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    乳及乳制品中卡那霉素殘留快速檢測產(chǎn)品應(yīng)用

    2018-02-11 07:53:41李研東熊雅婷李云
    食品安全導(dǎo)刊 2018年2期
    關(guān)鍵詞:金標(biāo)卡那霉素膠體金

    李研東+熊雅婷+李云

    1 卡那霉素的檢測現(xiàn)狀

    卡那霉素(Kanamycin)是一種氨基糖苷類抗生素,具有很強(qiáng)的抑菌作用,因價格低廉且抗菌性廣,而作為獸藥被廣泛使用。然而,在動物實(shí)際養(yǎng)殖過程中,濫用卡那霉素的現(xiàn)象屢見不鮮,造成其在動物源性食品中存在殘留,尤其是在乳品中的殘留現(xiàn)象更為嚴(yán)重。過量的卡那霉素可給人體帶來嚴(yán)重的副作用,主要包括腎毒性、造血系統(tǒng)毒性、過敏性等。另外,卡那霉素對嬰幼兒有很強(qiáng)的耳毒性,會導(dǎo)致嬰幼兒耳蝸細(xì)胞凋亡,嚴(yán)重者會造成聽力喪失。因此,嚴(yán)格控制卡那霉素在乳品中的殘留對保障乳品安全,維護(hù)消費(fèi)者健康意義重大。

    由于我國農(nóng)業(yè)部發(fā)布的《動物性食品中獸藥最高殘留限量》(農(nóng)業(yè)部公告第235號)發(fā)布時間較早,所以公告中并未規(guī)定卡那霉素的限量要求。參照歐盟獸藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn),卡那霉素在乳品中的最高殘留限量為150μg/kg,因此可預(yù)測我國的獸藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)修訂會參考?xì)W盟的限量標(biāo)準(zhǔn)對卡那霉素限量進(jìn)行嚴(yán)格把控。目前,檢測卡那霉素藥物殘留最普遍的方法為實(shí)驗(yàn)室檢測方法,即儀器方法,如高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜法(GC)、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS)等。雖然此類檢測方法靈敏度高,但操作復(fù)雜,耗時較長,價格昂貴,因此也限制了其在現(xiàn)場實(shí)際的應(yīng)用,故建立一種快速、靈敏、便捷的食品中卡那霉素的檢測方法對于保障食品安全很有必要。

    北京維德維康生物技術(shù)有限公司(以下簡稱“維德維康”)基于前期深厚的研發(fā)基礎(chǔ),研制出一系列卡那霉素快速檢測產(chǎn)品,包括卡那霉素酶聯(lián)免疫試劑盒、卡那霉素膠體金快速檢測試紙條等產(chǎn)品,可實(shí)現(xiàn)生鮮乳、原奶、奶粉、成品奶等多種質(zhì)地乳品產(chǎn)品的快速定量、定性檢測,覆蓋乳品生產(chǎn)加工全產(chǎn)業(yè)鏈,可滿足多層次用戶的檢測需求。其中膠體金快速檢測試紙條操作簡單、檢測速度快,5min即可判讀檢測結(jié)果;酶聯(lián)免疫試劑盒反應(yīng)靈敏,檢測限低至0.3μg/kg,達(dá)到行業(yè)領(lǐng)先技術(shù)水平。

    2 卡那霉素酶聯(lián)免疫檢測體系

    2.1 卡那霉素酶聯(lián)免疫試劑盒檢測原理

    酶聯(lián)免疫吸附測定法是將已知抗原或抗體吸附在固相載體(聚苯乙烯微量反應(yīng)板)表面,使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行,用洗滌法將液相中的游離成分洗除,加入底物顯色,顯色反應(yīng)可通過ELISA檢測儀進(jìn)行定量測定,這樣就可將酶化學(xué)反應(yīng)的敏感性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來,使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測方法。

    維德維康基于酶聯(lián)免疫吸附測定法的原理,研制了卡那霉素酶聯(lián)免疫試劑盒,用于快速檢測乳品中卡那霉素藥物殘留。檢測樣品中的卡那霉素與酶標(biāo)板上固定的抗原特異性競爭抗體,加入酶標(biāo)記物,催化底物顯色,根據(jù)顯色的深淺來判斷樣品中卡那霉素的含量:顯色深,含量少;顯色淺,含量多。

    2.2 卡那霉素酶聯(lián)免疫檢測體系的組成

    卡那霉素酶聯(lián)免疫檢測體系由卡那霉素酶聯(lián)免疫試劑盒和酶標(biāo)儀兩部分組成,酶聯(lián)免疫試劑盒具有配套的96孔酶標(biāo)板,板內(nèi)包被維德維康自主研發(fā)的卡那霉素抗原物質(zhì),可與卡那霉素抗體特異性結(jié)合,敏感性強(qiáng);試劑盒內(nèi)配有酶標(biāo)記物工作液,通過催化作用使底物顯色,根據(jù)顯色深淺可進(jìn)行定量檢測。酶標(biāo)儀中內(nèi)置標(biāo)準(zhǔn)曲線,可讀取定量檢測結(jié)果。

    2.3 卡那霉素酶聯(lián)免疫檢測體系的優(yōu)點(diǎn)

    2.3.1 樣本前處理簡單快速:稱取1g乳制品樣本于離心管中;加入1mL 1%的三氯乙酸,震蕩離心5min;取50μL中間層清液于2mL離心管中;加入950μL樣品稀釋液,充分混勻;待測。

    2.3.2 “一步法”檢測步驟:將板條插入酶標(biāo)板架上,依次加入50μL樣品溶液、酶標(biāo)記物工作液和抗體工作液;避光反應(yīng)30min;充分洗滌,立即加入100μL底物溶液,避光反應(yīng)15min;終止反應(yīng),用酶標(biāo)儀在雙波長450nm、630nm下讀取酶標(biāo)板吸光度值,即可得出定量檢測結(jié)果。

    2.3.3 檢測結(jié)果準(zhǔn)確:隨機(jī)選取3批卡那霉素酶聯(lián)免疫試劑盒進(jìn)行驗(yàn)證,結(jié)果證實(shí),試劑盒在生鮮乳、原奶、奶粉、成品奶等多種類型樣本中的檢測限均可達(dá)到10μg/kg,添加回收率為70%~118%,批內(nèi)批間變異系數(shù)均不超過10%。以《GB/T 22969-2008奶粉和牛奶中鏈霉素、雙氫鏈霉素和卡那霉素殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》中的液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法的檢測結(jié)果作為認(rèn)定值,與卡那霉素酶聯(lián)免疫試劑盒檢測結(jié)果相比較,結(jié)果顯示,兩種方法的符合率達(dá)到99.5%以上,符合國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的檢測范圍。

    3 卡那霉素膠體金免疫層析

    快速檢測體系

    3.1 卡那霉素膠體金免疫層析快速檢測體系原理

    利用間接競爭原理,待測物和T線標(biāo)記的抗原共同競爭金標(biāo)抗體,根據(jù)膠體金試紙T線的顯色情況,來定性判斷待測樣品中是否含有目標(biāo)化合物。檢測試紙條含有被事先固定于硝酸纖維素膜上的測試區(qū)(T)的抗原和控制區(qū)(C)的Ⅱ抗。微孔中的金標(biāo)抗體經(jīng)奶樣溶解后,50℃孵育3min,將試紙條插入金標(biāo)微孔中反應(yīng)5min,根據(jù)T區(qū)、C區(qū)的顏色深淺對比判讀結(jié)果。

    3.2 卡那霉素膠體金免疫層析快速檢測體系的組成

    卡那霉素膠體金免疫層析快速檢測體系由卡那霉素試紙條、金標(biāo)微孔和孵育器3部分組成,試紙條上具有檢測線(T線)和質(zhì)控線(C線),分別固定有抗原和Ⅱ抗,能夠特異性結(jié)合金標(biāo)抗體,靈敏度高;金標(biāo)微孔內(nèi)裝有膠體金標(biāo)記的抗體;孵育器為保溫裝置,可促進(jìn)樣本溶液流動并控制合適的反應(yīng)溫度。各部分組成如圖1所示。

    3.3 卡那霉素膠體金免疫層析快速檢測體系的優(yōu)點(diǎn)

    3.3.1 前處理簡單:膠體金免疫層析體系無需復(fù)雜的前處理,對于生鮮乳、原奶、成品奶等液態(tài)產(chǎn)品,只需充分搖勻即可檢測;對于奶粉等樣本,用去離子水溶解后也可直接檢測。

    3.3.2 操作簡單:檢測時,吸取200μL奶樣于金標(biāo)微孔中,小心吹打至紫紅色顆粒溶解,置于50℃孵育器內(nèi)孵育3min,將試紙條插入金標(biāo)微孔中,反應(yīng)5min,取出試紙條即可判定檢測結(jié)果。全程檢測在10min內(nèi)完成,反應(yīng)時間快;無需額外有機(jī)化學(xué)試劑,綠色環(huán)保無污染;操作簡單,無需專業(yè)培訓(xùn),適合基層檢測單位、質(zhì)監(jiān)部門現(xiàn)場快速監(jiān)測及企業(yè)常規(guī)質(zhì)檢。

    3.3.3 判讀精確:對于原奶和奶粉樣本,卡那霉素快速檢測試紙條檢測限可達(dá)到3μg/kg,與目前歐盟獸藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)制定的限量值(150μg/kg)相比,靈敏度更高。同時,經(jīng)大量實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,該產(chǎn)品的假陽性率可控制在3%以內(nèi),假陰性率低于1%;能夠?qū)崿F(xiàn)準(zhǔn)確判讀。

    3.3.4 包裝小巧,便于攜帶:試紙條采用封閉包裝,可有效避免環(huán)境中污染物質(zhì)污染試紙條,影響檢測結(jié)果。試紙條保存溫度在20±5℃之間,即開即用,且有效期為12個月,適用于車間、市場、養(yǎng)殖場等多種檢測環(huán)境,能夠滿足一線檢測的需求。

    4 結(jié)論

    卡那霉素快速檢測系統(tǒng),包括卡那霉素酶聯(lián)免疫試劑盒、卡那霉素膠體金快速檢測試紙條等產(chǎn)品均具有檢測準(zhǔn)確度高、操作簡單、便于攜帶的優(yōu)勢,能夠?qū)崿F(xiàn)生鮮乳、原奶、奶粉等多種乳及乳制品中卡那霉素殘留的快速檢測,填補(bǔ)了國內(nèi)卡那霉素快速檢測的空白,防止卡那霉素殘留超標(biāo)產(chǎn)品上市對消費(fèi)者造成危害。同時,卡那霉素快速檢測系統(tǒng)的使用和推廣將有效提升各應(yīng)用地區(qū)的乳品檢測技術(shù)手水平,切實(shí)解決一線檢測單位及生產(chǎn)企業(yè)經(jīng)費(fèi)不足、專業(yè)性差的問題,滿足各級質(zhì)檢單位、乳品生產(chǎn)加工企業(yè)的檢測需求,促進(jìn)乳品產(chǎn)業(yè)鏈向著健康安全的方向發(fā)展。endprint

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