探究異基因造血干細(xì)胞移植術(shù)后巨細(xì)胞病毒感染及慢性移植物抗宿主病的關(guān)系

張建平+李楠楠+范立軍+高新霞+尹東旭

【摘要】 目的 分析白血病患者行異基因造血干細(xì)胞移植術(shù)后出現(xiàn)巨細(xì)胞病毒感染和慢性移植物抗宿主病間的臨床關(guān)系。方法 92例行異基因造血干細(xì)胞移植的患者作為研究對(duì)象， 于術(shù)后的100 d～1年通過微粒子酶免分析法、巨細(xì)胞病毒 pp65抗原檢測(cè)依次對(duì)巨細(xì)胞病毒感染情況進(jìn)行1次/月的檢測(cè)。對(duì)于慢性移植物抗宿主病患者同時(shí)予以酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）對(duì)白細(xì)胞介素-2（IL-2）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平進(jìn)行檢測(cè)。比較術(shù)前與術(shù)后100 d～1年巨細(xì)胞病毒活動(dòng)性感染率的差異;對(duì)巨細(xì)胞病毒感染靜止期與活動(dòng)期的局限性與廣泛性慢性移植物抗宿主病患者IL-2、TNF-α水平加以觀察比較。結(jié)果 依據(jù)巨細(xì)胞病毒陽(yáng)性細(xì)胞等檢測(cè)結(jié)果知曉， 術(shù)后100 d～1年， 異基因造血干細(xì)胞移植的巨細(xì)胞病毒活動(dòng)性感染率為32.61%（30/92）， 明顯高于術(shù)前的16.30%（15/92）， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.6187， P=0.0101<0.05）。30例慢性移植物抗宿主病患者巨細(xì)胞病毒感染活動(dòng)期， 局限性與廣泛性慢性移植物抗宿主病患者分別為10、20例;巨細(xì)胞病毒感染靜止期， 局限性與廣泛性慢性移植物抗宿主病患者分別為22、8例。巨細(xì)胞病毒感染活動(dòng)期， 廣泛性慢性移植物抗宿主病患者外周血IL-2、TNF-α水平明顯高于局限性慢性移植物抗宿主病患者， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;廣泛性慢性移植物抗宿主病患者， 巨細(xì)胞病毒感染活動(dòng)期外周血IL-2、TNF-α水平明顯高于巨細(xì)胞病毒感染靜止期， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 行異基因造血干細(xì)胞移植術(shù)后， 巨細(xì)胞病毒活動(dòng)性感染能夠經(jīng)提高外周血之中的IL-2、TNF-α水平進(jìn)而將慢性移植物抗宿主病產(chǎn)生及嚴(yán)重程度增加。

【關(guān)鍵詞】 異基因造血干細(xì)胞移植術(shù);巨細(xì)胞病毒感染;慢性移植物抗宿主病

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2018.03.020

異基因造血干細(xì)胞移植屬于當(dāng)前白血病臨床患者實(shí)現(xiàn)治愈的最為有希望一種治療措施， 而慢性移植物抗宿主病與巨細(xì)胞病毒感染均是在異基因造血干細(xì)胞移植后期出現(xiàn)的重大并發(fā)癥。經(jīng)基礎(chǔ)性研究報(bào)道[1]， 其間存在顯著的密切關(guān)系， 也屬于因果關(guān)系。對(duì)其關(guān)系展開深入研究有利于增高移植手術(shù)的成功率， 本院選取自2015年4月～2016年4月行干細(xì)胞移植的92例患者作為研究對(duì)象， 詳細(xì)的研究?jī)?nèi)容總結(jié)如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取本院自2015年4月～2016年4月行異基因造血干細(xì)胞移植的92例患者進(jìn)行研究， 所有患者都屬于首次實(shí)施異基因造血干細(xì)胞移植治療， 經(jīng)診斷和《血液病診斷療效與標(biāo)準(zhǔn)》相符， 均已經(jīng)通過免疫學(xué)、細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)確診?；颊咧信?5例， 男57例， 年齡12～52歲， 平均年齡（37.3±5.7）歲。

1. 2 方法 對(duì)92例移植患者進(jìn)行巨細(xì)胞病毒 pp65抗原檢測(cè)的步驟為：①白細(xì)胞的分離：先采取5 ml的EDTA抗凝血， 運(yùn)用右旋糖酐沉降法對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分離。②細(xì)胞濃度的調(diào)整：以磷酸鹽緩沖液把細(xì)胞濃度調(diào)整成1.5×106/ml。③細(xì)胞涂片的制備。④破膜、固定。⑤免疫熒光染色：對(duì)pp65 的混合單克隆抗體加抗后， 進(jìn)行PBS的洗滌與晾干， 再把FITC標(biāo)記好的免疫球蛋白（Ig）G加入， 放在濕盒當(dāng)中， 以37℃進(jìn)行30 min的溫育， PBS洗滌之后進(jìn)行鏡檢。⑥讀片并判定結(jié)果：以熒光顯微鏡對(duì)全部細(xì)胞與結(jié)果進(jìn)行觀察， 其巨細(xì)胞病毒 pp65的陽(yáng)性細(xì)胞表現(xiàn)為均勻的黃綠色或綠色， 核染色為多葉或圓形。判斷呈現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)為：在平均2×105個(gè)白細(xì)胞當(dāng)中， 巨細(xì)胞病毒pp65的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)至少有1個(gè)或更多[2];同時(shí)應(yīng)用微粒子酶免分析法對(duì)巨細(xì)胞病毒-IgM進(jìn)行定量檢測(cè)， 把其滴度<0.5視作陰性標(biāo)準(zhǔn)。全部患者進(jìn)行輸注干細(xì)胞的100 d～1年， 對(duì)其外周血當(dāng)中的巨細(xì)胞病毒-抗原（Ag）陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)、巨細(xì)胞病毒-IgM 滴度進(jìn)行檢測(cè)， 保證1次/月[3， 4];

針對(duì)其中慢性移植物抗宿主病患者需同時(shí)應(yīng)用ELISA法對(duì)IL-2、TNF-α水平進(jìn)行檢測(cè)， 注意在該期間對(duì)是否產(chǎn)生巨細(xì)胞病毒感染進(jìn)行密切觀察。

1. 3 觀察指標(biāo) 比較術(shù)前與術(shù)后100 d～1年巨細(xì)胞病毒活動(dòng)性感染率的差異;對(duì)巨細(xì)胞病毒感染靜止期與活動(dòng)期的局限性與廣泛性慢性移植物抗宿主病患者IL-2、TNF-α水平加以觀察比較。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 手術(shù)前后巨細(xì)胞病毒活動(dòng)性感染情況比較 依據(jù)巨細(xì)胞病毒陽(yáng)性細(xì)胞等檢測(cè)結(jié)果知曉， 術(shù)后100 d～1年， 異基因造血干細(xì)胞移植的巨細(xì)胞病毒活動(dòng)性感染率為32.61%（30/92）， 明顯高于術(shù)前的16.30%（15/92）， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.6187， P=0.0101<0.05）。

2. 2 不同巨細(xì)胞病毒感染時(shí)期局限性與廣泛性慢性移植物抗宿主病患者IL-2、TNF-α水平比較 30例慢性移植物抗宿主病患者巨細(xì)胞病毒感染活動(dòng)期， 局限性與廣泛性慢性移植物抗宿主病患者分別為10、20例;巨細(xì)胞病毒感染靜止期， 局限性與廣泛性慢性移植物抗宿主病患者分別為22、8例。巨細(xì)胞病毒感染活動(dòng)期， 廣泛性慢性移植物抗宿主病患者外周血IL-2、TNF-α水平明顯高于局限性慢性移植物抗宿主病患者， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;廣泛性慢性移植物抗宿主病患者， 巨細(xì)胞病毒感染活動(dòng)期外周血IL-2、TNF-α水平明顯高于巨細(xì)胞病毒感染靜止期， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。endprint

3 討論

巨細(xì)胞病毒感染較為普遍， 患者機(jī)體中的免疫功能表現(xiàn)正常時(shí)巨細(xì)胞病毒于感染細(xì)胞內(nèi)部經(jīng)整合狀態(tài)進(jìn)行存在性潛伏， 具有較低的復(fù)制能力， 一般臨床表現(xiàn)出是靜止性的感染[5]。而機(jī)體中的免疫功能在產(chǎn)生抑制時(shí)， 巨細(xì)胞病毒經(jīng)再次激活以較高水平進(jìn)行持續(xù)性復(fù)制， 同時(shí)進(jìn)入至活動(dòng)期。異基因造血干細(xì)胞移植之后患者機(jī)體中免疫功能產(chǎn)生規(guī)律性的變化， 巨細(xì)胞病毒感染通常產(chǎn)生在進(jìn)行移植術(shù)后的3個(gè)月～1年時(shí)間段[6-10]。

在本研究之中， 依據(jù)巨細(xì)胞病毒陽(yáng)性細(xì)胞、巨細(xì)胞病毒-IgM滴度檢測(cè)結(jié)果知曉， 術(shù)后100 d～1年， 異基因造血干細(xì)胞移植的巨細(xì)胞病毒活動(dòng)性感染率為32.61%（30/92）， 明顯高于術(shù)前的16.30%（15/92）， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.6187， P=0.0101<0.05）;證實(shí)異基因造血干細(xì)胞移植中巨細(xì)胞病毒活動(dòng)性感染的產(chǎn)生率提高和免疫抑制劑的使用相關(guān)。于干細(xì)胞移植術(shù)后的100 d～1年之內(nèi)， 廣泛性慢性移植物抗宿主病患者， 巨細(xì)胞病毒感染活動(dòng)期外周血IL-2、TNF-α水平明顯高于巨細(xì)胞病毒感染靜止期， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）， 與此同時(shí)， 在產(chǎn)生慢性移植物抗宿主病患者中也發(fā)現(xiàn)了， 巨細(xì)胞病毒感染活動(dòng)期， 廣泛性慢性移植物抗宿主病患者外周血IL-2、TNF-α水平明顯高于局限性慢性移植物抗宿主病患者， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）， 也揭示巨細(xì)胞病毒活動(dòng)性感染有可能經(jīng)外周血當(dāng)中的IL-2、TNF-α水平升高去增高慢性移植物抗宿主病的產(chǎn)生及嚴(yán)重程度等。

綜上所述， 于異基因造血干細(xì)胞移植術(shù)之后， 使用的免疫抑制劑成為致使巨細(xì)胞病毒活動(dòng)性感染的重要因素， 若是產(chǎn)生慢性移植物抗宿主病， 巨細(xì)胞病毒活動(dòng)性感染的產(chǎn)生會(huì)持續(xù)增高。相反， 經(jīng)增高IL-2、TNF-α水平增高慢性移植物抗宿主病的產(chǎn)生率與嚴(yán)重程度。

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[收稿日期：2017-09-11]endprint