不同NaCl濃度微咸水灌溉對棉花幼苗生理特性的影響①

董元杰，陳為峰，王文超，王慧橋，諸葛玉平

(山東農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境學(xué)院，山東泰安 271018)

土壤鹽漬化是由自然或人類活動引起的一種主要的環(huán)境風(fēng)險，全球大約有8.31億hm2的土壤受到鹽漬化的威脅。我國鹽漬土總面積約3 600萬hm2，占全國可利用土地面積的4.88%[1]。因而，開發(fā)利用鹽堿地具有重要意義，可以緩解我國當(dāng)前嚴(yán)重的人地矛盾。

進(jìn)入21世紀(jì)以來，中國水資源供需矛盾越來越突出。在我國的華北、西北以及沿海地帶，微咸水資源豐富，利用率低，研究微咸水資源的安全利用，可促進(jìn)鹽堿地的開發(fā)利用，有效緩解淡水資源短缺的危機[2]。在利用微咸水代替淡水灌溉方面，前人進(jìn)行了很多有益的探索。研究表明，咸水畦灌和溝畦輪灌均造成土壤積鹽，連續(xù)利用3 g/L 的微咸水灌溉，會造成土壤表層鹽分的累積，并會使作物受到鹽分脅迫，微咸水灌溉條件下，堿土的水分和鹽分運移與入滲水礦化度均呈正相關(guān)關(guān)系[3-7]。不同鹽分濃度微咸水處理對番茄生長指標(biāo)葉綠素含量和產(chǎn)量沒有明顯的影響，利用微咸水灌溉能夠增加土壤濕度，促進(jìn)作物生長，但同時也能增加土壤中的鹽分含量。如灌溉措施不當(dāng)，可能會造成土壤的次生鹽漬化，給作物造成鹽分脅迫[8-9]。因而，選擇適當(dāng)?shù)奈⑾趟疂舛?，避免咸水鹽分對植物產(chǎn)生鹽脅迫是合理利用微咸水灌溉的關(guān)鍵。

棉花屬于耐鹽性較強的一類作物，是鹽堿地農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的先鋒作物，但棉花苗期耐鹽性差，仍然要受到不同程度的鹽害。隨著糧食安全問題倍受重視和糧棉爭地矛盾日益顯現(xiàn)，濱海鹽土區(qū)棉花的地位也越來越重要[10-11]。而中國東部濱海鹽土區(qū)廣泛分布的淺層微咸水為耐鹽性較強的棉花適時播種以及抑制土壤返鹽提供了條件。為此，前人針對微咸水在棉花灌溉上的利用和棉花耐鹽機理進(jìn)行了較多的探討。王艷娜等[10]、阮明艷等[11]及呂寧等[12]發(fā)現(xiàn)滴灌微咸水對棉花干物質(zhì)積累量影響不大，但棉花生育進(jìn)程出現(xiàn)滯后[10-12]。Liu等[13]的研究表明，NaCl脅迫下，棉花幼苗生長受到了不同程度的抑制，葉綠素遭到破壞，抗氧化酶活性提高，H2O2、丙二醛(MDA)等逆境物質(zhì)的積累量增加。上述研究多集中于西北鹽堿土區(qū)和實驗室的相關(guān)研究，目前對東部濱海鹽土區(qū)棉花微咸水灌溉的相關(guān)研究報道較少。

本研究針對山東省濱海鹽土區(qū)淡水資源缺乏造成的棉花出苗難，成苗率低，棉苗生長受抑制，產(chǎn)量品質(zhì)低的生產(chǎn)困境，在濱海鹽土區(qū)實地采集土壤樣品，進(jìn)行盆栽試驗，用不同咸度微咸水澆灌，探討了不同咸度微咸水對棉花發(fā)芽率及幼苗生理特性的影響，以探討濱海鹽土區(qū)棉花幼苗適宜的微咸水灌溉濃度，明確濱海鹽土區(qū)棉花幼苗微咸水灌溉的可行性，為濱海鹽堿土區(qū)淺層咸水資源與鹽堿地資源的開發(fā)利用和濱海鹽土區(qū)的棉花生產(chǎn)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計

盆栽試驗在山東農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境學(xué)院植物營養(yǎng)系日光溫室進(jìn)行。供試土壤采自黃河三角洲山東省濱州市無棣縣的渤海糧倉試驗示范基地的濱海鹽土。土壤基本性狀為：全鹽含量3.1 g/kg，全氮1.31 g/kg，有效磷12.17 mg/kg，速效鉀533.45 mg/kg，pH 7.84，有機質(zhì)14.64 g/kg；土壤顆粒組成：＜0.001 mm 2 g/kg，0.001～0.005 mm 10 g/kg，0.005～0.01 mm 30 g/kg，0.01～0.05 mm 580 g/kg，0.25～1 mm 5.6 g/kg，0.05～0.25 mm 372.4 g/kg；容重 1.25 g/cm3，比重2.53，孔隙度 50.72%。

供試土壤取樣點山東省濱州市無棣縣氣候特點為典型的大陸性半干旱半濕潤季風(fēng)氣候，光照充足，四季分明，雨熱同期，年平均日照時數(shù)為2 736.1 h，全年平均氣溫 12.5 ℃，多年平均無霜期 205 d，降水年際變化大，年內(nèi)分配不均勻，雨量主要集中在夏季，年蒸發(fā)量是年降水量的 2.3 倍。

試驗用塑料盆，每盆裝過 5 mm 篩的風(fēng)干土2.5 kg。供試棉花品種為“山農(nóng)豐抗棉6號”。盆栽試驗于2016年4月10日播種，每盆播種10粒，最后留苗5株。出苗后用蒸餾水培養(yǎng)至棉苗頂土出苗子葉未展開，然后再用微咸水進(jìn)行處理。微咸水澆灌試驗設(shè)4個處理包括：CK：蒸餾水；T1：2 g/L NaCl溶液；T2：3 g/L NaCl溶液；T3：4 g/L NaCl溶液，每個處理重復(fù)4次。

試驗前測定土壤的田間持水量(作為灌水量的依據(jù))，出苗后每隔2 d 灌水1次，通過稱量盆和土的重量確定試驗處理的灌水量，當(dāng)土壤含水量降到最大持水量的50%～60% 時，統(tǒng)一補水至田間持水量的90%～100%，保持每盆用水量一致。整個試驗期間共處理7次，處理過程中定期交換位置以保證每盆所受環(huán)境影響一致。

1.2 測定項目與方法

發(fā)芽率：在直徑10 cm培養(yǎng)皿中加一張濾紙，再加入15 ml相應(yīng)濃度NaCl溶液，每處理播種10粒，置于溫度為25 ℃±1 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng), 每天更換NaCl溶液(發(fā)芽率試驗用微咸水同盆栽試驗)。第 7天統(tǒng)計發(fā)芽率[14]。

形態(tài)指標(biāo)：鮮重和干重采用天平稱重法。微咸水處理20 d后，收獲植株并將地上部和地下部分開，蒸餾水沖洗干凈，稱鮮重；然后在110 ℃下殺青，70 ℃烘干至恒重，測干重。株高和根長采用常規(guī)直尺測量法[14]。

生理生化指標(biāo)：葉綠素含量采用乙醇提取-紫外分光光度法測定；超氧化物歧化酶(SOD)活性用氮藍(lán)四唑(NBT)法測定；過氧化物酶(POD)活性采用愈創(chuàng)木酚法測定；過氧化氫酶(CAT)活性采用紫外吸收法測定。丙二醛(MDA)含量測定采用硫代巴比妥酸法測定，可溶性蛋白含量采用考馬斯亮藍(lán)法測定[13]。游離脯氨酸(Pro)含量采用酸性水合茚三酮法測定。超氧陰離子(O2·-)產(chǎn)生速率采用羥胺氧化反應(yīng)法測定；H2O2含量參照Patterson等[14]的方法測定。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2003軟件處理數(shù)據(jù)和繪圖，采用DPS 7.05軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，采用最小顯著極差法(LSD)進(jìn)行差異顯著性檢驗(P＜0.05)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同 NaCl濃度微咸水對棉花種子發(fā)芽率的影響

由圖1可見，與CK相比，T1和T2處理降低了棉花種子的發(fā)芽率，但差異未達(dá)顯著水平(P＞0.05)，說明用NaCl濃度為2 g/L 和3 g/L 的微咸水澆灌不會嚴(yán)重抑制棉花種子的發(fā)芽。T3處理與 CK相比，種子發(fā)芽率顯著降低26.09%(P＜0.05)，說明NaCl濃度為4 g/L 的微咸水嚴(yán)重抑制了棉花種子的發(fā)芽。

圖1 不同NaCl濃度微咸水對棉花發(fā)芽率的影響Fig. 1 Effects of brackish water under different NaCl concentrations on cotton germination

2.2 不同NaCl濃度微咸水對棉花幼苗生長的影響

由表1可知，與CK相比，不同NaCl濃度的微咸水對棉花幼苗的鮮重、株高、根長和干重都有一定的抑制作用。但是，T1處理各指標(biāo)的降低幅度均未達(dá)顯著水平(P＞0.05)，T1與T2處理各指標(biāo)的差異也未達(dá)到顯著水平(P＞0.05)。與 CK相比，T2處理鮮重、株高、根長和干重分別降低了19.55%、8.70%、37.96% 和29.41%；與T1處理相比，T2處理鮮重、株高、根長和干重分別降低了 25.77%、2.63%、37.96% 和29.41%。與CK相比，T3處理鮮重、株高、根長和干重分別顯著降低了34.08%、27.27%、38.26% 和35.29%。說明在NaCl濃度為2 g/L 的微咸水沒有顯著抑制棉花幼苗的生長，但當(dāng)NaCl濃度達(dá)到3 g/L 和4 g/L 時抑制了棉花幼苗的生長，特別是當(dāng)NaCl濃度達(dá)4 g/L 時嚴(yán)重抑制了棉花幼苗的生長。這可能是由于鹽脅迫條件下，植物碳同化物減少，滲透調(diào)節(jié)能耗和維持生長能耗增加，生長受到抑制所造成的。

表1 不同NaCl濃度微咸水對棉花幼苗生長的影響Table 1 Effects of brackish water under different NaCl concentrations on growths of cotton seedlings

2.3 不同 NaCl濃度微咸水對棉花幼苗葉綠素含量的影響

光合色素尤其是葉綠素在植物的光合作用中對光能的吸收、傳遞和轉(zhuǎn)化起著極為重要的作用[13]。由表2可知，不同NaCl濃度的微咸水均降低了總?cè)~綠素、葉綠素a、葉綠素b和類胡蘿卜素的含量。與CK相比，T2和T3處理顯著降低了總?cè)~綠素、葉綠素 a、葉綠素 b和類胡蘿卜素的含量(P＜0.05)，說明NaCl濃度為3 g/L 和4 g/L 的微咸水嚴(yán)重抑制了葉綠素的合成。

表2 不同NaCl濃度微咸水對棉花幼苗葉片葉綠素含量的影響Table 2 Effects of brackish water under different NaCl concentrations on chlorophyll contents of cotton seedling leaves

2.4 不同 NaCl濃度微咸水對棉花幼苗抗氧化酶活性的影響

由圖2可見，與CK相比，T1處理棉花幼苗葉片中SOD和POD的活性降低1.40% 和13.97%，CAT活性增加5.78% 。T2處理葉片中SOD和POD活性較 CK分別降低 3.82% 和 19.48%，CAT活性提高11.16%；T3處理較CK處理SOD和POD活性分別降低 13.78%、39.90%，CAT活性提高 15.04%。與 CK相比，T1處理對SOD和CAT活性的影響不顯著，但顯著降低了POD的活性，T2和T3處理顯著降低了SOD和POD活性，提高了CAT的活性。這表明NaCl濃度為2 g/L 的微咸水灌溉導(dǎo)致的輕度鹽脅迫沒有顯著降低抗氧化酶的活性，并且刺激棉花提高抗逆性從而提高其耐鹽能力，以維持其正常生長。但是，當(dāng)NaCl濃度大于 3 g/L 時，顯著降低了棉花幼苗抗氧化酶SOD和POD的活性，抑制了棉花幼苗的正常生長。

2.5 不同 NaCl濃度微咸水對棉花幼苗可溶性蛋白和游離脯氨酸(Pro)的影響

由圖3可見，T1處理的棉花幼苗葉片可溶性蛋白含量較 CK顯著提高了10.76%，說明植物為緩解鹽脅迫，使植物體內(nèi)積累大量的可溶性蛋白。T2和T3處理葉片中可溶性蛋白的含量較 CK分別顯著提高 19.15%、45.76%。表明鹽脅迫可提高棉花幼苗植株內(nèi)可溶性蛋白含量，且隨鹽脅迫程度的加重植株內(nèi)可溶性蛋白含量呈現(xiàn)出增加的趨勢，這可能是棉花應(yīng)對鹽脅迫的一種適應(yīng)性反應(yīng)。

圖2 不同NaCl濃度微咸水對棉花幼苗SOD、POD和CAT活性的影響Fig. 2 Effects of brackish water under different NaCl concentrations on activities of SOD, POD and CAT in Cotton Seedlings

植物在正常條件下，游離脯氨酸含量很低，但遇到逆境時，游離脯氨酸便會大量積累[15]。由圖3可見，與CK相比，T1處理植株的Pro含量沒有顯著增加，但是T2與T3處理分別顯著提高了190% 和467.52%。這表明NaCl濃度為2 g/L 時，植物沒有表現(xiàn)出很強的鹽脅迫反應(yīng)，而當(dāng)微咸水的濃度大于2 g/L 時，則表現(xiàn)出較強的鹽脅迫反應(yīng)。這也表明NaCl濃度為2 g/L 的微咸水灌溉不會對棉花幼苗的生長起到嚴(yán)重的脅迫作用。

圖3 不同NaCl濃度微咸水對棉花幼苗可溶性蛋白和脯氨酸含量的影響Fig. 3 Effects of brackish water under different NaCl concentrations on contents of soluble protein and proline in cotton seedlings

2.6 不同 NaCl濃度微咸水對棉花幼苗 H2O2含量、O2·- 產(chǎn)生速率和MDA含量的影響

由圖 4可見，在正常條件下，棉花幼苗葉片中H2O2產(chǎn)生速率較低，與CK相比，T1、T2和T3處理的植株葉片中H2O2含量均顯著提高，且隨鹽濃度的提高植株體內(nèi)鹽含量逐步增加。CK處理棉花幼苗O2·-產(chǎn)生速率在較低水平。與 CK 相比，T1、T2 與T3處理 O2·-產(chǎn)生速率分別增加 20.26%、8.09% 和6.78%，但 T1和T2處理的棉花幼苗O2·-產(chǎn)生速率差異不顯著。MDA是植物逆境脅迫下產(chǎn)生的一種膜脂過氧化產(chǎn)物，其含量高低反映了植物受傷害的程度。本研究結(jié)果顯示(圖4)，澆灌蒸餾水的CK處理棉花幼苗葉片中MDA含量較低，與CK相比，T1、T2和 T3處理的葉片中 MDA含量分別顯著提高11.15%、20.46% 和108.78%，但T1和T2處理差異不顯著。以上結(jié)果表明，澆灌不同濃度微咸水顯著提高了棉花幼苗葉片中 H2O2含量、O2·-產(chǎn)生速率 和MDA的含量，且隨灌溉微咸水鹽分濃度的增加其含量相應(yīng)呈現(xiàn)出上升趨勢。

圖4 不同NaCl濃度微咸水對棉花幼苗葉片中H2O2含量、O2·-產(chǎn)生速率和MDA含量的影響Fig. 4 Effects of brackish water under different NaCl concentrations on H2O2 concentrations, O2·- production rates and MDA contents of cotton seedlings leaves

3 討論

鹽脅迫會顯著降低棉花種子的發(fā)芽率[13]。但本試驗條件下T1和T2微咸水處理降低了棉花種子的發(fā)芽率但是沒有達(dá)到顯著水平，表明NaCl濃度為2 g/L 和 3 g/L 的微咸水澆灌不會嚴(yán)重抑制棉花種子的發(fā)芽。這可能是鹽脅迫抑制棉花種子發(fā)芽存在一定的濃度極限的原因，本試驗條件下，當(dāng)鹽濃度超過3 g/L 時，棉花種子發(fā)芽受到顯著抑制。

微咸水灌溉條件下，棉花幼苗生長受到了顯著的抑制作用，這與Liu等[13]的研究結(jié)果一致。鹽脅迫也顯著降低了植株葉片葉綠素的合成。有研究表明，葉綠素酶是葉綠素降解代謝中起關(guān)鍵作用的酶，NaCl 能增強葉綠素酶活性，加速葉綠素分解[14]。鹽脅迫下，植物細(xì)胞葉綠體和線粒體電子傳遞中泄漏的電子增加，活性氧大量產(chǎn)生。滲透脅迫下葉綠素的降解主要由活性氧的氧化損傷引起，而質(zhì)膜電解質(zhì)外滲的增加與脂質(zhì)過氧化速率呈顯著正相關(guān)[15]。本研究證實在鹽害的影響下，棉花的葉綠素含量明顯降低，但是澆灌NaCl濃度小于3 g/L的微咸水并沒有顯著抑制葉綠素的合成，這也可能是NaCl濃度2 g/L 的微咸水沒有顯著抑制棉花幼苗生長的主要原因(表1)。

在微咸水灌溉條件下，棉花幼苗遭受一定程度的鹽脅迫下，植物機能受到傷害，SOD的活性有一定的降低，POD的活性有明顯的降低，CAT的活性有一定的增加[13,16]。本試驗條件下微咸水灌溉對棉花幼苗SOD、POD、CAT活性的影響與上述結(jié)果一致，這可能是鹽脅迫下棉花自生的抗鹽反應(yīng)所造成的。

植物在逆境條件下，由于體內(nèi)活性氧代謝加強導(dǎo)致H2O2發(fā)生累積，H2O2能造成細(xì)胞膜損害，加快細(xì)胞衰老和解體[13,17]。植物能通過分子氧單電子還原過程，一些酶催化過程和低分子化合物的自動氧化，不斷地產(chǎn)生活性氧[13]。在正常情況下，植物體內(nèi)活性氧的產(chǎn)生與消除處于平衡狀態(tài)，不會造成細(xì)胞傷害，但是在逆境條件下，平衡會遭到破壞，引起過多活性氧的產(chǎn)生，過量的活性氧會引起細(xì)胞膜脂過氧化，造成細(xì)胞膜系統(tǒng)損傷或?qū)е录?xì)胞死亡[14-15]。為消除活性氧的傷害，植物體內(nèi)存在酶促和非酶促兩類防御活性氧損傷的保護(hù)系統(tǒng)，它們協(xié)同作用，防御活性氧等集團(tuán)對細(xì)胞膜系統(tǒng)的過氧化損傷，減輕鹽脅迫對植物細(xì)胞的傷害[16-17]。SOD 把 O2·-歧化為 H2O2，而 POD是清除H2O2的酶，所以SOD、POD和CAT是膜保護(hù)系統(tǒng)的重要酶類，能清除自由基，保護(hù)膜系統(tǒng)的完整性，以減輕鹽脅迫對植物的傷害[18]。在生物體內(nèi)， MDA的過多積累會引起蛋白質(zhì)、核酸等生命大分子的交聯(lián)聚合，且具有細(xì)胞毒性。O2·-性質(zhì)活潑，具有很強的氧化性和還原性，過量生成可損傷組織，在體內(nèi)主要通過SOD清除。本試驗研究表明澆灌NaCl濃度2g/L 的微咸水，抗氧化酶系統(tǒng)被激活(圖2)，逆境物質(zhì)的含量沒有大幅度提高。在本試驗條件下，用NaCl濃度低于3 g/L 的微咸水澆灌棉花幼苗，提高了抗氧化酶的活性，增強了植物鹽脅迫的耐受能力，但是沒有抑制棉花幼苗的生長(表1，圖 2，圖 4)。

4 結(jié)論

1) NaCl濃度為4 g/L 的微咸水嚴(yán)重抑制了棉籽發(fā)芽，而NaCl濃度為2～3 g/L 的微咸水沒有顯著降低棉籽的發(fā)芽率。

2) NaCl濃度為3 g/L 和4 g/L 微咸水灌溉顯著抑制了棉花幼苗的生長，降低了棉花幼苗的生長指標(biāo)與葉綠素含量；提高了抗氧化酶的活性、可溶性蛋白含量和游離脯氨酸含量；增加了O2·-產(chǎn)生速率、H2O2含量以及MDA積累量，并以NaCl濃度為4 g/L 的微咸水對棉花生長的抑制作用最為顯著，而NaCl濃度為2 g/L 的微咸水激活了棉花幼苗的耐鹽性，但對棉花幼苗的生長抑制作用不顯著。

3) 在黃河三角洲濱海鹽土上，棉花播種期和幼苗期可以用NaCl濃度為2 g/L 的微咸水代替淡水灌溉。

[1] 王佳麗, 黃賢金, 鐘太洋, 等. 鹽堿地可持續(xù)利用研究綜述[J]. 地理學(xué)報, 2011, 66(5): 673-684

[2] 張余良, 陸文龍, 張偉, 等. 長期微咸水灌溉對耕地土壤理化性狀的影響[J]. 農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報, 2006, 25(4):969-973

[3] 史曉楠, 王全九, 巨龍. 微咸水入滲條件下Philip模型與Green-Ampt模型參數(shù)的對比分析[J]. 土壤學(xué)報, 2007,44(2): 360-363

[4] 吳忠東, 王全九. 不同微咸水組合灌溉對土壤水鹽分布和冬小麥產(chǎn)量影響的田間試驗研究[J]. 農(nóng)業(yè)工程學(xué)報,2007, 23(11): 71-76

[5] 虎膽·吐馬爾白, 吳爭光, 等. 棉花膜下滴灌土壤水鹽運移規(guī)律數(shù)值模擬[J]. 土壤，2012, 44 (4): 665-670

[6] 王全九, 張繼紅, 譚帥. 微咸水入滲下施加PAM土壤水鹽運移特性研究[J]. 土壤學(xué)報, 2016,53(4):1056-1064

[7] 萬書勤, 康躍虎, 王 丹,等. 華北半濕潤地區(qū)微咸水滴灌對番茄生長和產(chǎn)量的影響[J]. 農(nóng)業(yè)工程學(xué)報, 2008,24(8): 30-35

[8] 趙秀芳, 楊勁松, 張清，等. 石膏-微咸水復(fù)合灌溉量對土壤水鹽分布特征的影響. 土壤, 2010, 42(6):978-982

[9] 曹彩云, 鄭春蓮, 孫景生, 等. 長期咸水灌溉對土壤理化性質(zhì)和土壤酶活性的影響[J]. 水土保持學(xué)報, 2014,28(3):172-176

[10] 王艷娜, 侯振安, 龔江, 等. 咸水滴灌對棉花生長和離子吸收的影響[J]. 棉花學(xué)報, 2007, 19(6): 472-476

[11] 阮明艷, 張富倉, 侯振安. 咸水膜下滴灌對棉花生長和產(chǎn)量的影響[J]. 節(jié)水灌溉, 2007(5): 14-16

[12] 呂寧, 侯振安, 龔江. 不同滴灌方式下咸水灌溉對棉花根系分布的影響[J]. 灌溉排水學(xué)報, 2007, 26(5): 58-62

[13] Liu S, Dong Y J, Xu L L, et al. Effects of foliar applications of nitric oxide and salicylic acid on salt-induced changes in photosynthesis and antioxidative metabolism of cotton seedlings[J]. Plant Growth Regulation, 2013, 73(1): 67-78

[14] 陳建勛, 王曉峰. 植物生理學(xué)實驗指導(dǎo)[M]. 廣州: 華南理工大學(xué)出版社, 2002: 119-127

[15] 周萬海, 師尚禮, 寇江濤. 外源水楊酸對苜蓿幼苗鹽脅迫的緩解效應(yīng)[J]. 草業(yè)學(xué)報, 2012, 21(3): 171-176

[16] Chen S F, Zhu Y L. Effects of NaCl stress on activities of protective enzymes, contents of osmotic adjustment substances and photosynthetic characteristics in grafted tomato seedings[J]. Acta Hort. Sin., 2005, 32(4):609-613

[17] Tian X Y, He M R, Wang Z L, et al. Application of nitric oxide and calcium nitrate enhances tolerance of wheat seedlings to salt stress[J]. Plant Growth Regulation, 2015, 77: 343-356