中藥調(diào)節(jié)樹(shù)突狀細(xì)胞免疫功能研究進(jìn)展*

賈貝田，趙慶云，蔡雨孜，王 麗，邊育紅

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193；2.天津市第二人民醫(yī)院，天津 300192）

樹(shù)突狀細(xì)胞（DCs）是體內(nèi)功能最強(qiáng)大的抗原遞呈細(xì)胞，緊密連接先天性免疫應(yīng)答和適應(yīng)性免疫應(yīng)答[1]。DCs分兩種階段：未成熟階段和成熟階段[2]。未成熟DCs（imDCs）由骨髓進(jìn)入外周組織，經(jīng)抗原刺激后分化為成熟DCs[3-4]。以DCs為中藥作用靶點(diǎn)[5-7]，采用藥物促進(jìn)DCs成熟分化以及提高其提呈抗原能力治療癌癥[8]，或者干預(yù)DCs成熟和誘導(dǎo)耐受型DCs治療自身免疫性疾病、移植排斥[9]日益受到人們關(guān)注。因此研究中藥干預(yù)DCs在疾病中的作用，將有助于揭示中藥治療疾病的機(jī)制以及新藥的開(kāi)發(fā)。

1 中藥干預(yù)DCs對(duì)腫瘤的治療作用

臨床研究發(fā)現(xiàn)腫瘤患者DCs功能缺陷與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[10]。1）在DCs分化方面：黑色素瘤源性因素通過(guò)促進(jìn)STAT3和MAPK信號(hào)通路超活化，抑制祖細(xì)胞向DCs細(xì)胞分化[11]；細(xì)胞因子TGF-β1抑制骨髓來(lái)源的前體細(xì)胞向DCs細(xì)胞分化；分化抑制因子-1（Id1）過(guò)表達(dá)通過(guò)下調(diào)參與DCs分化的關(guān)鍵分子和抑制CD8 T細(xì)胞增殖導(dǎo)致全身性免疫抑制[12]。2）在DCs成熟和功能方面：研究發(fā)現(xiàn)腫瘤微環(huán)境中浸潤(rùn)的DCs不能有效的處理和提呈Ag[13-14]，且其表面共刺激分子的表達(dá)以及免疫刺激性因子（如IL-12）的分泌也降低[15-16]。最近研究表明，在腫瘤微環(huán)境中，microRNA miR148-a在DCs中表達(dá)顯著上升，且其通過(guò)抑制DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNMT1）表達(dá)減弱TLR介導(dǎo)的細(xì)胞成熟[17]。以上研究表明腫瘤微環(huán)境中樹(shù)突狀細(xì)胞的免疫抑制是腫瘤治療的潛在目標(biāo)，改變腫瘤的微環(huán)境，促進(jìn)DCs分化與成熟,提高DCs的抗原提呈能力是治療腫瘤的重要靶點(diǎn)。

研究發(fā)現(xiàn)枸杞多糖可通過(guò)TLR2/TLR4介導(dǎo)的NF-κB 通路誘導(dǎo) DCs成熟，并分泌 IL-12p40[18]；黃芪多糖除促進(jìn)雞骨髓來(lái)源的DCs表面分子CD40和CD80的表達(dá)增高外[19]，還可上調(diào)DCs膜表面與抗原遞呈相關(guān)的CD36、IL-27的表達(dá)，下調(diào)IFI16的表達(dá)，對(duì)增加DCs的免疫活性，促進(jìn)DCs的成熟與分化有顯著的影響[20]。另外，在抗原遞呈階段，靈芝多糖可以通過(guò)DCs基于干擾素-γ和顆粒蛋白酶B途徑誘導(dǎo)CTL[21]。周雍明等[22]將肺瘤平膏處方根據(jù)藥物功效分類(lèi)不同拆分為益氣方（黃芪、黨參）、解毒方（白花蛇舌草、草河車(chē)、敗醬草）、活血方（桃仁、三七），并制成含藥血清，分別處理DCs，發(fā)現(xiàn)肺瘤平膏、活血藥、益氣藥均可不同程度增強(qiáng)DCs刺激LPAK細(xì)胞殺傷腫瘤的作用。除此之外，復(fù)方扶正湯（人參、黃芪、女貞子、旱蓮草等）亦可誘導(dǎo)急性髓細(xì)胞白血病完全緩解期患者骨髓來(lái)源單核細(xì)胞分化為mDCs，且顯著激活T細(xì)胞殺傷人白血病細(xì)胞株K562 細(xì)胞[23]。

2 中藥干預(yù)DCs對(duì)炎癥的治療作用

在炎癥疾病中，DCs可通過(guò)遞呈抗原，分泌各種炎性因子，誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞活化，參與炎癥反應(yīng)。如DCs通過(guò)受體 TLRs4、7、8和 9識(shí)別 HSV-1的PAMPs激活CD4+T細(xì)胞，促進(jìn)其產(chǎn)生IL-2、IL-17和IFN-γ,同時(shí)誘導(dǎo)CD4+T細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化，進(jìn)而參與炎癥反應(yīng)[24]；DCs在纖維細(xì)胞分泌的CCL2和CCL20作用下，向氣道遷移，引起慢性炎癥反應(yīng)[25]。

近期研究發(fā)現(xiàn)了一種新型DCs，即炎性DCs。炎性DCs在形態(tài)、表型和遷移能力上與正常DCs大致相同，但是，炎性DCs在起源上與正常DCs有所差異[26]。正常DCs可由IL-4和GM-CSF誘導(dǎo)而成，而炎性DCs由骨髓來(lái)源的單核細(xì)胞只需經(jīng)GM-CSF分化而來(lái)[27]。骨髓中的Ly6Chi單核細(xì)胞在趨化因子CCR2的作用下遷移至感染組織，分化為炎性DCs。這些炎性DCs可通過(guò)分泌TNF-α和NO清除致病原[28]并且遷移至淋巴結(jié)將抗原遞呈給初始CD4+T細(xì)胞，促進(jìn) Th1[29]、Th2[30]及 Th17[31]細(xì)胞分化。

2.1 慢性乙型肝炎 研究表明，慢性乙型肝炎（CHB）患者存在不同程度的免疫耐受[32]。CHB患者DCs不能被誘導(dǎo)成熟，其功能低下，共刺激分子表達(dá)降低，不能有效激活T細(xì)胞，T淋巴細(xì)胞亞群失衡，造成多種輔助和調(diào)節(jié)等細(xì)胞功能異常，導(dǎo)致機(jī)體不能有效清除入侵的HBV，致疾病慢性化[33-34]。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，與健康人相比，慢性HBV患者體內(nèi)存在高比例的CD4+、CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，該細(xì)胞通過(guò)抑制DCs成熟以及IL-2基因在CD4+、CD25-應(yīng)答T細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄抑制T細(xì)胞的激活，導(dǎo)致不能有效產(chǎn)生HBV特異性免疫應(yīng)答，從而使HBV持續(xù)感染患者[35]。故促進(jìn)DC成熟，增強(qiáng)其激活T淋巴細(xì)胞能力是治療CHB的重要靶點(diǎn)。

川牛膝多糖可促進(jìn)樹(shù)突狀細(xì)胞表面CD40、CD80、CD86、MHC-I和 MHC-II表達(dá)，并上調(diào) MHC-I和MHC-II的mRNA水平[36]；白術(shù)多糖可促進(jìn)DC表面HLA-DR、CD86、CD83和CD80表達(dá)和IL-12、TNF-α的分泌，上調(diào)TLR4的表達(dá)，降低DCs的吞噬能力[37]。說(shuō)明川牛膝多糖和白術(shù)多糖在抗病毒免疫中可能存在重要作用。孫雪華等[38]給CHB患者連續(xù)服用補(bǔ)腎沖劑（巴戟天15 g，甜蓯蓉15 g，枸杞子15 g，生地 15 g，青皮 15 g，田三七 15 g，苦參15 g）6個(gè)月后，發(fā)現(xiàn)患者DCs表面分子CD86、CD80、CD14、CD11C以及 HLA-DR 的表達(dá)顯著增高，并促進(jìn)細(xì)胞因子IFN-γ的分泌，抑制IL-10的產(chǎn)生，且治療后，治療組患者血液中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、γ－谷氨酸轉(zhuǎn)肽酶以及HBV DNA含量均顯著降低。

2.2 支氣管哮喘 支氣管哮喘的主要發(fā)病機(jī)制之一是Th1/Th2以及Th17細(xì)胞表達(dá)水平失衡[39-40]。DCs可通過(guò)遞呈抗原，分泌不同的細(xì)胞因子，激活T淋巴細(xì)胞，影響Th0細(xì)胞的分化方向，DCs在IL-12的作用下，誘導(dǎo)Th0細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化；在高水平IL-4低水平IL-12的作用下，誘導(dǎo)Th0細(xì)胞向Th2細(xì)胞分化[41]。有研究表明，在支氣管哮喘急性發(fā)作期和緩解期，Th1、Th1/Th2、IFN-γ 的表達(dá)水平低于對(duì)照組；Th2、Th17、IL-4、IL-17 表達(dá)水平高于對(duì)照組[42]。

研究發(fā)現(xiàn)氧化苦參堿可通過(guò)降低哮喘小鼠肺和脾臟中DCs的數(shù)量緩解哮喘氣道炎癥，為氧化苦參堿治療哮喘提供重要依據(jù)[43]。黃芪多糖具有通過(guò)調(diào)節(jié)DCs表型來(lái)緩解大鼠哮喘癥狀的作用[44]。楊靜宜等[45]在五虎湯治療小兒哮喘實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)Thomas法分離、培養(yǎng)并誘導(dǎo)治療組及對(duì)照組的嬰幼兒外周血DCs，并與健康兒童的T淋巴細(xì)胞共同培養(yǎng)后，ELISA法檢測(cè)血清中IL-4和IL-5的濃度，結(jié)果顯示治療組IL-4和IL-5的濃度較對(duì)照組明顯降低，說(shuō)明五虎湯可通過(guò)抑制哮喘患兒Th2細(xì)胞細(xì)胞因子IL-4和IL-5的分泌，調(diào)節(jié)Th1/Th2的失衡；張麗等[46]在射干麻黃湯干預(yù)小鼠哮喘模型中發(fā)現(xiàn)射干麻黃湯可通過(guò)降低DCs數(shù)量，抑制其識(shí)別遞呈抗原功能，進(jìn)而抑制肺泡中嗜酸粒細(xì)胞的浸潤(rùn)及Th2細(xì)胞因子的分泌，以此減輕哮喘的癥狀。

3 中藥干預(yù)DCs治療自身免疫性疾病的作用

3.1 類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 研究表明，DCs通過(guò)呈遞滑膜自身抗原和活化T細(xì)胞分泌INF-γ、IL-17等炎癥因子發(fā)起或促進(jìn)關(guān)節(jié)炎癥的持續(xù)進(jìn)展[47-48]，imDCs與RA患者來(lái)源的耐受性DCs均低表達(dá)MHCⅡ、CD40、CD83及共刺激分子CD80、CD86，同時(shí)低水平分泌促炎因子 IL-1β、IL-6、IL-23 以及 TNF-α[49]。已在小鼠膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎模型中證實(shí)，利用基因修飾誘導(dǎo)產(chǎn)生的耐受性DCs可以明顯抑制IL-12的分泌，從而抑制T細(xì)胞向Th1方向分化，使其分泌免疫活化細(xì)胞因子IFN-γ減少，但不影響免疫抑制性細(xì)胞因子IL-10的分泌，有效地抑制關(guān)節(jié)炎的發(fā)生[50-51]。通過(guò)誘導(dǎo)耐受性樹(shù)突狀細(xì)胞，重建T細(xì)胞耐受，可以特異性、持續(xù)抑制免疫反應(yīng)，改善關(guān)節(jié)炎癥，避免目前傳統(tǒng)藥物的不良反應(yīng)[52]，使RA達(dá)到長(zhǎng)期緩解。

王竹等[53]分別用不同濃度梯度的青藤堿處理DCs，Elisa法檢測(cè)上清液中細(xì)胞因子含量，發(fā)現(xiàn)青藤堿可下調(diào) DCs對(duì)細(xì)胞因子 TNF-α、IFN-γ、IL-6 以及IL-12的分泌，上調(diào)細(xì)胞因子IL-10的表達(dá)，且青藤堿在作用濃度為20μg/mL時(shí)，效果做優(yōu)。另外，余克強(qiáng)[54]發(fā)現(xiàn)經(jīng)青藤堿干預(yù)后的DCs，其趨化因子受體CCR5、CCR7的蛋白和mRNA表達(dá)顯著降低，其分泌的CXCL9、CXCL10含量也降低。故猜測(cè)青藤堿是通過(guò)抑制趨化因子對(duì)DCs的趨化作用，減少趨化因子的分泌來(lái)治療RA。田昱平等[55]發(fā)現(xiàn)經(jīng)桂枝附子湯加味治療后的寒濕阻絡(luò)型RA患者，其類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎疾病活動(dòng)度指數(shù)(DAS28)明顯降低，患者的紅細(xì)胞沉降速率（ESR）、C反應(yīng)蛋白（CRP）、類(lèi)風(fēng)濕因子（RF）水平較治療前均下降，腰椎、股骨頸骨密度水平較治療前明顯升高。表明桂枝附子湯可有效緩解RA癥狀，改善骨質(zhì)疏松，值得臨床推廣。

3.2 銀屑病 銀屑病是一種以T淋巴細(xì)胞為主的免疫系統(tǒng)異?；罨穆詮?fù)發(fā)性自身免疫性疾病[56]。研究表明，DCs的異常活化是銀屑病發(fā)病的上游環(huán)節(jié)，在銀屑病皮損處可發(fā)現(xiàn)大量成熟DCs，這些DCs分泌大量炎性因子，如 TNF-α、IFN-γ、IL-12、IL-23等，其中IL-12和IL-23是T輔助細(xì)胞的始動(dòng)者，可引發(fā)一系列免疫反應(yīng)[57-60]。在銀屑病中，基質(zhì)細(xì)胞也可調(diào)節(jié)DCs產(chǎn)生IL-23，進(jìn)而促進(jìn)Th17細(xì)胞分化[61]。故抑制DCs成熟，減少促炎因子的釋放，上調(diào)抑炎因子的分泌是治療銀屑病的重要方法。

劉京生等[62]用涼血活血方（生槐花30 g，白茅根 30 g，生地 30 g，紫草根 15 g，牡丹皮 15 g，茜草根15 g，丹參 15 g，雞血藤 30 g，板藍(lán)根 30 g，白蘚皮15 g）干預(yù)銀屑病患者DCs后，發(fā)現(xiàn)DCs表面CD86的表達(dá)及刺激混合淋巴細(xì)胞增殖的能力均有一定的抑制，T h1型細(xì)胞因子的產(chǎn)生顯著性降低，而Th2型細(xì)胞因子產(chǎn)生增加；王明星等[63]用咪喹莫特誘導(dǎo)小鼠銀屑病模型，用涼血解毒湯（土茯苓30 g，生槐花 15 g，生地 15 g，紫草 10 g，赤芍 10 g，白茅根 30 g，苦參 10 g，金銀花 15 g，草河車(chē) 9 g，白鮮皮10 g）進(jìn)行干預(yù)，發(fā)現(xiàn)涼血解毒湯可明顯降低皮損PASI評(píng)分及表皮厚度、減少炎性反應(yīng)細(xì)胞的浸潤(rùn)，抑制皮損中TLR7通路相關(guān)蛋白的表達(dá)，降低皮損處細(xì)胞因子 IL-23、IL-1β 的分泌，下調(diào) TLR7、TLR8、IL-23及IL-12p40 mRNA的表達(dá)。由此得出，涼血解毒湯可抑制DCs活化，改善皮損處T淋巴細(xì)胞和DCs的浸潤(rùn)，有效緩解皮損癥狀。

4 總結(jié)與展望

中藥可通過(guò)調(diào)節(jié)DCs成熟以及細(xì)胞因子的分泌發(fā)揮其促進(jìn)或抑制免疫應(yīng)答的作用。一方面，一些中藥可通過(guò)增強(qiáng)DCs表面共刺激分子、MHC分子的表達(dá)以及促炎因子的分泌增強(qiáng)免疫應(yīng)答，表明中藥可以作為DCs疫苗佐劑促進(jìn)特異性抗原引起的免疫應(yīng)答；另一方面，有些中藥可通過(guò)抑制DCs成熟和促炎因子的產(chǎn)生，促進(jìn)抗炎因子IL-10的分泌，增強(qiáng)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的增殖進(jìn)而改善自身免疫性疾病或者過(guò)敏性炎癥反應(yīng)，表明中藥可以作為耐受性佐劑參與特異性抗原引起的免疫耐受。除此之外，中藥亦可通過(guò) TLR4、NF-κB、JNK 和 MEK-ERK信號(hào)通路調(diào)節(jié)DCs成熟和細(xì)胞因子的分泌。

以上研究表明，中藥在治療疾病方面有很多優(yōu)勢(shì)，具有多環(huán)節(jié)、多靶點(diǎn)、綜合調(diào)節(jié)的特點(diǎn)，而隨著中藥在預(yù)防和治療疾病方面的廣泛使用，我們可基于DCs研究中藥對(duì)疾病的治療作用，為中藥的研發(fā)和臨床應(yīng)用提供新的視角，為新的治療手段提供新的思路，為中藥國(guó)際化提供新的著力點(diǎn)。