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    多管發(fā)酵法與紙片法檢測(cè)水中糞大腸菌群的比較

    2018-02-05 07:25:53楊璐朱雨欣
    科技視界 2017年34期

    楊璐 朱雨欣

    【摘 要】本文采用多管發(fā)酵法和紙片法同步檢測(cè)了太湖水的糞大腸菌群,并對(duì)兩種方法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了比較分析,結(jié)果表明,兩者結(jié)果并無(wú)顯著性差異,且多管發(fā)酵法,操作步驟繁雜、干擾因素多,檢測(cè)周期長(zhǎng),不適合大批量樣品的分析;紙片法操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)時(shí)間短,適合大批量水樣的分析。

    【關(guān)鍵詞】糞大腸菌群;多管發(fā)酵法;紙片法;無(wú)顯著性差異

    水是微生物廣泛分布的天然環(huán)境,水的細(xì)菌學(xué)測(cè)定特別是腸道菌的檢驗(yàn),是研究水體污染和環(huán)境衛(wèi)生的重要指標(biāo)。糞大腸菌群是總大腸菌群的一部分,主要來(lái)自糞便,被糞便污染的水源水如溪水也可能被腸道病原菌污染,從而引起腸道傳染病甚至流行病,因此快速、方便、精準(zhǔn)的糞大腸菌群檢測(cè)方法對(duì)于判斷水體糞大腸菌群的污染狀況和對(duì)于有效預(yù)防、控制流行病有很深遠(yuǎn)的意義。

    目前糞大腸菌的測(cè)定方法有多管發(fā)酵法、濾膜法、延遲培養(yǎng)法、紙片法等。多管發(fā)酵法、濾膜法是傳統(tǒng)檢測(cè)方法,干擾多、專一性差、操作繁瑣費(fèi)時(shí),需要確認(rèn)實(shí)驗(yàn),因此檢測(cè)周期較長(zhǎng),需48~72h,不適合大量樣品的分析。在常規(guī)檢驗(yàn)步驟不能實(shí)現(xiàn)時(shí),可以用延遲培養(yǎng)法。紙片法依據(jù)環(huán)保部標(biāo)準(zhǔn)HJ 755-2015《水質(zhì) 總大腸菌群和糞大腸菌群的測(cè)定 紙片快速法》,在水質(zhì)監(jiān)測(cè)工作中,紙片法由于其方便高效,應(yīng)用逐年增多。本文采用多管發(fā)酵法和紙片法同步檢測(cè)了太湖水的糞大腸菌群,并對(duì)兩種方法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了比較分析。

    1 糞大腸菌群的實(shí)驗(yàn)方法

    1.1 多管發(fā)酵法

    多管發(fā)酵法是根據(jù)大腸菌群在一定溫度下能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣并能使乳糖蛋白胨培養(yǎng)液變黃且產(chǎn)生氣泡的原理,將水樣按三個(gè)10倍遞減的濃度接種到有乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的發(fā)酵管中進(jìn)行初發(fā)酵試驗(yàn),在37℃±0.5℃下培養(yǎng)24±2h,再將產(chǎn)酸產(chǎn)氣的陽(yáng)性發(fā)酵管中輕微振蕩,用接種環(huán)或滅菌棒轉(zhuǎn)到EC培養(yǎng)液中進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn),在44.5℃±0.5℃下培養(yǎng)24±2h,發(fā)酵管產(chǎn)氣說(shuō)明糞大腸菌群陽(yáng)性。

    1.2 紙片法

    每個(gè)水樣按三個(gè)10倍遞減的是濃度接種,每個(gè)濃度梯度分別接種5張紙片。每張大紙片接種10mL水樣,每張小紙片接種1mL水樣,再是1︰10稀釋的水樣接種到5張小紙片中,每張接種1mL,濃度高時(shí)可適當(dāng)稀釋。接種水樣時(shí)要均勻涂抹于紙片上,用手輕輕壓平,做好標(biāo)記,于44.5℃±1℃下培養(yǎng)18~24h。觀察結(jié)果,若紙片上出現(xiàn)紅斑或紅暈且周圍變黃為陽(yáng)性或紙片全部變黃無(wú)紅斑或紅暈也為陽(yáng)性。紙片無(wú)變化,紙片部分變黃無(wú)紅斑或紅暈,紙片不變黃有紅斑或紅暈均為陰性結(jié)果。

    1.3 計(jì)算

    兩種方法均根據(jù)不同接種量所出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果的數(shù)目,從MPN表中查得相應(yīng)的MPN指數(shù),再經(jīng)下面的公式換算成每100mL的MPN值。

    MPN值=MPN指數(shù)×10(ml)/接種量最大的一管(ml)

    MPN值再乘10,即為1L水樣中的糞大腸菌群數(shù)。

    2 實(shí)際水樣檢測(cè)結(jié)果

    用紙片法和多管發(fā)酵法對(duì)8個(gè)實(shí)際水樣中的糞大腸菌群作比對(duì)檢測(cè),結(jié)果見(jiàn)表1。

    對(duì)兩種方法的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行秩和檢驗(yàn),結(jié)果為t=7,P>0.10,表明紙片法與多管發(fā)酵法檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著性差異。

    3 檢測(cè)方法的比較

    在糞大腸菌群檢測(cè)方法中多管發(fā)酵法是傳統(tǒng)的檢測(cè)方法,干擾多、專一性差、操作繁瑣費(fèi)時(shí),需要確認(rèn)實(shí)驗(yàn),不適于大量樣品的分析。但傳統(tǒng)方法均有原理簡(jiǎn)單、費(fèi)用較低、利于推廣的優(yōu)點(diǎn),因此仍是常規(guī)監(jiān)測(cè)中的主要檢測(cè)方法。

    紙片法與多管發(fā)酵法相比,紙片法只需在44.5℃下培養(yǎng)18~24h就可出結(jié)果,紙片法快速省時(shí)簡(jiǎn)單方便,適合大批量監(jiān)測(cè)和應(yīng)急監(jiān)測(cè)。兩者比較見(jiàn)表2。

    4 結(jié)論

    實(shí)際水樣檢測(cè)結(jié)果證明,紙片法與多管發(fā)酵法檢測(cè)結(jié)果之間無(wú)顯著性差異。但是紙片法的檢測(cè)結(jié)果普遍略低于經(jīng)典的多管發(fā)酵法,這可能是因?yàn)榧埰ㄊ菍⒔臃N后的樣品直接放于44.5℃環(huán)境中培養(yǎng),而多管發(fā)酵法是將接種后的樣品先置于37℃環(huán)境中進(jìn)行初發(fā)酵試驗(yàn),再置于44.5℃環(huán)境中復(fù)發(fā)酵試驗(yàn),比前者多一個(gè)富集過(guò)程。

    紙片法具有快速簡(jiǎn)單方便等優(yōu)點(diǎn),可以較準(zhǔn)確地判斷水樣微生物污染情況,可以作為環(huán)境分析方法中糞大腸菌群的快速篩查方法。因此在工作量大且需要快速判定時(shí),可采用紙片法替代多管發(fā)酵法。

    【參考文獻(xiàn)】

    [1]《水質(zhì)總大腸菌群和糞大腸菌群的測(cè)定紙片快速法HJ 755-2015》環(huán)境保護(hù)部,2015.

    [2]《水質(zhì)糞大腸菌群的測(cè)定多管發(fā)酵法和濾膜法HJ/T 347-2007》環(huán)境保護(hù)部,2007.endprint

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