠肝臟病理?yè)p傷。

代謝性藥物相互作用是同時(shí)或貫序使用兩種甚至多種藥物時(shí)，誘變藥物對(duì)受變藥物的代謝酶(主要為細(xì)胞色素P450酶)的誘導(dǎo)或抑制引起受變藥物體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)行為改變，可能導(dǎo)致受變藥物血藥濃度超過(guò)其最小中毒濃度或產(chǎn)生/增加毒性代謝物而誘發(fā)肝損傷等不良反應(yīng)。為了考察仙靈骨葆可能的藥物相互作用，我們篩查了與代謝型DDI相關(guān)的主要P450酶及相關(guān)核受體的肝臟mRNA表達(dá)，發(fā)現(xiàn)仙靈骨葆能誘導(dǎo)小鼠肝臟Cyp1a2和Cyp2c37基因的mRNA表達(dá)，這可能與仙靈骨葆處方組成中含大量的可誘導(dǎo)CYP1A2的淫羊藿有關(guān)[31]，提示仙靈骨葆與經(jīng)CYP1A2代謝的藥物聯(lián)用時(shí)存在代謝型DDI風(fēng)險(xiǎn)。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果中我們也注意到仙靈骨葆可以抑制奧美拉唑?qū)yp2d9和Cyp3a11 mRNA的誘導(dǎo)作用，而仙靈骨葆本身對(duì)二者沒(méi)有明顯的抑制作用，這提示中藥的成分復(fù)雜性導(dǎo)致其在聯(lián)合用藥時(shí)存在復(fù)雜的相互作用機(jī)制，其原因及機(jī)制有待后續(xù)的深入研究。

為了考察在臨床上有肝損傷病例報(bào)道的奧美拉唑與仙靈骨葆聯(lián)用的肝毒性，我們給予小鼠仙靈骨葆13周后，合用奧美拉唑14周，這符合臨床上骨科慢性疾病長(zhǎng)期應(yīng)用仙靈骨葆，期間因消化道疾病合用奧美拉唑的用藥特征。本實(shí)驗(yàn)從肝臟重量、肝系數(shù)、血清生化指標(biāo)以及肝組織形態(tài)學(xué)變化等方面考察，仙靈骨葆聯(lián)用奧美拉唑組均與單用仙靈骨葆組變化程度相當(dāng)，聯(lián)用奧美拉唑并未增加仙靈骨葆的肝毒性，因此推測(cè)兩藥合用導(dǎo)致的肝損傷可能主要是由仙靈骨葆導(dǎo)致。

綜上所述，給予仙靈骨葆27周可導(dǎo)致小鼠產(chǎn)生以肝臟炎細(xì)胞浸潤(rùn)為病理特征的肝損傷；合用奧美拉唑未增加其肝毒性；仙靈骨葆可誘導(dǎo)小鼠肝臟Cyp1a2 的mRNA表達(dá)增加。提示臨床長(zhǎng)期應(yīng)用仙靈骨葆時(shí)應(yīng)警惕肝損傷的發(fā)生，仙靈骨葆與經(jīng)CYP1A2酶代謝的藥物聯(lián)用時(shí)發(fā)生DDI的風(fēng)險(xiǎn)較大。