Pax-2、P63在子宮內(nèi)膜病變中的研究

王 冬 馬愛國 龔晨威 陳 慰 徐祖德

（上海市浦東新區(qū)婦幼保健院病理科，上海 200000）

子宮內(nèi)膜癌在女性中是第六個常見的癌癥。Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌常發(fā)生在圍絕經(jīng)期婦女，危險因素包括雌激素-孕激素比例不平衡，高齡，未產(chǎn)婦，他莫西芬治療糖尿病和肥胖[1]。Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生一般不受雌激素的影響，發(fā)病年齡較大常發(fā)生于老年患者，侵襲性明顯并較早轉(zhuǎn)移。Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌之前常表現(xiàn)為子宮內(nèi)膜復(fù)雜-不典型增生，通?？杀憩F(xiàn)為子宮內(nèi)膜增生-非典型子宮內(nèi)膜增生-子宮內(nèi)膜樣腺癌的病理過程。本次研究通過Pax-2、P63在各種子宮內(nèi)膜病變中的表達情況，從而探討其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 臨床資料：收集上海市浦東新區(qū)婦幼保健院病理科2004年～2017年刮宮術(shù)活檢標(biāo)本和子宮切除標(biāo)本。其中子宮內(nèi)膜復(fù)雜-不典型增生標(biāo)本20例，36～56歲，平均年齡43歲；子宮內(nèi)膜樣腺癌標(biāo)本18例，年齡40～65歲，平均年齡54歲；Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌10例（包括透明細胞癌、漿液性腺癌和黏液性腺癌），年齡50～65歲，平均年齡56歲。

1.2 方法：應(yīng)用免疫組化SP法進行染色?？贵w為P63鼠抗人單克隆抗體和Pax-2鼠抗人多克隆抗體，均購自廣州深達生物制品技術(shù)有限公司。實驗P63的陽性對照為宮頸鱗癌標(biāo)本，Pax-2的陽性對照為腎透明細胞癌標(biāo)本，PBS液代替一抗做為陰性對照。

1.3 染色評估Pax-2和P63染色陽性均定位于細胞核，為棕黃色顆粒。采用染色指數(shù)積分，染色指數(shù)計算方法如下：①整個病變細胞染色百分比從0～1評分：0～10%染色為0分，11%～15%為0.3分，15%～50%為0.7分，51%～100%為1.0分。②染色強度從0～1評分：不表達為0分，弱表達為0.3分，中表達為0.7分，強表達為1.0分。染色指數(shù)=染色細胞百分?jǐn)?shù)×染色強度分?jǐn)?shù)[2]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析：各組之間的差別采用t檢驗，并SPSS軟件進行數(shù)據(jù)分析，P＜0.05差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

Pax-2主要染色于細胞核，并且呈現(xiàn)較彌漫染色，在子宮內(nèi)膜癌（內(nèi)膜樣腺癌、漿液性癌）中均表達不明顯，但在不典型增生具有較強表達。P63染色也定位于細胞核，呈現(xiàn)較深的顆粒狀染色，在子宮內(nèi)膜癌中幾乎表達，在不典型增生中表達也不明顯，具體數(shù)據(jù)及統(tǒng)計學(xué)分析如下。

2.1 Pax-2在子宮內(nèi)膜樣腺癌和漿液性腺癌中幾乎不表達，平均染色指數(shù)均為0，在復(fù)雜-不典型增生中平均染色指數(shù)為（0.38±0.23），經(jīng)比較Pax-2在復(fù)雜-不典型增生的表達與子宮內(nèi)膜樣腺癌、子宮漿液性腺癌的表達均有顯著差異（t=7.6，P＜0.01）。在子宮內(nèi)膜樣腺癌和子宮漿液性腺癌中比較無差異。

2.2 P63在子宮內(nèi)膜樣腺癌和漿液性腺癌中也幾乎不表達，染色指數(shù)為0，在復(fù)雜-不典型增生中部分有弱表達，平均染色指數(shù)為0.04±0.02，與前二者比較，表達無顯著差異（t=1.7，P＞0.01）。在子宮內(nèi)膜樣腺癌和子宮漿液性腺癌中比較無差異。

3 討 論

子宮內(nèi)膜癌常見于年齡較大婦女，就診平均年齡約為55歲，一般Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌通常經(jīng)歷由增生到癌的一系列病理過程，區(qū)分子宮內(nèi)膜增生癥和癌仍是一個較困難的領(lǐng)域。而Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌惡性的更高，發(fā)病原因不明，以漿液性癌為多發(fā)。癌癥發(fā)展的過程是一個多步驟的過程，包括一系列原始細胞的突變，它包括克隆增生，無控制的生長，最后的浸潤。細胞的壓力可有很多外部和內(nèi)部影響引起，比如紫外線輻射，電離輻射，低氧，致癌物如黃曲霉毒素，吸煙，氧化應(yīng)激，致癌基因激活。這些可以導(dǎo)致DNA損壞，進而導(dǎo)致細胞惡性轉(zhuǎn)化。為了恢復(fù)完整性，細胞執(zhí)行了一些損傷控制機制。這些機制比人類物種古老，已經(jīng)在一億年前領(lǐng)鞭蟲的后代和早期多細胞海葵中發(fā)現(xiàn)[3]。生殖系統(tǒng)保護進化對物種的繁衍至關(guān)重要。維持體細胞基因完整性來源于生殖細胞保護機制的進化。女性生殖細胞經(jīng)歷減數(shù)分裂從而產(chǎn)生單倍體細胞對繁殖是必需的。這種多重過程當(dāng)細胞到達四倍體階段是停止了。這個階段的長度延伸會使不成熟的卵母細胞更脆弱。這種機制確保卵母細胞基因組的完整性。P63作為人類繁殖的保護者，在p53家族中起著至關(guān)重要的作用。當(dāng)P63維持著保護女性生殖細胞的能力時，p53維持軀體細胞穩(wěn)定性。這些提示他們有腫瘤抑制功能和調(diào)控細胞周期的功能[4]。最近幾年，PAX-2在很多癌中表達，包括腎臟、卵巢、子宮內(nèi)膜和乳腺癌。在將來，PAX-2的表達在癌癥的發(fā)展中會作為相當(dāng)關(guān)鍵的因素。PAX-2抑制Caspase-2導(dǎo)致腎臟集合管細胞凋亡，從而刺激增殖和自我更新。最近研究表明，PAX-2通過刺激AP-1導(dǎo)致CyclinD1的表達，從而促進結(jié)腸癌細胞的增殖。PAX-2在轉(zhuǎn)移性前列腺癌高表達，并且表達在生長和浸潤的細胞。因此，PAX-2是有惡性細胞的證明，并建議它也許是癌癥治療的一個潛在靶向目標(biāo)。然而，PAX-2在癌癥發(fā)展中的作用可能大部分依賴于組織的特殊條件。另外，PAX-2的生物學(xué)重要性在癌細胞中也有變化[5]。

在這次研究中發(fā)現(xiàn)，Pax-2在子宮內(nèi)膜癌中幾乎不表達，而在子宮內(nèi)膜復(fù)雜-不典型增生中呈現(xiàn)弱表達，甚至中強表達。在一些復(fù)雜-不典型增生的刮宮標(biāo)本中，有的區(qū)域分化較好，有的區(qū)域分化較差，我們發(fā)現(xiàn)，分化好的區(qū)域染色更深一些，越接近癌的區(qū)域染色越淺。這或許表明Pax-2可以指示病變的向惡性分化的程度，進而是否可以區(qū)分子宮內(nèi)膜增生性病變和癌的病變。子宮內(nèi)膜增生性病變在病理切片中千差萬別，病理醫(yī)師診斷有時難免帶有主觀判斷，而增生性病變進而發(fā)展成癌的潛能有多大，從HE切片中很難判斷。這次關(guān)于Pax-2的研究讓我們發(fā)現(xiàn)，就算同樣診斷為復(fù)雜-不典型增生的子宮內(nèi)膜病變，Pax-2的染色指數(shù)也不一樣，甚至同一張片子中，各個區(qū)域的染色也有深有淺，這也許預(yù)示著病變進一步發(fā)展的潛在隱患，染色指數(shù)高的，分化會更好，將來發(fā)展為癌的可能性更小，而染色深的區(qū)域的腺體，更趨向于良性。

而P63這次的實驗結(jié)果不是很令人滿意，在子宮內(nèi)膜癌中也幾乎不表達，在復(fù)雜-不典型增生中有個別的表達，而且染色非常淺，經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)分析，并沒有顯著差異，在一些刮宮標(biāo)本中帶有正常的子宮內(nèi)膜中染色也不是很明顯，所以在子宮內(nèi)膜病變中，P63并不是一個有敏感性和特異性的抗體。當(dāng)然，也可能和實驗的環(huán)境和操作誤差有關(guān)，以及這次沒有收集正常子宮內(nèi)膜標(biāo)本，在后續(xù)的研究中我們會進一步探討。

綜上所述，在這次研究中，Pax-2隨著子宮內(nèi)膜病變分化的高低而存在染色差異，分化越好，染色指數(shù)越高，將來可以在子宮內(nèi)膜增生和癌的鑒別診斷中作為一項參考。而P63對子宮內(nèi)膜復(fù)雜-不典型增生和癌都不敏感，在今后的研究中計劃加入正常子宮內(nèi)膜增生標(biāo)本進一步研究。

[1]Markowska A,Pawa?owska M,Filas V,et al.Does Metformin affect ER,PR,IGF-1R,β-cateninand PAX-2 expression inwomen with diabetesmellitus and endometrial cancer?[J].Diabetol Metab Syndr,2013,5(1):76.

[2]Brazowski E,Dotan I,Tulchinsky H,et al.Galectin-3 expression in pouchitis in patients with ulcerative colitis who underwent ileal pouch-anal anastomosis[J].Pathol Res Pract,2009,205(8):551-558.

[3]Pflaum J.Schlosserand S,Müller M.p53 family and cellular stress responses in cancer[J].Front Oncol,2014,4:285.

[4]Gonfloni S,Caputo V,IannizzottoV.P63 in health and cancer[J].Int J Dev Biol,2015,59(1/3):87-93.

[5]Liu PF,Gao Y,Huan J,et al.Upregulation of PAX2 Promotes the Metastasis of Esophageal Cancer through Interleukin-5[J].Cell Physiol Biochem,2015,35(2):740-754.