制備色譜技術(shù)原理及其在天然產(chǎn)物提取分離中的應(yīng)用

岳亞文 韓 偉

（華東理工大學(xué)中藥現(xiàn)代化工程中心，上海200237）

0 引言

制備色譜技術(shù)發(fā)展至今已有100多年歷史，其目的在于分離制備一種或者多種純組分[1]。從最早的常壓柱色譜技術(shù)、薄層色譜技術(shù)，到后來發(fā)展起來的加壓液相色譜技術(shù)、高速逆流色譜技術(shù)、模擬流動(dòng)床色譜技術(shù)等，制備色譜技術(shù)已經(jīng)成為現(xiàn)代科學(xué)研究和生產(chǎn)實(shí)踐中分離多組分化合物的一個(gè)重要技術(shù)手段，尤其在自然界中天然產(chǎn)物活性成分的提取和純化中起著重要作用。本文主要介紹幾種重要的制備色譜技術(shù)的原理及其在天然產(chǎn)物分離純化中的應(yīng)用情況。

1 制備色譜技術(shù)的原理

1.1 薄層色譜

薄層色譜技術(shù)屬于液相色譜技術(shù)的范疇，經(jīng)典的制備型薄層色譜設(shè)備簡單，投資較少，但處理量較小，通常用來分離毫克級(jí)的樣品，且被分離的化合物需要從薄層板上刮下，并將其從吸附劑中提取出來。

薄層色譜中常用的是硅膠吸附色譜，其次是氧化鋁吸附薄層色譜。

1.2 常壓柱色譜

常壓柱色譜應(yīng)用較為廣泛，技術(shù)也相對成熟，主要包括吸附柱色譜、分配柱色譜、離子交換色譜、凝膠色譜、親和色譜、干柱色譜等。其中，吸附柱色譜中的硅膠吸附柱色譜是目前應(yīng)用最為廣泛的一種常壓柱色譜。

吸附柱色譜的技術(shù)原理是不同化合物由于分子結(jié)構(gòu)不同，與吸附劑表面作用力的大小也不同，同一種沖洗溶劑對不同分子結(jié)構(gòu)的化合物溶解度不同，致使沖洗溶劑在沖洗時(shí)，不同化合物組分在色譜柱中的流動(dòng)速度不同，從而將復(fù)雜混合物分離。

1.3 加壓制備色譜

加壓制備色譜技術(shù)是一種使用較為廣泛的色譜分離純化技術(shù)，它是將分離填料填裝在色譜柱內(nèi)，用液體流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，利用藥物中不同活性成分與填料相互作用力的差異來分離混合物。一般將壓力0.2MPa左右的稱為快速色譜；壓力低于0.5MPa的稱為低壓制備色譜；壓力在0.5～2 MPa的稱為中壓制備色譜；壓力大于2 MPa的稱為高壓制備色譜，也叫高效液相色譜。制備型加壓液相色譜分離的關(guān)鍵部位是色譜柱，色譜柱的大小取決于待分離樣品量的多少。

快速色譜技術(shù)操作非常簡便，常用于簡單的物質(zhì)分離。它與柱色譜類似，但比柱色譜多了一個(gè)加壓裝置，可縮短分離操作時(shí)間，填料顆粒較大，因此分辨率較低。快速色譜中使用最廣泛的固定相是硅膠。

低壓液相色譜（LPLC）比快速色譜稍微復(fù)雜點(diǎn)，填料顆粒較小一些，分辨率也稍高。低壓制備色譜的加壓手段一般有空氣泵加壓、雙鏈球加壓、氮?dú)怃撈考訅?、蠕?dòng)泵加壓等。

中壓制備色譜（MPLC）可承載更大的樣品量，色譜柱也較長較大，需要的壓力比低壓液相色譜更大，同時(shí)它的分辨率也更高，分離時(shí)間更短。其工作原理是由恒流泵輸送移動(dòng)相，通過進(jìn)樣閥上樣，在色譜柱對樣品進(jìn)行分離后，利用檢測器檢測，計(jì)算機(jī)記錄、處理、打印數(shù)據(jù)，同時(shí)收集各個(gè)餾分。

高壓液相色譜（HPLC）一般色譜柱較短，內(nèi)徑較大，填料顆粒更細(xì)，具有高柱效、高流速、高分離速度的特點(diǎn)，可制備純化難分離的物質(zhì)，通常作為分離純化操作的最后一步。高效液相色譜的壓力較大，普通玻璃柱易破裂，一般選用不銹鋼材料做色譜柱[1-4]。

1.4 高速逆流色譜

高速逆流色譜（HSCCC）是逆流色譜中最具實(shí)用意義的一類，高速逆流色譜分離柱的固定相無載體，消除了載體對分離過程的影響，適合分離極性物質(zhì)和具有生物活性的物質(zhì)，且高速逆流色譜超載能力強(qiáng)，進(jìn)樣量大，尤其適用于制備性分離，同時(shí)具有高回收率。高速逆流色譜儀主要由恒流泵、進(jìn)樣閥、主機(jī)、檢測器、色譜工作站和餾分收集器組成。

高速逆流色譜工作時(shí)，需要不互溶的兩相液體，一種作為固定相，另一種作為流動(dòng)相。它是根據(jù)單向性流體動(dòng)力平衡原理分離不同物質(zhì)的，在主機(jī)的線圈一端注入固定相，進(jìn)樣后，恒流泵壓入流動(dòng)相載著樣品進(jìn)入線圈，線圈高速轉(zhuǎn)動(dòng)，兩相就有相對運(yùn)動(dòng)之勢，恒流泵的單向閥使得固定相無法逆向流出，流動(dòng)相卻不斷流入穿過固定相，樣品就會(huì)在兩相中無限次分配，最終由于樣品組分分配系數(shù)不同而被分離。高速逆流色譜儀轉(zhuǎn)速越快，固定相保留越多，分離效果就越好[5]。

1.5 模擬移動(dòng)床色譜

模擬移動(dòng)床色譜（SMB）技術(shù)首先應(yīng)用于石油化學(xué)工業(yè)。通常的色譜分離技術(shù)存在間歇性生產(chǎn)、操作費(fèi)用高等缺點(diǎn)，而模擬移動(dòng)床色譜技術(shù)具有操作連續(xù)化、流動(dòng)相耗量少等優(yōu)點(diǎn)，因此該技術(shù)逐漸受到重視。與普通色譜技術(shù)相比，模擬移動(dòng)床色譜技術(shù)具有操作自動(dòng)化、制備效率高、制備量大等優(yōu)點(diǎn)，常用來分離手性物質(zhì)，但其設(shè)備復(fù)雜，使用和維護(hù)困難，優(yōu)化提純的條件也較為復(fù)雜，所得到的產(chǎn)品液的濃度低于進(jìn)料液的濃度[6]，且模擬移動(dòng)床色譜儀是一種二元分離器，應(yīng)用范圍較窄。

模擬移動(dòng)床色譜儀的固定相不隨床層移動(dòng)，而是通過物料進(jìn)出口隨流動(dòng)相流動(dòng)方向移動(dòng)，實(shí)現(xiàn)固定相與流動(dòng)相的逆流。

根據(jù)液流流速和所起作用的不同，把整個(gè)床層分為4個(gè)區(qū)域，Ⅰ區(qū)：吸附劑的再生區(qū)，Ⅱ區(qū)：B的解吸和A的吸附，Ⅲ區(qū)：A的吸附和B的解吸，Ⅳ區(qū)：洗脫液的再生區(qū)[7]。

1.6 超臨界流體色譜

超臨界流體色譜（SFC）是對氣相色譜和高效液相色譜的補(bǔ)充，比高效液相色譜速度更快，溶劑更易除去，它以超臨界流體為流動(dòng)相，常用的超臨界流體有CO2，其臨界點(diǎn)性質(zhì)溫和，成本低，安全，且純度高[8]。

超臨界流體具有氣體黏度低、擴(kuò)散系數(shù)大和液體溶解能力強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。超臨界流體色譜技術(shù)的主要原理是根據(jù)待測物在固定相和流動(dòng)相兩相中的分配系數(shù)不同，繼而實(shí)現(xiàn)對待測物的先后洗脫[9]。

2 制備色譜技術(shù)在天然產(chǎn)物提取分離中的應(yīng)用

2.1 在黃酮類成分提取中的應(yīng)用

2.1.1 分離淡豆豉中的大豆異黃酮

大豆異黃酮是黃酮類化合物，與雌激素結(jié)構(gòu)相似，是由大豆成熟的種子和青蒿、桑葉等中藥發(fā)酵而成的制品淡豆豉的主要活性成分之一。

曲麗萍[10]等利用反相制備高效液相色譜技術(shù)（RP-HPLC），以乙腈-水-冰醋酸（35:65:1）為流動(dòng)相，流速為3.0 mL/min，進(jìn)樣量為750μL，從淡豆豉中分離得到大豆異黃酮、大豆黃素和染料木素純品，產(chǎn)物純度均達(dá)到99%以上。

2.1.2 分離高良姜黃酮中的高良姜素和山奈素

高良姜提取物提取自姜科山姜屬植物高良姜，其主要活性成分為黃酮類化合物，主要包括高良姜素和山奈素，它們具有抗腫瘤、抗病毒、鎮(zhèn)痛消炎等作用。

侯洪瑞[11]等采用大孔吸附樹脂和制備型高效液相色譜技術(shù)，從高良姜提取物中分離出高良姜素和山奈素，分離效果好，產(chǎn)品純度高。制備型高效液相色譜流動(dòng)相為甲醇-0.6%乙酸水溶液（58:42），流速為7 mL/min，最終分離出的高良姜素純度為99.55%，山奈素純度為99.7%。

2.1.3 分離竹葉黃酮中的異葒草苷和葒草苷

葒草苷和異葒草苷是竹葉黃酮中黃酮類化合物的兩種主要單體，具有抗氧化、抗炎等作用，其單體價(jià)格昂貴。

許將[12]等建立了用制備型高效液相色譜技術(shù)分離竹葉黃酮中葒草苷和異葒草苷的方法，色譜流動(dòng)相為甲醇-0.3%乙酸水溶液（32:68），流速為5 mL/min，所得異葒草苷純度可達(dá)99%以上，葒草苷純度在93%以上。

2.1.4 從甘草中提取黃酮類化合物

甘草是蝶形花亞科甘草屬植物甘草的根或根莖，具有清熱解毒等功能，黃酮類化合物是植物甘草的重要有效成分之一。

Yunpeng Fan[13]等使用離線制備型二維正相液相色譜/反相液相色譜技術(shù)，從甘草中分離純化黃酮類化合物，總共得到24種高純度（純度均在90%以上）黃酮類化合物。

王紹艷[14]等用模擬移動(dòng)床色譜技術(shù)對甘草黃酮中的甘草苷和甘草素進(jìn)行分離，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，乙醇-水（30:70）為流動(dòng)相，在萃余液出口得到甘草苷，在萃取液出口得到甘草素，濃縮、重結(jié)晶后兩種產(chǎn)品純度均達(dá)到96%。

2.1.5 從黃芪中分離黃酮苷

黃芪是豆科黃芪屬植物黃芪的根，黃芪中含有許多具有抗氧化作用的黃酮類化合物。

Weihua Xiao[15]等利用高速逆流色譜技術(shù)對黃芪中的黃酮苷進(jìn)行分離純化，得到毛蕊-7-0-β-D葡糖苷、芒柄花苷等5種高純度黃酮苷。

2.1.6 分離橘皮中的多甲基黃酮

橘皮中的黃酮類化合物具有抗癌、抗氧化等生理作用。

李成平[16]等利用高速逆流色譜技術(shù)，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水（1:0.8:1:1.2）為溶劑系統(tǒng)，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，從橘皮粗提物中分離出4種黃酮類化合物：5,6,7,8,3′,4′-六甲氧基黃酮、3,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黃酮、5,6,7,8,4′-五甲氧基黃酮、5-羥基-6,7,8,3′,4′-五甲氧基黃酮，其純度分別為98.9%、97.8%、99.2%、99.8%。

2.2 在苷類成分提取中的應(yīng)用

2.2.1 從玄參中分離哈帕苷和桃葉珊瑚苷

哈帕苷和桃葉珊瑚苷是玄參中的主要活性成分環(huán)烯醚萜苷類化合物的主要成分。

李靜[17]等從鮮玄參根提取物中制得哈帕苷和桃葉珊瑚苷的混合物，利用高效液相色譜技術(shù)，以甲醇-水（4:96）為流動(dòng)相，得到哈帕苷和桃葉珊瑚苷的單體，兩者純度均大于99%。

2.2.2 從朱砂根中分離朱砂根皂苷

朱砂根皂苷屬于三萜皂苷，是朱砂根中的活性成分之一，具有抗癌活性和抗HIV活性。

甄鏵[18]采用C18色譜柱分離朱砂根皂苷，并用反相高效液相色譜技術(shù)，色譜流動(dòng)相選擇了甲醇-水，經(jīng)過一次分離得到朱砂根皂苷單體，純度為96.4%。

2.2.3 從人參花蕾和三七葉苷中分離人參皂苷

人參皂苷屬于固醇類化合物。人參皂苷是人參花蕾中的主要活性成分，具有改善細(xì)胞代謝水平、增強(qiáng)機(jī)體功能的作用。人參花蕾中有兩種主要的人參皂苷：原人參二醇型皂苷和原人參三醇型皂苷。

王冠[19]等采用正相低壓制備色譜技術(shù)，以正丁醇-乙酸乙酯-水（4:1:5）為流動(dòng)相，流速為8 mL/min，將原人參二醇與原人參三醇分離，再采用制備型高效液相色譜技術(shù)純化人參皂苷Re，純度可高達(dá)98.5%。

三七是五加科植物三七的干燥根，具有鎮(zhèn)痛、止血、抗心血管疾病等作用，人參皂苷Rb3是三七葉中的人參皂苷之一，具有鎮(zhèn)靜催眠的作用。

韓金玉[20]等用大孔吸附樹脂精制三七葉苷提取物，再以正丁醇-乙酸乙酯-水（2:1:1）為流動(dòng)相，流速為40 mL/min，從三七葉苷精制物中分離出人參皂苷Rb3單體，純度在95%以上。

2.2.4 從甜菊糖中分離萊鮑迪苷A和甜葉菊苷

甜菊糖提取自菊科草本植物甜葉菊，由甜菊苷、萊鮑迪苷A等許多不同的成分組成，是一種天然的甜味劑。

張凌云[21]等采用中低壓制備色譜技術(shù)，從甜菊糖結(jié)晶母液中分離出萊鮑迪苷A，以乙腈-水（80:20）為流動(dòng)相，流速為4 mL/min，最終得到萊鮑迪苷A單體的純度為90.22%。

孫大慶[22]等以甜葉菊苷提取液為原料，利用模擬移動(dòng)床色譜技術(shù)分離甜葉菊苷，工藝參數(shù)為：切換時(shí)間12 min，進(jìn)樣質(zhì)量濃度40 mg/mL，進(jìn)料流速7.5 mL/min，此條件下得到的產(chǎn)品甜葉菊苷純度為80.69%，收率為93.48%。

2.2.5 純化何首烏活性成分二苯乙烯苷

二苯乙烯苷是何首烏的主要成分之一，是一種多羥基酚類化合物，具有心血管活性、免疫調(diào)節(jié)等作用，同時(shí)具有降血脂、抗衰老作用。

汪維云[23]等利用反相高壓液相制備色譜技術(shù)對何首烏提取液的精制液進(jìn)行分離，以甲醇-水（40:60）作為流動(dòng)相，分離出的二苯乙烯苷含量達(dá)到97%以上。

2.3 在酯類成分提取中的應(yīng)用

2.3.1 從當(dāng)歸揮發(fā)油中分離純化Z-藁本內(nèi)酯

Z-藁本內(nèi)酯是當(dāng)歸、川芎和藁本等藥材中的主要活性成分。

苗愛東[24]采用固相萃取預(yù)處理和高效液相色譜技術(shù)，以甲醇-水（70:30）為流動(dòng)相，流速為8 mL/min，從當(dāng)歸的揮發(fā)油中分離出Z-藁本內(nèi)酯，經(jīng)質(zhì)譜、核磁共振光譜、紅外光譜、紫外光譜共同檢測，確定其最高純度可達(dá)到99.6%。

2.3.2 分離獨(dú)活中的香豆素類成分

蛇床子素是中藥獨(dú)活中的主要活性成分香豆素類含量最多的一種，有抗腫瘤的作用。

黃秀珍[25]等利用高速逆流色譜技術(shù)從獨(dú)活提取物中分離制備高純度的蛇床子素，選用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水（1.5:2.5:2:1.5）為溶劑系統(tǒng)，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，流速為3 mL/min，得到的蛇床子素純度達(dá)到97.1%。

嚴(yán)志宏[26]等利用高速逆流色譜技術(shù)，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水（1.5:2.5:2:1.5）為溶劑體系，從裂葉獨(dú)活根中分離出二氫歐山芹醇乙酸酯、蛇床子素、二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯，純度均在96%以上。

2.3.3 兒茶素的純化

王智聰[27]等利用高壓制備液相色譜技術(shù)純化表沒食子兒茶素沒食子酸酯粗品中的沒食子兒茶素沒食子酸酯，純度可以達(dá)到99.51%。

林丹[28]等利用反相中壓制備液相色譜技術(shù)從茶多酚中分離出沒食子兒茶素、表沒食子兒茶素沒食子酸酯、表兒茶素、表兒茶素沒食子酸酯4種單體，純度分別為91.8%、97.6%、97.7%、99.3%。

2.4 在蒽醌類成分提取中的應(yīng)用

2.4.1 在茜草中分離茜草蒽醌

茜草蒽醌是植物茜草的主要有效成分之一，具有抗腫瘤活性作用。

林順權(quán)[29]等以茜草為原料，采用中低壓制備色譜技術(shù)純化茜草中的茜草蒽醌單體，一共得到4種單體，經(jīng)鑒定分別為：大葉茜草素、1,3,6-三羥基-2-甲基蒽醌、1,3,6-三羥基-2-甲基蒽醌-3-O-（3′,6′-O-二乙?；?α-鼠李糖（1→2）-β-D葡萄糖苷和1,3,6-三羥基-2-甲基蒽醌-3-O-新橙皮糖苷，純度分別為99.87%、99.56%、99.42%、98.21%。

2.4.2 分離大黃中的大黃酚和大黃素甲醚

大黃酚和大黃素甲醚是蒽醌類化合物，是廖科植物大黃的兩種有效成分，大黃酚有抗菌、止血、降血糖等作用，大黃素甲醚有抑菌作用。

田嘉銘[30]等利用制備型高效液相色譜技術(shù)純化大黃提取物中的大黃酚、大黃素甲醚，以甲醇-0.1%磷酸溶液（85:15）為流動(dòng)相，流速為20 mL/min，得到產(chǎn)物大黃酚純度為98.8%，大黃素甲醚純度為98.7%。

2.5 在生物堿類成分提取中的應(yīng)用

2.5.1 從巖黃連中分離巖黃連堿

巖黃連是罌粟科紫堇屬植物石生黃堇的全草，其有效成分是總生物堿，巖黃連堿是巖黃連總生物堿中的一種，有殺菌、止痛等作用。

蔣偉哲[31]等采用制備色譜技術(shù)從巖黃連提取液粗品中分離出巖黃連堿單體，產(chǎn)品質(zhì)量分?jǐn)?shù)在99%以上。

2.5.2 從吳茱萸中分離生物堿

吳茱萸是蕓香科吳茱萸屬植物，有止痛、抑菌等效果。

Renmin Liu[32]等用高速逆流色譜技術(shù)從吳茱萸中分離出5種生物堿：吳茱萸堿、蕓香萜、吳茱萸新堿、1-甲基-2-[（6Z,9Z）]-6,9-十五碳二烯基-4-（1H）-喹諾酮、1-甲基-2-十二烷基-4-（1H）-喹諾酮，純度分別為98.7%、98.4%、96.9%、98.0%、97.2%。

2.5.3 從辣椒中分離辣椒堿單體

辣椒是一年生草本茄科植物，其中辣椒堿類化合物有辛辣味。研究表明辣椒堿具有鎮(zhèn)痛、殺菌、消炎的作用。

艾秀珍[33]等利用反相制備液相色譜技術(shù)從辣椒堿類化合物（其中辣椒堿含量60.46%、二氫辣椒堿含量33.35%、降二氫辣椒堿含量4.1%）中分離得到辣椒堿單體，以甲醇-水（75:25）為流動(dòng)相，流速為4.0mL/min，得到的辣椒堿單體純度為95.23%，回收率為93.27%。

2.5.4 在益母草中分離益母草堿

益母草堿是唇形科益母草屬植物益母草的生物堿類有效成分，益母草堿具有抗心血管疾病等的作用。

江敏紅[34]等利用高速逆流色譜技術(shù)，以乙酸乙酯-正丁醇-水（3:2:5）為溶劑體系，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，流速為2.2 mL/min，從益母草粗提物中分離益母草堿，純度達(dá)到96.2%。

2.5.5 從馬比木中分離喜樹堿

喜樹堿是植物喜樹、馬比木的一類活性物質(zhì)，具有抗腫瘤的生理活性作用。

羅婭君[35]等利用高速逆流色譜技術(shù)，從馬比木粗提物中分離制備出3種喜樹堿類化合物，分別為10-羥基脫氧喜樹堿、10-甲氧基喜樹堿、喜樹堿，純度分別為98.3%、99.3%、99.0%。

2.6 在萜類產(chǎn)物提取中的應(yīng)用

2.6.1 從冬凌草中分離冬凌草甲素

冬凌草甲素是唇形科植物碎米椏的主要活性成分，具有清熱、消炎等功效，有較強(qiáng)的抗腫瘤活性作用。冬凌草是一種對映貝殼杉烯二萜類化合物。

趙新燕[36]等采用反相制備色譜技術(shù)，從冬凌草粗品中分離純化冬凌草甲素，以甲醇-水（55:45）為流動(dòng)相，流速為35 mL/min，最終得到的產(chǎn)品冬凌草甲素的純度可達(dá)99%。

2.6.2 純化銀杏葉中的白果內(nèi)酯和銀杏內(nèi)酯A、B、C

銀杏內(nèi)酯為銀杏葉提取物中主要的藥效成分之一，屬于萜類化合物，主要包括銀杏內(nèi)酯A、B、C和白果內(nèi)酯。

蘇靜[37]等將萃取吸附純化的銀杏提取物經(jīng)兩次高速逆流色譜分離，得到4種內(nèi)脂單體：白果內(nèi)酯和銀杏內(nèi)酯A、B、C，純度分別為98.3%、98.9%、98.8%、98.4%。

2.6.3 分離杭白菊中的小白菊內(nèi)酯

小白菊內(nèi)酯是一種倍半萜烯內(nèi)酯化合物，具有抗氧化、抗炎等多種藥理作用。

孫兆林[38]等利用高速逆流色譜技術(shù)，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水（5:5:6:4）為溶劑系統(tǒng)，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，流速為2.0 mL/min，從杭白菊超聲提取物中分離杭白菊內(nèi)酯，純度在92.8%左右。

2.6.4 從油橄欖葉中分離橄欖苦苷

橄欖苦苷是木犀科木犀屬喬木油橄欖中的一類裂環(huán)烯醚萜類化合物，具有抗菌、抗炎、抗氧化等作用。

王玉[39]等利用高速逆流色譜技術(shù)，以正丁醇-乙酸乙酯-甲醇-水-氯仿（1:19:1:19:0.4）為溶劑體系，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，從油橄欖葉中成功分離得到橄欖苦苷，純度在90%以上。

夏雅俊[40]等利用反相中壓制備液相色譜技術(shù)，從油橄欖葉中分離出5種多酚類化合物：脫咖啡?；锾擒?、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、6″-O-β-D-吡喃葡萄糖-橄欖苦苷、裂環(huán)馬錢子苷、橄欖苦苷，純度均在90%以上。

2.7 在有機(jī)酸類成分提取中的應(yīng)用

2.7.1 在金銀花中提取新綠原酸

新綠原酸是忍冬科植物忍冬的花蕾金銀花的有效成分之一，具有抗菌解熱、抗血栓、抗氧化、抗炎等藥理作用。

倪付勇[41]等利用中低壓制備色譜技術(shù)從金銀花提取液中分離純化出新綠原酸單體，以乙腈-0.5%甲酸溶液（10:90）為流動(dòng)相，流速為20 mL/min，分離制備的新綠原酸純度達(dá)98.86%。

2.7.2 在杜仲和車前子中分離京尼平苷酸

京尼平苷酸是杜仲科杜仲屬植物杜仲、車前科植物車前、茜草科植物龍船花的活性成分之一。

鄒登峰[42]等利用快速制備液相色譜技術(shù)，從杜仲皮和車前子的純化提取液中分離出京尼平苷酸，以甲醇-水-乙酸（40:60:0.5）為流動(dòng)相，流速為2.5 mL/min，分離出的京尼平苷酸單體純度可以達(dá)到98.69%。

2.8 在其他類產(chǎn)物提取中的應(yīng)用

2.8.1 生物制品的分離

郭子媛[43]等以對氯苯基氨基甲酸酯化β-環(huán)糊鍵合氨化硅膠作為手性固定相，用半制備高效液相色譜技術(shù)成功拆分了含手性半胱氨酸的三螯合型釕苯配合物的非對映異構(gòu)體，得到了對應(yīng)度較高的兩對非對映異構(gòu)體。

康麗梅[44]等采用超大孔離子交換制備色譜技術(shù)，從人血漿中分離高活性凝血因子Ⅷ（FⅧ），其回收率為85%。

陳婷[45]等采用兩步連續(xù)離子交換制備色譜技術(shù)，分離出幾種不同的聚乙二醇與重組人粒細(xì)胞集落刺激因子（rhG-CSF）偶聯(lián)物。

2.8.2 在云杉中制備分離酚類化合物

Rune Slimestad[46]等提出用高速逆流色譜技術(shù)從挪威云杉中分離酚類化合物。

2.8.3 在蛹蟲草中制備蟲草素

蟲草素是一種核苷類天然產(chǎn)物，是麥角菌科蟲草屬植物蛹蟲草的主要活性成分之一。

胡瑕[47]等利用高速逆流色譜技術(shù)，以蛹蟲草發(fā)酵液蟲草素粗提取物為原料分離蟲草素，以乙酸乙酯-正丁醇-0.5%氨水（2:3:5）為溶劑體系，上相作為固定相，下相作為流動(dòng)相，最終分離的蟲草素純度為98.7%。

2.8.4 從牛膽汁中分離牛黃膽酸鈉

牛磺膽酸鈉是牛膽汁中的一種活性成分，具有鎮(zhèn)咳、祛痰等藥理作用。

楊洋[48]等利用制備型高效液相色譜技術(shù)，從牛膽汁中分離?；悄懰徕c，以甲醇-0.4%磷酸二氫鈉水溶液（55:45）為流動(dòng)相，得到牛磺膽酸鈉純度為98.1%。

2.8.5 對映異構(gòu)體的拆分

陳韜[49]等以EnantioPakOD填料為手性固定相、正己烷-乙醇（70:30）為流動(dòng)相，在四區(qū)模擬移動(dòng)床上拆分甲霜靈外消旋體，得到S-（+）-甲霜靈和R-（-）-甲霜靈的光學(xué)純度都大于99%。

3 結(jié)語

從動(dòng)植物等天然的資源中提取具有藥效的活性成分研究，開發(fā)出新的藥品是現(xiàn)代藥物研發(fā)的一個(gè)重要方向。天然產(chǎn)物具有品種繁多、結(jié)構(gòu)復(fù)雜、含量低等特點(diǎn)，經(jīng)過一代代的發(fā)展，制備色譜技術(shù)作為一種有效的分離手段在天然產(chǎn)物分離提純中得到了廣泛應(yīng)用。其中，經(jīng)典的柱色譜技術(shù)有處理量大、耗時(shí)長的特點(diǎn)，薄層色譜技術(shù)有制備簡單、處理量小的特點(diǎn)，加壓液相色譜技術(shù)具有分辨率高但設(shè)備復(fù)雜的特點(diǎn)，模擬流動(dòng)床色譜技術(shù)能進(jìn)行連續(xù)大量的分離處理，高速逆流色譜技術(shù)具有高回收率、高產(chǎn)量等優(yōu)點(diǎn)?？傊?，研究者們可以根據(jù)需要選擇不同類型的制備色譜技術(shù)或者將色譜技術(shù)與其他分離技術(shù)進(jìn)行組合運(yùn)用，以實(shí)現(xiàn)天然產(chǎn)物活性成分的高效制備與高效分離。