小檗堿對多囊卵巢綜合征模型小鼠卵巢組織中腫瘤壞死因子-α、白介素-1β及白介素-6影響的研究

王玉閣，姚宏波，文麗波，李 雪，趙 堃*

（齊齊哈爾醫(yī)學院1.生理教研室；2組胚教研室，黑龍江 齊齊哈爾 161042）

多囊卵巢綜合征（polycystic ovarian syndrome，PCOS）是婦科較為常見的一種生殖內分泌紊亂性疾病，主要特征為卵泡發(fā)育障礙、不排卵或稀發(fā)排卵、高雄激素血癥、胰島素抵抗及卵巢多囊樣改變。隨著對PCOS機制深入的研究，發(fā)現PCOS患者還存在慢性炎癥，慢性低度炎癥亦是PCOS的重要特征[1]。有研究發(fā)現[2]，細胞炎性因子與PCOS的發(fā)生發(fā)展有密切關系，因此本研究通過觀察小檗堿對PCOS小鼠卵巢組織中TNF-α、IL-1β、IL-6表達的影響，來研究小檗堿改善多囊卵巢綜合征的機制。

1 材料與方法

1.1 材料

實驗動物：30天齡雌性C57BL/6J小鼠48只，購于齊齊哈爾醫(yī)學院實驗動物中心。

1.2 主要試劑

硫酸脫氫表雄酮，浙江仙居君業(yè)藥業(yè)有限公司；注射用大豆油、二甲雙胍

及小檗堿，湖北遠成藥業(yè)有限公司；兔抗鼠TNF-α多克隆抗體、兔抗鼠IL-1β多克隆抗體及兔抗鼠IL-6多克隆抗體，萬類生物科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 多囊卵巢胰島素抵抗模型的制備

實驗動物適應性喂養(yǎng)5天后開始實驗。隨機分為對照組和模型制備組，模型制備組小鼠每日頸背部皮下注射脫氫表雄酮7毫克/100克（采用醫(yī)用大豆油配制），對照組每日注射等量的醫(yī)用大豆油，模型制備組每日給予60%高脂飲食，對照組給予正常飲食。從給藥后第11天開始晨起進行陰道脫落細胞涂片，連續(xù)10天，觀察動情周期，陰道上皮細胞持續(xù)10天為角化狀態(tài)的小鼠為誘導成功的模型。將造模成功的小鼠隨機分為模型對照組、二甲雙胍組、小檗堿組。

1.3.2 給藥方法

灌胃法給藥21天，給藥劑量按參考文獻方法換算[3]，小檗堿按每天75 mg/kg灌胃，二甲雙胍按每天100 mg/kg進行灌胃，正常對照組和模型對照組每天給予同體積蒸餾水灌胃，均為每天1次，連續(xù)灌服21天。

1.3.3 指標檢測

給藥后第22天，將小鼠隔夜禁食，脫頸椎法處死小鼠，取雙側卵巢，采用免疫組化法測定卵巢組織局部TNF-α、IL-1β、IL-6表達水平。

1.4 統計學方法

采用SPSS 16.00分析軟件進行處理，數據均采用（x± s）表示。兩組間結果比較經t檢驗，以P＜0.05為有統計學意義。

2 結 果

免疫組化陽性指數=陽性面積×光密度值/總面積[4]，模型組TNF-α、IL-1β、IL-6陽性表達均明顯高于正常組（P＜0.01）；小檗堿組TNF-α、IL-1β、IL-6陽性表達均低于模型組（P＜0.05）；二甲雙胍組TNF-α、IL-6陽性表達亦均低于模型組（P＜0.05）；小檗堿組TNF-α、IL-1β、IL-6陽性表達與二甲雙胍組比較無顯著性差異（P＞0.05）。結果見圖1。

圖1 各組小鼠卵巢組織IL-1β、IL-6及TNF-α表達情況

3 討 論

小檗堿（berberine），又稱黃連素，是從毛茛科黃連屬植物三角葉黃連、黃連或云連的根莖中提取出的一種異喹啉類生物堿。近年的研究表明，小檗堿具有抗菌消炎的作用，還有降低血糖，增加胰島素敏感性，改善胰島素抵抗，因此應用于2型糖尿病的治療，且療效確切[5]。在PCOS治療中，小檗堿在降低空腹胰島素、腰臀比、膽固醇水平、低密度脂蛋白方面優(yōu)于二甲雙胍，在降低空腹血糖、胰島素抵抗指數、體質指數、總睪酮水平及升高高密度脂蛋白膽固醇水平方面的療效與二甲雙胍相同[6]。

有研究發(fā)現，PCOS患者中某些炎癥因子水平升高，說明在PCOS發(fā)生發(fā)展中可能存在低度慢性炎癥。并且這種低度慢性炎癥與PCOS遠期并發(fā)癥（如糖尿病和心血管疾?。┑陌l(fā)生發(fā)展也有密切聯系[7-8]。而本研究采用脫氫表雄酮聯合高脂飲食誘導C57BL/6J雌性小鼠建立PCOS動物模型，觀察到模型對照組小鼠TNF-α、IL-1β、IL-6表達情況明顯高于正常對照組，而采用小檗堿治療后，TNF-α、IL-1β、IL-6表達情況有顯著的降低，提示小檗堿可通過降低卵巢局部炎癥因子，來改善卵巢炎癥微環(huán)境，進而改善多囊卵巢綜合征癥狀，而小檗堿對炎癥因子影響作用的具體相關分子機制有待進一步研究。

[1] Dunaif A.Insulin resistance and the polycystic ovary syndrome∶mechanism and implications for pathogenesis[J].Endocrine Reviews,1997,18(6)∶774-800.

[2] Kelly CC,Lyall H,Petrie JR,et al.Low grade chronic in flammation in women with polycystic ovarian syndrome[J].J Clin Endocrinol Metab,2001,86(6)∶2453-2455.

[3] 黃繼漢,黃曉暉,陳志揚,鄭青山,孫瑞元.藥理試驗中動物間和動物與人體間的等效劑量換算[J].中國臨床藥理學與治療學,2004,(09)∶1069-1072.

[4] Seo AN,Park TI,Jin Y,et al.Novel EGFR mutation-speci ficantibodies for lung adenocarcinoma∶Highly speci fi c but not sensitive detection of an E746_A750 deletion in exon 19 and an L858R mutation in exon 21 by immunohistochemistry[J].Lung Cancer,2014,83(3)∶316-323.

[5] YIN J,XINU H,YE J.Ef fi cacy of bcrbcrinc in palicnts with type 2 diabetes mellitus[J].Metabolism,2008,57(5)∶712-717.

[6] 劉 偉.黃連素聯合加減蒼附導痰湯對肥胖型PCOS患者的血清MCP-1水平的影響[D].廣州中醫(yī)藥大學,2015.

[7] Bohler H Jr,Mokshagundam S,Winters SJ.Adipose tissue and reproduction in women[J].Fertil Steril,2010,94(3)∶795.

[8] 陳子江,徐興華.慢性炎癥機制與多囊卵巢綜合征[J].國際婦產科學雜志,2010,37(06)∶380-382+393.