重組禽流感病毒 （H5+H7）二價(jià)滅活疫苗免疫效果評(píng)估

高蕓 董釗 田慶雷 權(quán)亞瑋

（陜西省西安市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 710000）

近年全國(guó)各地畜間H7動(dòng)物流感形勢(shì)嚴(yán)峻，疫情呈點(diǎn)狀發(fā)生，陜西省部分地區(qū)也出現(xiàn)了養(yǎng)雞場(chǎng)H7N9疫情[1]。動(dòng)物流感的疫情及監(jiān)測(cè)陽性動(dòng)物不僅對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)造成損失，更對(duì)整個(gè)養(yǎng)禽業(yè)及相關(guān)貿(mào)易造成長(zhǎng)期的消極影響。更為重要的是高致病性禽流感及H7動(dòng)物流感還對(duì)公共衛(wèi)生造成嚴(yán)重威脅[2]。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部要求從2017年秋季防疫起實(shí)施家禽重組禽流感病毒 （H5+H7）二價(jià)滅活疫苗強(qiáng)制免疫，實(shí)現(xiàn)一次免疫同時(shí)防控H5和H7兩種亞型禽流感流行毒株的目的[3]。西安市也按照要求，首次采用該二價(jià)滅活苗對(duì)所轄區(qū)域內(nèi)的家禽實(shí)施了強(qiáng)制免疫，為了掌握該二價(jià)滅活苗的免疫效果，了解抗體變化情況，對(duì)免疫地區(qū)的部分區(qū)域的免疫效果進(jìn)行評(píng)估，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)疫苗與試劑

疫苗：政府招標(biāo)采購的重組禽流感病毒 （H5+H7）二價(jià)滅活疫苗，肇慶大華生產(chǎn)，批號(hào)0172103J；新城疫弱毒疫苗，楊凌綠方生產(chǎn)，批號(hào)20161218。

試劑：禽流感病毒H7亞型血凝抑制試驗(yàn)抗原 （H7N9株），哈爾濱維科生產(chǎn)，批號(hào)2017012；禽流感病毒H5亞型血凝抑制試驗(yàn)抗原 （Re-8株），哈爾濱維科生產(chǎn)，批號(hào)2017001；新城疫血凝抑制試驗(yàn)抗原，哈爾濱維科生產(chǎn)，批號(hào)2017062。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 預(yù)實(shí)驗(yàn)

將40只雞按照疫苗說明書進(jìn)行禽流感免疫；另設(shè)5只雞作為對(duì)照組。免疫后每天觀察有無副反應(yīng)。于免疫后第22天翅靜脈采全血，自然析出血清，-20℃保存。采用HA/HI試驗(yàn)（GB/T18936-2003）對(duì)血清樣品進(jìn)行H7亞型禽流感血凝抑制抗體 （H7-Ab）及H5亞型禽流感血凝抑制抗 (H5-Ab)檢測(cè)，抗體滴度≥4log2時(shí)，判為合格。

1.2.2 臨床試驗(yàn)

在全市隨機(jī)選取32個(gè)采用政府招標(biāo)疫苗的場(chǎng)戶作為采樣點(diǎn)，其包括15個(gè)規(guī)模場(chǎng)及17個(gè)散養(yǎng)戶，進(jìn)行禽流感及新城疫免疫。試劑、方法及抗體滴度合格標(biāo)準(zhǔn)同上。

根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算抗體的個(gè)體合格率及群體合格率。其中群體合格率為個(gè)體合格率≥70%的場(chǎng)群數(shù)占總場(chǎng)群數(shù)的百分比；計(jì)算臨床試驗(yàn)3組抗體平均滴度。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 抗體血凝抑制抗體效價(jià)

檢測(cè)40份血清樣本H5-Ab、H7-Ab抗體合格率均為100.00%。其中H5-Ab抗體效價(jià)在8log2～10log2之間分布，且10log2占效價(jià)的62.5%，H7-Ab抗體效價(jià)在5log2～10log2之間分布，主要集中在6log2～8log2。對(duì)照組樣本H7-Ab及H5-Ab效價(jià)均為陰性。

2.1.2 免疫副反應(yīng)

在觀察期內(nèi)試驗(yàn)動(dòng)物未見免疫副反應(yīng)。

2.2 臨床試驗(yàn)

2.2.1 H5-Ab檢測(cè)結(jié)果

共檢測(cè)360份血清，其中規(guī)模場(chǎng) （15）和散養(yǎng)戶 （17）個(gè)體合格率、群體合格率都達(dá)到100.00%。

2.2.2 H7-Ab檢測(cè)結(jié)果

共檢測(cè)360份血清，個(gè)體合格率94.16% （339/360）；群體合格率90.62% （29/32）。其中規(guī)模場(chǎng)個(gè)體合格率、群體合格率均為100.00%。散養(yǎng)戶個(gè)體合格率83.20%(104/125)；群體合格率 82.35% （14/17）。

2.2.3 NDV-Ab檢測(cè)結(jié)果

共檢測(cè)360份血清，個(gè)體合格率96.67% （348/360）；群體合格率96.87% （31/32）。其中規(guī)模場(chǎng)個(gè)體合格率99.57% （234/235）；群體合格率 100.00% （15/15）。散養(yǎng)戶個(gè)體合格率91.20% （114/125）； 群體合格率94.12% （16/17）。

2.2.4 H5-Ab、H7-Ab及NDV-Ab效價(jià)分布情況

H5-Ab及NDV-Ab的效價(jià)在10log2所占的比例較高，分別為89.72%及76.39%；而H7-Ab主要集中在效價(jià)6log2～10log2范圍內(nèi)。經(jīng)過計(jì)算H5-Ab、H7-Ab、NDV-Ab平均效價(jià)分別為9.74log2、 7.51log2、 9.08log2。

3 討論

預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果表明該疫苗在試驗(yàn)動(dòng)物免疫后22d H5-Ab及H7-Ab水平均在農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的70%以上，且未見免疫副反應(yīng)，該疫苗產(chǎn)生抗體時(shí)間較快，安全性好。臨床試驗(yàn)中H5-Ab及NDV-Ab效果理想，無論是規(guī)模場(chǎng)還是散養(yǎng)戶的個(gè)體合格率或群體合格率均達(dá)到很高的水平，個(gè)體合格率分別為100%及96.67%；環(huán)比2017上半年使用單苗免疫效果集中檢測(cè)（H5-Ab個(gè)體合格率：99.73%；NDV-Ab：99.46%）及同比2016下半年單苗免疫效果集中檢測(cè) （H5-Ab個(gè)體合格率：99.45%；NDV-Ab：99.18%）結(jié)果相比差異不顯著。此外H5-Ab及NDV-Ab達(dá)到10log2所占分別為89.72%及76.39%，樣本的整體效價(jià)極高，表明該疫苗能產(chǎn)生高的H5-Ab且對(duì)NDV疫苗免疫沒有負(fù)面影響。

H7-Ab所產(chǎn)生的抗體效價(jià)大多集中在6log2～10log2范圍內(nèi)，而10log2滴度僅占27.22%。說明該疫苗雖然在臨床試驗(yàn)中整體能達(dá)到70%以上的合格水平，相比于H5-Ab及NDV-Ab水平，其所產(chǎn)生的抗體平均滴度較低，加之散養(yǎng)戶在冷鏈及操作存在的不規(guī)范導(dǎo)致合格率較低，應(yīng)及時(shí)調(diào)查免疫失敗原因及時(shí)補(bǔ)免并繼續(xù)開展免疫效果評(píng)價(jià)。