非小細(xì)胞肺癌中MMP-9和MMP-13的表達(dá)及臨床意義

葉麗新

目前, 肺癌已成為我國(guó)居民的重要死因, 其中肺癌患者中有80%左右屬于非小細(xì)胞肺癌, 其中以肺腺癌最為多見［1］。細(xì)胞的遷移會(huì)首先降解細(xì)胞外基質(zhì), 而基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)即是用以降解細(xì)胞外基質(zhì)的一組蛋白酶, 其在腫瘤的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移中的作用受到關(guān)注。MMP-9是MMPs家族中分子量最大的酶；MMP -13在MMPs 活化級(jí)聯(lián)反應(yīng)處于核心地位［2］。本研究檢測(cè)了非小細(xì)胞肺癌組織中MMP-9、MMP-13的表達(dá), 報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年5月～2017年5月本院收治的48例非小細(xì)胞肺癌患者, 納入標(biāo)準(zhǔn)：①滿18周歲；②術(shù)前未進(jìn)行放化療等治療；③簽署知情同意書。其中男32例,女16例, 年齡47～73歲, 平均年齡(55.71±7.69)歲；腺癌41例, 鱗癌7例；TNM分期：Ⅰ期13例, Ⅱ期30例, Ⅲ期5例；組織類型：低分化29例, 中分化10例, 高分化9例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移19例；腫瘤直徑：≤5 cm 28例, ＞5 cm 20例。

1.2 方法 在患者手術(shù)中切取癌組織, 同時(shí)切除距腫瘤切緣5 cm的正常組織作為癌旁組織, 經(jīng)甲醛固定、石蠟包埋,4 μm厚連續(xù)切片, 按試劑盒說明書行免疫組化染色, 鼠抗人MMP-9、MMP-13單克隆抗體均購自美國(guó)Biosource公司。依次完成脫蠟、修復(fù)、一抗孵育、二抗孵育、DAB顯色等,用磷酸緩沖鹽溶液(PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照。結(jié)果判讀：在200倍顯微鏡下選5個(gè)視野, 細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒表示陽性, 計(jì)算每個(gè)視野中陽性細(xì)胞的比例, ＜25%計(jì)1分,26%～50%計(jì)2分, 51%～75%計(jì)3分, ＞75%計(jì)4分。將著色得分與陽性細(xì)胞比例得分相乘, 最后取5個(gè)視野的平均值,＞2分為陽性結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo) 比較癌組織與癌旁組織中MMP-9、MMP-13的表達(dá)陽性率, 分析肺癌組織中MMP-9、MMP-13的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)；等級(jí)資料采用秩和檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 癌組織與癌旁組織中MMP-9、MMP-13的表達(dá) 癌組織中MMP-9表達(dá)陽性32例(66.7%)、MMP-13表達(dá)陽性28例(58.3%)；癌旁組織中MMP-9表達(dá)陽性4例(8.3%)、MMP-13表達(dá)陽性有1例(2.1%)；癌組織中MMP-9、MMP-13表達(dá)陽性與癌旁組織比較, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.2 肺癌組織中MMP-9、MMP-13的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 肺癌組織中MMP-9的陽性表達(dá)與分化程度、有無淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān) (Z/H=1.954、2.196, P＜0.05)；MMP-13的陽性表達(dá)與分化程度、淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)(Z/H=2.707、2.324,P＜0.05)；MMP-9、MMP-13的陽性表達(dá)均與性別、年齡、腫瘤直徑無關(guān)(Z/H=0.487、0.174、1.651及0.513、0.603、0.661,P＞0.05)。

3 討論

原發(fā)性肺癌是當(dāng)前全球病死率最高的惡性腫瘤, 世界衛(wèi)生組織(WHO)曾有報(bào)道, 每年多達(dá)110萬的患者是死于肺癌［3］。由于大量吸煙及環(huán)境改變, 肺癌已成為人群中常見的惡性腫瘤, 尤其好發(fā)于50～80歲的人群, 且越來越多的年輕人也難逃肺癌的魔爪。早期確診是肺癌的關(guān)鍵。

腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移是一個(gè)涉及基質(zhì)降解、腫瘤血管形成等多個(gè)步驟的復(fù)雜過程。MMPs是降解細(xì)胞外基質(zhì)的主要酶類, 一般分為分泌型MMPs與膜型MMPs, 既往研究表示, 分泌型MMPs表達(dá)越強(qiáng), 其降解ECM與基底膜的能力越強(qiáng), 腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)越大［4］。MMP-9即屬于分泌型MMPs, 能夠降解Ⅳ型膠原, 而Ⅳ型膠原正是構(gòu)成血管基底膜的重要成分；此外, 還能促進(jìn)新生血管形成, 這無疑對(duì)腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移起到了推波助瀾的作用［5］。本研究結(jié)果顯示, 肺癌組織中MMP-9的陽性表達(dá)比例明顯多于癌旁組織(P＜0.05)。既往研究表明, TNM分期越高、低分化以及伴隨淋巴轉(zhuǎn)移,MMP-9蛋白陽性表達(dá)越高, 提示MMP-9蛋白的表達(dá)對(duì)腫瘤的分化程度、侵襲與轉(zhuǎn)移有影響。本結(jié)果顯示, MMP-9的表達(dá)與腫瘤分化程度、有無淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)。

MMP-13 具有很強(qiáng)的蛋白水解酶活性, 密切參與細(xì)胞外基質(zhì)的重塑, 并可與 MMPs 家族中的其它成員相互作用參與腫瘤的發(fā)生與進(jìn)展［6］。既往研究發(fā)現(xiàn), MMP-13在頭頸部癌、軟骨肉瘤、肝癌、乳腺癌、胃腸道腫瘤等多種惡性腫瘤中都呈高表達(dá)［7］。研究表明［8］, MMP-13可能通過參與間質(zhì)成分較強(qiáng)的降解過程, 以促進(jìn)腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移；研究表明,MMP-13的表達(dá)與MMP-9成正相關(guān), 提示MMP-13可能通過調(diào)節(jié) MMP-9 的表達(dá)參與非小細(xì)胞肺癌的侵襲轉(zhuǎn)移。研究表明, 非小細(xì)胞肺癌MMP-13 表達(dá)陽性的患者死亡率是陰性患者的4倍左右, 提示MMP-13 對(duì)非小細(xì)胞肺癌的預(yù)后有重要的預(yù)測(cè)價(jià)值［9］。本研究結(jié)果顯示, 肺癌組織中MMP-13的陽性表達(dá)比例明顯高于癌旁組織(P＜0.05)。同時(shí), MMP-13的表達(dá)與腫瘤分化程度、有無淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)。表明MMP-9與MMP-13在非小細(xì)胞肺癌組織中表達(dá)上調(diào), 與腫瘤的分化、侵襲與轉(zhuǎn)移密切相關(guān), 而與腫瘤直徑無關(guān)。但既往有研究表明, 腫瘤越大, 分泌MMPs的能力越強(qiáng), 從而使MMPs 的級(jí)聯(lián)反應(yīng)激活, 增加腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移的可能性［10］。

綜上所述, MMP-9與MMP-13在非小細(xì)胞肺癌組織中表達(dá)上調(diào), 與腫瘤的分化、侵襲與轉(zhuǎn)移密切相關(guān), 值得大樣本進(jìn)一步研究。