葛根通脈飲調(diào)控BIP蛋白表達(dá)抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用

韓芬

AS是一種臨床常見的心血管疾病, 現(xiàn)已將AS產(chǎn)生及發(fā)展過程的關(guān)鍵環(huán)節(jié)公認(rèn)為血管平滑肌細(xì)胞增生遷移、脂質(zhì)代謝紊亂以及血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷。相關(guān)研究表明, 葛根中的葛根素對(duì)心肌血液循環(huán)可以起到促進(jìn)作用, 從而對(duì)可以抑制血栓形成, 發(fā)揮對(duì)動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用, 還可以對(duì)產(chǎn)生及釋放炎性介質(zhì)起到抑制、改善微循環(huán)等保護(hù)心臟的作用［1］。本研究對(duì)葛根通脈飲對(duì)AS的作用機(jī)制做進(jìn)一步研究分析, 對(duì)心血管疾病采用此藥進(jìn)行防治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù), 并將結(jié)果做如下匯報(bào)。

1 材料與方法

1.1 材料 日本大耳白兔28只, 普通級(jí), 雄性, 兔齡5個(gè)月,體質(zhì)量2.5～3.0 kg。由山東百德生物科技有限公司提供, 動(dòng)物合格證號(hào)YXQG(魯)2011-0002。

1.2 藥品及試劑 葛根通脈飲基本組方：葛根30 g, 太子參12 g, 山楂15 g, 淫羊藿、川芎、當(dāng)歸尾、赤芍、甘草各6 g。膽固醇(成都普斯生物科技股份有限公司, 批號(hào)：57885)、蛋氨酸(河北冀榮氨基酸公司, 批號(hào)：990325)；蘇木素、伊紅由廣州深達(dá)生物制品技術(shù)有限公司提供。

1.3 儀器 PathVision病理成像系統(tǒng)(美國(guó)Faxitron公司),DYCZ-24F垂直電泳儀(背景中西遠(yuǎn)大科技有限公司),HM560MV冷凍切片機(jī), 貝克曼AU5800全自動(dòng)生化分析儀,PYX-DH50A恒溫箱(上海璽恒實(shí)業(yè)有限公司), HOTE777X轉(zhuǎn)膜儀(中西遠(yuǎn)大科技有限公司), ZF-Ⅱ紫外線成像儀(上海嘉鵬科技有限公司)BDI-100倒置生物顯微鏡(上海研潤(rùn)光機(jī)科技有限公司)。

1.4 方法

1.4.1 分組及制備模型 將28只白兔隨機(jī)分為正常組、高脂組、葛高組以及葛低組, 每組7只。正常組以普通飼料飼養(yǎng)；高脂組將0.02%蛋氨酸及1%膽固醇加入普通飼料中喂養(yǎng)；葛高組及葛低組在喂養(yǎng)高膽固醇飼料基礎(chǔ)上分別加喂10 g/(kg·d)及5 g/(kg·d)的葛根通脈飲。

1.4.2 血脂檢測(cè)及病理組織檢驗(yàn) 抽取空腹血并分離血清,利用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)Hcy含量；取上段兔胸主動(dòng)脈后實(shí)施常規(guī)的脫水、包埋、浸臘、染色等步驟, 并提取總蛋白質(zhì),檢測(cè)其蛋白濃度。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示, 采用t檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 四組Hcy水平及BIP 蛋白表達(dá)情況 高脂組的Hcy水平和BIP蛋白表達(dá)均高于正常組, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；高脂組BIP蛋白表達(dá)為(1.18±0.15)β-actin,Hcy水平為(21.37±0.14)μmol/L, 高于葛高組的(0.59±0.13)β-actin、(11.03±0.13)μmol/L 和葛低組的 (0.62±0.14)β-actin、(13.23±0.10)μmol/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 四組Hcy及BIP水平情況比較( ±s)

表1 四組Hcy及BIP水平情況比較( ±s)

注：與高脂組比較, aP＜0.05

組別 只數(shù) BIP蛋白表達(dá)(β-actin) Hcy水平(μmol/L)正常組 7 0.22±0.10a 5.32±0.11a高脂組 7 1.18±0.15 21.37±0.14葛低組 7 0.62±0.14a 13.23±0.10a葛高組 7 0.59±0.13a 11.03±0.13a

2.2 病理組織學(xué)檢查結(jié)果 正常組內(nèi)皮細(xì)胞完整, 動(dòng)脈內(nèi)膜光滑；高脂組動(dòng)脈內(nèi)膜出現(xiàn)增厚且粗糙, 內(nèi)膜下聚集大量的脂質(zhì)和泡沫細(xì)胞, 存在AS斑塊, 內(nèi)皮細(xì)胞受損, 可見增殖并向膜遷移的正平滑肌細(xì)胞(VSMC)；葛低組與葛高組的內(nèi)皮細(xì)胞個(gè)別受損, 泡沫細(xì)胞量少, 且不存在明顯的AS斑塊。

3 討論

蛋氨酸代謝所產(chǎn)生的中間產(chǎn)物就是Hcy, 其在血漿濃度過高而產(chǎn)生的高Hcy血癥, 對(duì)AS是一個(gè)獨(dú)立的危險(xiǎn)因素。有相關(guān)研究表明, 脂質(zhì)過氧化的出現(xiàn)也與Hcy有關(guān), 能夠使血管內(nèi)皮細(xì)胞受到損傷, 對(duì)增殖血管平滑肌細(xì)胞起到促進(jìn)作用, 從而使血小板進(jìn)一步增加了其聚集性和粘附性, 進(jìn)而引起AS［2］。同時(shí)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的穩(wěn)定會(huì)因?yàn)楦逪cy血癥而被破壞,使蛋白質(zhì)折疊出現(xiàn)錯(cuò)誤或障礙, 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)由此觸發(fā),導(dǎo)致脂質(zhì)出現(xiàn)異常沉積, 最終引發(fā)AS［3］。BIP是應(yīng)激蛋白的一種, 在早期ERS時(shí), 其表達(dá)量就迅速增加。并且在蛋白質(zhì)的糖基化折疊、修飾以及轉(zhuǎn)運(yùn)過程中, 其都會(huì)作為分子伴侶而參與到全過程中, 對(duì)變性蛋白的重新折疊并恢復(fù)正確構(gòu)象起到幫助作用, 對(duì)ERS起到緩解作用［4］。同時(shí)能夠降解或轉(zhuǎn)移無法恢復(fù)的蛋白質(zhì), 避免進(jìn)一步損害細(xì)胞。而當(dāng)ERS時(shí)間過程, 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)就會(huì)失去其代償功能, 就會(huì)使BIP表達(dá)出現(xiàn)下降, 并且細(xì)胞將相關(guān)于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的凋亡程序進(jìn)行起到, 造成細(xì)胞死亡［5］。本次研究中以加入了蛋氨酸與膽固醇的高脂飼料飼養(yǎng)兔子, 持續(xù)9周后, 高脂組兔子的Hcy水平升高, 并且其主動(dòng)脈能夠在鏡下觀察到AS典型的病理變化, 均提示AS模型成功建立。并且與正常組的BIP蛋白表達(dá)量相比, 高脂組增加更為顯著, 表明AS的發(fā)病機(jī)制中, ERS發(fā)揮著重要作用。

葛根中一個(gè)重要的有效成分就是葛根素, 在相關(guān)研究中發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮細(xì)胞在因?yàn)镠cy而出現(xiàn)損傷時(shí), 葛根素能夠?qū)ζ淦鸬奖Ｗo(hù)作用［6］。而淫羊藿能夠?qū)τ蒆cy誘導(dǎo)而出現(xiàn)VSMC過度增殖起到拮抗作用, 并對(duì)其死亡起到促進(jìn)作用,同時(shí)能夠發(fā)揮降血脂、對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行保護(hù)的作用［7］。本研究所用的葛根通脈飲是中藥復(fù)合制劑, 其主要為葛根及淫羊藿。組方中的君藥為葛根, 其具有升陽(yáng)解痙、通利血脈的功效；臣藥為川芎、山楂以及赤芍, 具有舒筋通絡(luò)以及活血化瘀的功效；佐藥為可以起到溫腎助陽(yáng)功效的淫羊藿與太子參；甘草能夠?qū)χT藥起到調(diào)和的作用, 具有補(bǔ)脾益氣、清熱解毒的功效［8］。從本次的研究結(jié)果中發(fā)現(xiàn), 高葛組與低葛組的Hcy水平與高脂組相比明顯低。因此葛根通脈飲對(duì)AS的治療作用得到證實(shí)。且其BIP蛋白表達(dá)量與高脂組相比顯著低, 表明葛根通脈飲能夠?qū)ν弥鲃?dòng)脈組織由Hcy而引發(fā)的ERS起到抑制作用, 進(jìn)而到達(dá)抗AS的作用, 葛根通脈飲抗AS的作用靶點(diǎn)之一可能是BIP蛋白表達(dá)。

［1］ 呼海濤, 徐學(xué)琴, 沈曉君.葛根通脈飲調(diào)控BIP蛋白表達(dá)抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2015, 21(1):150-153.

［2］ 趙君玫, 張娜, 王建新, 等.葛根通脈飲對(duì)兔動(dòng)脈粥樣硬化模型內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)分子表達(dá)的調(diào)控作用.中國(guó)全科醫(yī)學(xué), 2014(27):3269-3273.

［3］ 潘海敏.葛根素對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化兔的作用機(jī)制研究.環(huán)球中醫(yī)藥, 2015(s1):56-57.

［4］ 魏述永.葛根素心血管保護(hù)作用及其機(jī)制研究進(jìn)展.中國(guó)中藥雜志, 2015, 40(12):2278-2284.

［5］ 程遠(yuǎn)渡, 易有金, 易傳祝, 等.植物甾醇酯和葛根素聯(lián)合使用對(duì)高脂血癥小鼠降血脂作用研究.中國(guó)油脂, 2015, 40(4):64-68.

［6］ 陳敬博.葛蘭心寧軟膠囊治療冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病不穩(wěn)定型心絞痛臨床觀察.中醫(yī)學(xué)報(bào), 2015(4):598-599.

［7］ 梁藝.葛根素對(duì)急性冠狀動(dòng)脈綜合征患者炎性因子的影響.西南國(guó)防醫(yī)藥, 2016, 26(10):1196-1197.

［8］ 陸麗萍, 陳素珍.葛根注射液對(duì)腦動(dòng)脈硬化癥患者血液流變學(xué)的影響.上海中醫(yī)藥雜志, 2015(1):44-46.