藏雞致病沙門菌耐藥性分析及質(zhì)粒基因檢測探析

蔣衛(wèi)國

（湖南省常德市澧縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所415500）

1 試驗材料與方法

1.1 菌株與藥敏紙片

本次試驗中所使用的菌株源于西藏山南市隆子縣隆子鎮(zhèn)新巴村，從中選取14株致病性沙門菌。由西藏山南試驗室提供大腸桿菌。本次試驗的主要應(yīng)用試劑為MH瓊脂培養(yǎng)基、LB及MH肉湯培養(yǎng)基等。主要應(yīng)用到的藥敏紙片為頭孢唑啉、CFP、鏈霉素、AMK、多西環(huán)素、SPT等。

1.2 藥物敏感性試驗

本次試驗主要采用瓊脂紙片擴(kuò)散方式對藏雞致病性沙門菌進(jìn)行藥物敏感性試驗，將大腸桿菌作為質(zhì)控菌株。在引物設(shè)計與合成方面，根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)資料中記載，采用相應(yīng)設(shè)計方式，將沙門菌耐藥基因引物擴(kuò)展到20種，并且由西藏山南桑日縣實驗中心負(fù)責(zé)合成。

1.3 PCR擴(kuò)增分析

將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與10g/L的瓊脂糖融合之后，通過凝膠成像儀對其進(jìn)行觀察，確定其為耐藥基因陽性菌株。從試驗樣本中隨機(jī)抽取2株，然后將PCR產(chǎn)物的試劑回收后送至相關(guān)單位進(jìn)行檢測，將最終檢測結(jié)果與耐藥基因序列進(jìn)行對比分析。

2 試驗過程

為了對藏雞致病性沙門菌的耐藥性進(jìn)行分析，主要采用PCR擴(kuò)增技術(shù)對其進(jìn)行耐藥表型及質(zhì)粒耐藥基因進(jìn)行檢測，通過藥敏試驗、質(zhì)?；蛟囼灥确绞将@得最終結(jié)果。

2.1 藥敏試驗

將14株藏雞致病性沙門菌與抗菌藥物進(jìn)行試驗，分離株對85.71%含量的氨芐西林耐藥性最強(qiáng)，然后是78.57%的阿莫西林，71.43%的復(fù)方新諾明、42.86%的四環(huán)素等。全部菌株對于頭孢唑啉、丁胺卡那敏感，在13株分離菌當(dāng)中，對3類以上藥物耐藥的情況稱之為是多重耐藥，在本次試驗中發(fā)現(xiàn)，其比例為92.86%。

2.2 質(zhì)粒耐藥基因試驗

將14株藏雞致病性沙門菌進(jìn)行質(zhì)粒耐藥基因試驗，從分離株中檢測出其具有 blaXOA、blaDHA、blaCMY-2等11種質(zhì)粒耐藥基因，并沒有檢測出blaACC、blaFOX、blaSHV等質(zhì)粒耐藥基因。將acc(6')-Ib-cr與blaTEM與產(chǎn)物進(jìn)行測定后，檢測結(jié)果顯示，其擴(kuò)增序列與耐藥物基因序列相對比，在同源性方面達(dá)到99%。

3 試驗結(jié)果

在耐藥表型與質(zhì)粒耐藥基因之間的相關(guān)性方面，將14株藏雞致病性沙門菌耐藥表型與基因進(jìn)行試驗，在所有分離株當(dāng)中，除了其中1株沒有表現(xiàn)出耐藥表型，并且具有acc(6')-Ib-cr外，其他13株有4～8株具有多重耐藥性，且有超過兩種質(zhì)粒耐藥基因。近年來，藏雞中沙門菌的耐藥性問題成為相關(guān)行業(yè)中關(guān)注的重點話題，對養(yǎng)殖場構(gòu)成嚴(yán)重威脅，造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。通過上述試驗研究得出，阿莫西林、四環(huán)素、多西環(huán)素等藥物具有較強(qiáng)耐藥性。其中，阿莫西林耐藥率為78.15%，中介率為14.29%，敏感率為7.14%；四環(huán)素的耐藥率為64.29%，中介率為21.43%，敏感率為14.29%；多西環(huán)素耐藥率為42.86%，中介率為28.57%，敏感率為28.57%；頭孢哌酮的耐藥率為0，中介率為7.41%，敏感率為92.86%；雖然頭孢哌酮不具備耐藥性，但其中介率較高，這將意味著在藥物壓力下，分離菌將會向耐藥菌發(fā)生轉(zhuǎn)變，進(jìn)而致使耐藥率上升。另外，大部分菌株都具備多重耐藥性，對超過3類抗菌藥物呈現(xiàn)出耐藥反應(yīng)，這也充分說明試驗中養(yǎng)雞場的致病性沙門菌多重耐藥現(xiàn)象較為嚴(yán)重。當(dāng)同一質(zhì)粒對ESBLs及AmpC酶進(jìn)行介導(dǎo)時，將被稱為是超廣譜β內(nèi)酰胺酶，此類細(xì)菌將對所有類型抗生素藥物具有耐藥作用。在本次試驗當(dāng)中，有64.57%的菌株中被檢測出攜帶有上述兩種基因，據(jù)此可以推測出，這兩種基因很可能存在于同一種質(zhì)粒中，并且能共同參與到內(nèi)酰胺酶的耐藥機(jī)制中。

4 結(jié)束語

綜上所述，藏雞致病性沙門菌問題將對養(yǎng)殖場運(yùn)營產(chǎn)生重大影響，因此，對此方面展開試驗調(diào)查顯得十分必要。在本次試驗中共得到57.25%的質(zhì)粒耐藥基因，通過試驗檢測后能得出，當(dāng)陽性基因接合之后，大多數(shù)得到供體菌的相應(yīng)抗性表型，這將意味著對上述藥物進(jìn)行介導(dǎo)的耐藥基因可能與質(zhì)粒處于不同的細(xì)菌中，并且將以較高的頻率發(fā)生水平轉(zhuǎn)移。