血液保存液對梅毒螺旋體抗體ELISA檢測結果的稀釋影響

潘 微 陳玉鳳 李 冰*

（1 錦州市中心血站，遼寧 錦州 121000；2 大連市疾病預防控制中心，遼寧 大連 116021；3 大連醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院檢驗科，遼寧 大連 116011）

梅毒是因為梅毒螺旋體而導致的一種危害性較大的性傳播疾病。最近這些年這種病情在我國的發(fā)病率逐年上升，其對于供血工作也會造成較大的影響，所以血液安全面臨著前所未有的嚴峻挑戰(zhàn)[1]。從某種意義上來說，這對于人類的安全和健康產(chǎn)生了極大的影響。當前無償獻血者的梅毒抗體篩查方法有很多，主要有酶聯(lián)免疫吸附實驗法、甲苯胺紅不加熱血清試驗法、梅毒螺旋體明膠凝集試驗法。一般對梅毒抗體的檢驗通常采用本研究所分析的酶聯(lián)免疫吸附試驗法和甲苯胺紅不加熱血清試驗法各進行一次檢驗[2]，初次檢驗結果為陽性的必須經(jīng)過雙方復查后確定最終的結果。復查一般采用原抗凝管標本和血袋辮血同時檢驗。本研究主要分析血液保存液對梅毒螺旋體抗體酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測結果的稀釋影響，結果取得滿意成效，現(xiàn)將主要研究情況匯報如下。

1 資料與方法

1.1 樣本：本研究所選擇的標本為高濃度梅毒TP-ELISA陽性（S/CO值超過14.80）的樣本，通過梅毒螺旋體明膠凝集試驗檢驗為陽性。梅毒的指控血清為衛(wèi)生部臨床檢驗中心所提供，血清含量為2NCU/mL，批號為0690。本研究涉及到血液保存液、酶聯(lián)免疫吸附試驗診斷試劑盒等，所有的材料和試劑都經(jīng)過檢測，而且都在有效的試用期之內(nèi)。

1.2 方法：選擇我血站檢驗科在2015年1月至2016年4月所接收的梅毒陽性樣本作為本研究的研究對象，用血液保存液和小牛血清當做稀釋液對高濃度的梅毒陽性樣本和2NCU/mL梅毒控制血清進行梯度的稀釋，將其分別配成10%、20%、30%和40%的混合液，并將這四組混合液分別標為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組。Ⅰ組的混合液為血液保存液+高濃度梅毒陽性標本；Ⅱ組的混合液為小牛血清+高濃度梅毒陽性樣本；Ⅲ組混合液為血清保存液+2NCU/mL梅毒指控血清；Ⅳ組混合液為（小牛血清+2NCU/mL）梅毒治控血清。將配制好的四組混合液采用微量移液器插入梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗診斷試劑盒的反應板之上，之后再FAME全自動酶免疫分析系統(tǒng)上進行分析，重復25次實驗。

1.3 統(tǒng)計學分析：本研究所有涉及的統(tǒng)計學數(shù)據(jù)均采用IBM SPSS23.0統(tǒng)計學軟件進行檢驗，P＜0.05表示差異明顯，具有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

四組相同稀釋度的混合液的S/CO值不存在明顯差異，P＞0.05，無統(tǒng)計學意義；Ⅰ組和Ⅱ組的稀釋液混入量每增加10%，其S/CO值都會有所下降，原樣品管和10%稀釋度的S/CO均值相比，二者之間無明顯的差異，P＞0.05，但是原樣品管和20%、30%、40%稀釋度的S/CO均值進行比較，差異明顯，P＜0.05，具有統(tǒng)計學意義；Ⅲ組和Ⅳ組稀釋混合液的回收量，每增加10%，其S/CO值不僅出現(xiàn)下降情況，而且下降十分明顯。原樣品管和10%、10%和20%、20%和30%、30%和40%稀釋度和S/CO均值都存在明顯差異，其差異具有統(tǒng)計學意義，P＜0.05，差異明顯。

3 討 論

通常情況下，采血供血機構主要采用辮血復檢和抗凝試管的結果進行比較，這能夠有效的避免單一采用抗凝試管而產(chǎn)生假性陽性的結果[3]。因為儀器加樣產(chǎn)生高濃度拖帶污染，這容易導致假性陽性的結果產(chǎn)生，而且留樣錯誤可導致假性陰性結果。在實際工作當中，存在有因為辮血當中混入了血液保存液，這對于抗原和抗體的濃度進行稀釋，進而導致了辮血和抗凝試管的結果不一致的情況發(fā)生[4]。

當前存在有大多數(shù)的血袋的保存液為CPD-A，保存液主要占血液體積的14%左右，而正常人的血漿占全血液體積的50%～65%，因此血漿保存液的含量為22%～28%為合適。但實際的采血工作當中，存在著因為各種因素干擾導致血漿當中保存液混入一般濃度超過40%，所以本研究主要分析稀釋液混入量在40%以下的范圍內(nèi)，其S/CO值的變化情況。從本研究分析可以看出，Ⅰ組和Ⅱ組的稀釋液混入量每增加10%，其S/CO值都會有所下降，原樣品管和10%稀釋度的S/CO均值相比，二者之間無明顯的差異，P＞0.05，但是原樣品管和20%、30%、40%稀釋度的S/CO均值進行比較，差異明顯，P＜0.05，具有統(tǒng)計學意義；Ⅲ組和Ⅳ組稀釋混合液的回收量，每增加10%，其S/CO值不僅出現(xiàn)下降情況，而且下降十分明顯。原樣品管和10%、10%和20%、20%和30%、30%和40%稀釋度和S/CO均值都存在明顯差異，其差異具有統(tǒng)計學意義，P＜0.05，差異明顯。從中也可以看出，兩種不同成分的稀釋液對于TPELISA的檢測結果并不存在差異。因為血袋辮血當中血液保存液的含量為22%～28%，因此，采用混有血液保存液的血袋辮血對高濃度的梅毒陽性標本進行復查，那么辮血和抗凝試管但檢測值都會出現(xiàn)明顯的變化[5-6]。同時血袋辮血保證混入量每增加10%，那么S/CO均值都會出現(xiàn)明顯的變化，這很有可能導致梅毒抗體出現(xiàn)假陰性的結果。因此，采用混有血液保存液的血袋辮血對低濃度的梅毒陽性標本進行復查，那么辮血和抗凝試管的檢測值會出現(xiàn)明顯的差異。

綜上所述，采用混有血液保存液的血袋辮血對高濃度的梅毒陽性標本和低濃度的梅毒陽性標準進行復查，辮血和抗凝試管的檢測值會出現(xiàn)明顯差異，所以臨床上不建議采用血袋辮血對梅毒陽性標本進行復查。

[1]門守山.血袋內(nèi)抗凝血液標本對ELISA法檢測HBsAg結果的影響[J].臨床輸血與檢驗,2016,18(4):201-203.

[2]孫立平.兩種抗凝劑對血液4項指標ELISA檢測結果干擾的分析[J].中國輸血雜志,2016,29(4):23-24.

[3]王美玲,白莉,劉玉振.抗凝劑對HBsAg檢測結果的影響[J].中國誤診學雜志,2016,16(9):20-22.

[4]杜蘭英,莊輝,何軍,等.梅毒螺旋體TPN17重組抗原的表達及其在獻血篩查中的應用[J].中國輸血雜志,2014,29(1):163-165.

[5]錢超,穆琪,霍俊杰,等.4種方法檢測梅毒螺旋體抗體的結果分析[J].當代醫(yī)學,2015,21(13):453-454.

[6]劉靜,于靜波,王玉紅,等.兩種方法聯(lián)合檢測梅毒螺旋體抗體的應用價值[J].檢驗醫(yī)學與臨床,2015,12(20):213-215.