體癬動(dòng)物模型制備規(guī)范(草案)?

中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)中藥實(shí)驗(yàn)藥理專(zhuān)業(yè)委員會(huì)

1 造模動(dòng)物

可用于制備體癬模型的動(dòng)物主要有豚鼠、大鼠等。一般選成年動(dòng)物，雌雄各半。

2 造模方法

2.1 刮傷接種須癬毛癬菌(或石膏毛癬菌，或石膏樣小孢子菌等)制備豚鼠(大鼠)體癬模型。

原理：真菌侵入表皮后寄生于表質(zhì)層，在局部引起感染及炎癥反應(yīng)。

方法：豚鼠模型：給豚鼠背部右側(cè)剪毛(2.5～4 cm×2.5～4 cm)，脫毛。在脫毛處刮傷皮膚直至有血滲出(無(wú)明顯出血)為度，創(chuàng)傷面處接種須癬毛癬菌(或石膏毛癬菌，或石膏樣小孢子菌，或紅色毛癬菌等)，將含1×107/mL的菌懸液，用刀片涂抹于創(chuàng)面上，接種量1 mL/cm2，玻璃紙覆蓋、紗布包扎、膠布固定。第4天接種部位出現(xiàn)類(lèi)似人體體癬的臨床癥狀，經(jīng)真菌逆培養(yǎng)檢查，鏡檢顯陽(yáng)性，制備體癬模型成功。本模型持續(xù)不少于28 d。

大鼠模型：給大鼠背部右側(cè)剪毛(2.5～4 cm×2.5～4 cm)，在脫毛處用手術(shù)刀刮傷皮膚直至有血滲出為度。創(chuàng)傷面處接種須癬毛癬菌菌種(或石膏樣毛癬菌)，將含1×107/mL的菌懸液，用刀片涂抹于創(chuàng)面上，接種量1 mL/cm2；玻璃質(zhì)覆蓋、紗布包扎、膠布固定。第4天接種部位出現(xiàn)類(lèi)似人體體癬的臨床癥狀，經(jīng)真菌逆培養(yǎng)檢查，鏡檢顯陽(yáng)性，制備體癬模型成功。本模型持續(xù)不少于28 d。

2.2 穿刺法接種石膏毛癬菌制備豚鼠體癬模型

原理：真菌侵入表皮后寄生于表質(zhì)層，在局部引起感染及炎癥反應(yīng)。

方法：豚鼠背部制備直徑3 cm 的圓形脫毛面，24 h后在脫毛區(qū)的中央用7號(hào)注射針頭斜刺一孔，深度為注射針斜面的1/3～1/2，以不使皮膚出血為度。在穿刺孔內(nèi)滴入用沙氏液體培養(yǎng)基調(diào)制的含 2×105/mL個(gè)石膏樣毛癬菌孢子的懸液0.02 mL；另取一小塊(0.5 mm3)石膏樣毛癬菌菌苔植入針孔內(nèi)，使其貼在豚鼠皮膚上。第4天接種部位出現(xiàn)類(lèi)似人體體癬的臨床癥狀，經(jīng)真菌逆培養(yǎng)檢查，鏡檢顯陽(yáng)性，制備體癬模型成功。本模型持續(xù)不少于28 d。

3 模型指標(biāo)

3.1 表觀(guān)指標(biāo)

體癬動(dòng)物模型制備成功后，皮膚外觀(guān)可見(jiàn)明顯彌漫性紅斑，細(xì)碎鱗屑；小片棕褐色結(jié)癡、皮發(fā)易脫落等。接種(須癬毛癬菌，或石膏毛癬菌，或石膏樣小孢子菌，或紅色毛癬菌)制備的豚鼠體癬模型，豚鼠還出現(xiàn)精神差、反應(yīng)遲鈍、體質(zhì)量下降、小便量增多、墊料潮濕度增加等。

體癬動(dòng)物模型的表觀(guān)指標(biāo)有：①模型局部：色變情況(紅斑大小，鱗屑有無(wú))；②活動(dòng)情況、皮毛光澤度、體毛脫落、墊料潔凈情況。表觀(guān)指標(biāo)可量化積分或半定量分級(jí)。

表觀(guān)指標(biāo)是臨床判定體癬的主要指標(biāo)，也應(yīng)是動(dòng)物模型制備是否成功判定的主要指標(biāo)，是核心指標(biāo)，權(quán)重系數(shù)0.4。

3.2 病理指標(biāo)

取病灶部位皮膚，病灶處各取1塊約3 mm2皮膚，體癬局部病理變化可反映受損局部組織各層皮膚的炎細(xì)胞浸潤(rùn)程度和愈合情況，直接反映體癬模型特點(diǎn)。模型成功后，皮膚鱗狀上皮明顯增生，角化層增厚，皮下組織可見(jiàn)彌散性炎細(xì)胞浸潤(rùn)。

病理指標(biāo)是體癬動(dòng)物模型最直接的反映，專(zhuān)屬性較強(qiáng)，是直接相關(guān)指標(biāo)，權(quán)重系數(shù)0.3。

3.3 病原學(xué)指標(biāo)

體癬病灶皮膚逆培養(yǎng)陽(yáng)性率是模型成功的重要指標(biāo)，陰性率則是藥物療效的重要指標(biāo)。體癬模型制備成功后，背部刮取少許鱗屑，加一滴10%(氫氧化鉀)KOH，微加熱后輕壓蓋玻片，驅(qū)除氣泡并將標(biāo)本壓薄，吸干周?chē)缫虹R檢。鏡下皮屑內(nèi)見(jiàn)分支、分隔的菌絲為陽(yáng)性，反之為陰性。

病灶皮膚逆培養(yǎng)是體癬動(dòng)物模型成功與否或藥物療效的直接指標(biāo)，專(zhuān)屬性強(qiáng)，是直接相關(guān)指標(biāo)，權(quán)重系數(shù)0.3。

4 備注

本規(guī)范介紹的是與體癬中西醫(yī)臨床病證特點(diǎn)吻合度較高，且應(yīng)用較多的動(dòng)物模型。其他模型如采用糖皮質(zhì)激素聯(lián)合環(huán)磷酰胺建立的紅色毛癬菌感染豚鼠的體癬模型等，因成功率低，且與中西醫(yī)標(biāo)準(zhǔn)吻合度低，未納入本標(biāo)準(zhǔn)草案。