鄧麗花
(甘肅省武山縣農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢測(cè)站,甘肅 武山 741300)
農(nóng)藥在我國蔬菜生產(chǎn)中發(fā)揮著極其重要的作用,而這些物質(zhì)的不合理使用又會(huì)導(dǎo)致蔬菜及其制品中農(nóng)藥殘留量超標(biāo),進(jìn)而影響消費(fèi)者食用安全和進(jìn)出口貿(mào)易。有機(jī)磷農(nóng)藥作為一類高效、廣譜的殺蟲劑正被廣泛地用于農(nóng)業(yè)防害以及家庭、倉儲(chǔ)等的殺蟲,但大量使用后產(chǎn)生的環(huán)境危害也日益嚴(yán)重。農(nóng)藥的急性中毒,特別是果蔬食品污染后引發(fā)的群體中毒事件屢有發(fā)生。對(duì)蔬菜中農(nóng)藥的殘留量進(jìn)行及時(shí)而準(zhǔn)確的分析、檢測(cè)是控制蔬菜中農(nóng)藥殘留量的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。因此建立果蔬有機(jī)磷殘留檢測(cè)技術(shù)是很有必要的。因此,要規(guī)范各大蔬菜基地、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)、超市蔬菜農(nóng)殘檢測(cè)方法,統(tǒng)一了檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn),而且推進(jìn)了農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管體系建設(shè),確保了食用農(nóng)產(chǎn)品的第一道安全屏障,防止了農(nóng)殘超標(biāo)蔬菜的生產(chǎn)和銷售,控制了殘留農(nóng)藥通過食物鏈的傳遞和濃縮,減少了對(duì)人體的危害和急性中毒事件的發(fā)生。食用蔬菜的污染因子主要是使用了有機(jī)磷類和氨基甲酸酯類農(nóng)藥,目前農(nóng)藥殘留速測(cè)的方法主要有生物測(cè)定法、酶學(xué)法和化學(xué)法,而其中酶學(xué)法和化學(xué)法都具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏和成本低等特點(diǎn)。
在一定條件下,有機(jī)磷類農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶正常功能有抑制作用,它會(huì)抑制人體中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酯酶的活性,造成神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)乙酰膽堿的積累,影響其正常傳導(dǎo),使人致死。其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。正常情況下,酶催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物(乙酰膽堿)水解,其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng),產(chǎn)生黃色物質(zhì),用分光光度計(jì)在412nm處測(cè)定吸光度隨時(shí)間的變化值,計(jì)算出抑制率,通過抑制率可以判斷出樣品中是否有高劑量有機(jī)磷類農(nóng)藥的存在。
一是提取液的配制。將一袋提取液粉劑倒入500ml的玻璃瓶?jī)?nèi)加入510ml蒸餾水搖勻溶解后備用??稍诔叵卤4妗6秋@色劑的配制。在小瓶?jī)?nèi)加入32ml提取液,搖勻后即可使用,避光冷藏保存。三是底物的配制。每瓶底物粉劑中加入3.1ml蒸餾水,搖勻后即可使用,配好的底物溶液需在0~4℃保存?zhèn)溆茫墒褂?天。四是乙酰膽堿酯酶的制備。每瓶酶液中加入3.1mL提取液,搖勻后即可使用。配好的酶液需在0~4℃保存?zhèn)溆茫墒褂?天。(乙酰膽堿酯酶、底物粉劑未配制時(shí),必須放置在冰箱0℃以下冷凍室保存,有效期為一年。)
儀器為浙江托普云農(nóng)科技有限公司生產(chǎn)的NY-16DY型農(nóng)藥殘留速測(cè)儀。開機(jī)后點(diǎn)擊登錄進(jìn)入檢測(cè)界面,點(diǎn)儀器預(yù)熱3min,再點(diǎn)空白對(duì)照后做對(duì)照測(cè)試,它有16個(gè)通道室,第一孔只能做對(duì)照測(cè)試,對(duì)照吸光度必須大于0.3。顯色時(shí)間19min,數(shù)據(jù)傳輸?shù)健按蛴C(jī)”,自檢則檢測(cè)各通道的光能量。進(jìn)行對(duì)照測(cè)試時(shí),試樣室第1通道放置對(duì)照試樣,第2-16通道可放置樣品試樣,試樣放入試樣室后,合上試樣室蓋,勾選對(duì)應(yīng)通道選框,儀器進(jìn)行測(cè)試。
2.4.1 對(duì)照液配制。用移液管提取2.5ml提取液至干凈試管中,用微量移液器提取0.1ml酶液和0.1ml顯色劑到試管內(nèi)?;靹蚝蠓胖?5min(若室溫達(dá)不到25℃以上,建議放在37℃恒溫水中15min)時(shí)間到達(dá)時(shí),馬上加入0.1ml底物混勻,立即倒入比色皿中放入儀器的比色池內(nèi),蓋好蓋板,執(zhí)行對(duì)照制作程序。對(duì)照值在30以上為有效值。
2.4.2 樣品檢液提取和配置。取表面干凈的蔬菜或瓜果,用天平準(zhǔn)確稱取2g,葉菜取葉片部分,瓜果取皮帶肉。蔥、蒜、蘿卜和一些葉綠素含量較高的蔬菜中,含有的植物次生物質(zhì)對(duì)酶的活性產(chǎn)生影響,容易產(chǎn)生假陽性。必須進(jìn)行處理,對(duì)于蔥,先去掉須根,再把其根部剪掉,用天平稱取重量,放入三角瓶中,吸取緩沖液的毫升數(shù)是其重量數(shù)的5倍,振蕩后過濾即為待測(cè)樣,蒜、蘿卜、葉綠素含量高的蔬菜,稱取整株的重量。其他樣品將葉片、瓜肉等剪成1cm見方大小置于小燒杯內(nèi),用移液器提取10ml提取液浸泡,在常溫下放置10分鐘,每3分鐘晃動(dòng)一下燒杯,使蔬菜中的農(nóng)藥能充分溶入液體內(nèi)。若用振蕩器,震蕩2分鐘。
將燒杯中的提取液倒入試管內(nèi),略沉淀后用移液管或移液槍吸取2.5ml移入另一試管內(nèi),即為檢液。
在檢液管內(nèi)加0.1ml酶液和0.1ml顯色劑混勻后放置15min(若室溫達(dá)不到25℃以上,建議放在37℃恒溫水浴中15min),當(dāng)15min后馬上加入0.1ml底物混勻,馬上倒入比色皿中放入比色池,蓋好蓋板,執(zhí)行樣品檢測(cè)程序。
若被測(cè)樣品的酶抑制率超過50%,則表明被測(cè)蔬菜中含有高劑量的有機(jī)磷農(nóng)藥,樣品為陽性結(jié)果。陽性結(jié)果的樣品需要重復(fù)檢驗(yàn)2次以上。