虹鱒傳染性造血器官壞死癥疫苗的應(yīng)用研究

文/孫玉芝 李小進(jìn) 胡傳偉 李征遠(yuǎn) 韓德武 李曉晨 王麗

虹鱒種魚(yú)注射IHN免疫滅活疫苗對(duì)虹鱒第二代苗種的母源抗體有效，苗種成活率提高了60%左右；為30克左右的虹鱒魚(yú)種注射虹鱒IHN免疫滅活疫苗，虹鱒成魚(yú)生產(chǎn)成活率在90%以上；本試驗(yàn)虹鱒魚(yú)免疫滅活疫苗的免疫有效期為18個(gè)月。

虹鱒是遼寧省養(yǎng)殖的主要冷水性魚(yú)類，分布在本溪、丹東、葫蘆島、遼陽(yáng)和鞍山市，近年來(lái)病害頻發(fā)，魚(yú)苗發(fā)病時(shí)的死亡率可達(dá)到90%，成為虹鱒魚(yú)養(yǎng)殖的瓶頸因素之一。遼寧省水產(chǎn)技術(shù)推廣總站2015年承擔(dān)了遼寧省海洋與漁業(yè)廳下達(dá)的《虹鱒魚(yú)綜合疾病防控措施的研究與初步應(yīng)用》項(xiàng)目，聯(lián)合本溪市漁業(yè)管理總站和遼寧出入境檢驗(yàn)檢疫局，研制虹鱒魚(yú)傳染性造血器官壞死癥疫苗，2015年～2017年應(yīng)用于生產(chǎn)，使虹鱒的發(fā)病死亡情況得到改善。

一、疫苗應(yīng)用技術(shù)路線

資料顯示虹鱒IHN可以水平傳播，即傳染源為感染攜帶IHN病毒的病魚(yú)，主要經(jīng)水傳播，也是病毒在稚魚(yú)和幼魚(yú)之間水平傳播的主要方式，此外還可經(jīng)過(guò)病毒污染的食物以及帶毒魚(yú)排泄物等傳播感染；虹鱒IHN也可以垂直傳播，即攜帶病毒的虹鱒種魚(yú)，可以把病毒傳染給第二代。

生產(chǎn)試驗(yàn)證實(shí)，虹鱒魚(yú)魚(yú)齡越小對(duì)IHN病毒越敏感，一般2月齡左右幼魚(yú)最易感染，且病程急，發(fā)病后死亡率高達(dá)50%～100%；成魚(yú)一般不發(fā)病，但可攜帶擴(kuò)散病毒。而1月齡～2月齡左右的稚魚(yú)因魚(yú)體太小，不能注射疫苗。

基于以上原因，我們?cè)O(shè)定虹鱒IHN免疫滅活疫苗的免疫程序是，在虹鱒種魚(yú)育卵期前為其注射虹鱒IHN免疫滅活疫苗，在母源免疫魚(yú)卵培育的虹鱒魚(yú)種長(zhǎng)到30g左右時(shí)，第二次為其注射虹鱒IHN免疫滅活疫苗，確保生產(chǎn)商品魚(yú)的成活率。

二、試驗(yàn)與結(jié)果

1.虹鱒疫苗母源免疫試驗(yàn)

2016年我們?cè)诤琪V種魚(yú)育卵期前對(duì)其注射了虹鱒IHN免疫滅活疫苗，2017年年初對(duì)采集的卵進(jìn)行培育、觀察、比對(duì)。2016年注射虹鱒免疫滅活疫苗的虹鱒種魚(yú)，受精、孵化發(fā)眼卵2.7萬(wàn)粒，分別在2家虹鱒魚(yú)養(yǎng)殖場(chǎng)孵化、養(yǎng)殖。

本溪縣宋爽虹鱒魚(yú)養(yǎng)殖場(chǎng)，孵化發(fā)眼卵1.7萬(wàn)粒左右，由于養(yǎng)殖場(chǎng)水溫長(zhǎng)年偏低（10℃左右），長(zhǎng)至2017年7月17日，培育10g魚(yú)苗15000尾左右，培育成活率非常理想；而其同期、同一漁場(chǎng)、同一水源孵化的20萬(wàn)粒虹鱒發(fā)眼卵，現(xiàn)僅培育魚(yú)苗2000尾左右，對(duì)比效果非常明顯。

遼寧省本溪縣金宥利虹鱒魚(yú)養(yǎng)殖場(chǎng)，孵化母源免疫魚(yú)卵1萬(wàn)粒左右，長(zhǎng)至2017年7月17日，培育20g虹鱒苗種6000尾左右，其中一批3000粒發(fā)眼卵由于虹鱒種魚(yú)沒(méi)有同步成熟，僅上浮20g苗種1000尾左右，試驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。

表1 虹鱒IHN免疫滅活疫苗母源免疫試驗(yàn)數(shù)據(jù)

試驗(yàn)結(jié)果表明，虹鱒種魚(yú)注射IHN滅活免疫疫苗采的卵到魚(yú)種培育成活率，比同期沒(méi)有注射疫苗的虹鱒種魚(yú)采的卵培育到魚(yú)種的成活率提高了60%左右，基本上就是無(wú)病魚(yú)苗孵化、培育的成活率，甚至略有提高，表明我們給種魚(yú)注射的IHN免疫滅活疫苗對(duì)虹鱒第二代免疫有效。

2.虹鱒疫苗魚(yú)種免疫試驗(yàn)

2017年年初，在不能確定母源免疫有效期長(zhǎng)短的情況下，按技術(shù)路線繼續(xù)在本溪縣宋爽虹鱒魚(yú)養(yǎng)殖場(chǎng)和本溪縣金宥利虹鱒魚(yú)養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行魚(yú)種免疫試驗(yàn)，為2016年母源免疫魚(yú)卵培育的30g左右的虹鱒魚(yú)種，注射虹鱒IHN滅活免疫疫苗，以保證生產(chǎn)虹鱒商品魚(yú)的成活率。

每個(gè)試驗(yàn)場(chǎng)的試驗(yàn)分3組：1組注射國(guó)產(chǎn)佐劑制作的虹鱒IHN免疫滅活疫苗，2組注射進(jìn)口佐劑制作的虹鱒IHN免疫滅活疫苗，3組是母源免疫魚(yú)卵孵化的魚(yú)苗組。

試驗(yàn)觀察至2017年11月16日，虹鱒從體長(zhǎng)12cm～16cm，體重20g～50g，長(zhǎng)至體長(zhǎng)17cm～26cm、體重75g～150g；除2組因疫苗保存問(wèn)題，背鰭注射后出現(xiàn)了針孔擴(kuò)大、紅腫進(jìn)而腐爛死魚(yú)的現(xiàn)象，2家漁場(chǎng)6組試驗(yàn)，均未出現(xiàn)因虹鱒魚(yú)IHN疫病爆發(fā)而大量死魚(yú)的現(xiàn)象。特別是本溪縣宋爽虹鱒魚(yú)養(yǎng)殖場(chǎng)幾組試驗(yàn)均未出現(xiàn)死魚(yú)現(xiàn)象，可能因?yàn)楸敬沃谱饕呙绲牟×萧~(yú)取自該漁場(chǎng)，金宥利虹鱒魚(yú)養(yǎng)殖場(chǎng)試驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。

試驗(yàn)結(jié)果表明，為30g左右的虹鱒魚(yú)種注射虹鱒IHN免疫滅活疫苗，效果理想，虹鱒成魚(yú)生產(chǎn)成活率在90%以上，達(dá)到了預(yù)期效果。

3.虹鱒IHN免疫滅活疫苗保質(zhì)期試驗(yàn)

表2 虹鱒疫苗魚(yú)種免疫試驗(yàn)數(shù)據(jù)

2017年8月，本溪縣金宥利虹鱒魚(yú)養(yǎng)殖場(chǎng)，試驗(yàn)虹鱒魚(yú)種背鰭注射疫苗處出現(xiàn)了針孔擴(kuò)大、紅腫，繼而腐爛的現(xiàn)象，死亡率20%左右。本次死亡魚(yú)注射的為進(jìn)口佐劑疫苗，使用時(shí)發(fā)現(xiàn)疫苗分層，搖晃后不能混合，注射后虹鱒魚(yú)出現(xiàn)了不吸收、死亡的現(xiàn)象。針對(duì)此現(xiàn)象，2017年9月8日，我們?cè)诒鞠h宋爽虹鱒魚(yú)養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行了滅活疫苗保質(zhì)期的試驗(yàn)。試驗(yàn)設(shè)計(jì)胸鰭和背鰭注射，疫苗選擇搖晃已不能混合和搖晃即可混勻的進(jìn)口佐劑疫苗。每組注射30尾。試驗(yàn)至2017年11月16日，背鰭注射疫苗的虹鱒魚(yú)種，出現(xiàn)了背鰭針眼擴(kuò)大、紅腫的現(xiàn)象，但后期愈合，沒(méi)有出現(xiàn)死魚(yú)。其它兩組魚(yú)種亦生長(zhǎng)正常。分析是因?yàn)樗嗡琪V魚(yú)養(yǎng)殖場(chǎng)水溫常年在8℃～10℃左右，水溫偏低虹鱒魚(yú)種沒(méi)有發(fā)生其它細(xì)菌的感染。試驗(yàn)數(shù)據(jù)如表3。

表3 虹鱒魚(yú)IHN免疫滅活疫苗保質(zhì)期試驗(yàn)數(shù)據(jù)

三、結(jié)論與分析

1.關(guān)于虹鱒傳染性造血器官壞死癥疫苗

（1）疫苗效果

進(jìn)口佐劑、國(guó)產(chǎn)佐劑制作的虹鱒IHN免疫滅活疫苗免疫效果基本相同，都對(duì)虹鱒感染傳染性造血器官壞死癥有預(yù)防效果。

（2）疫苗保質(zhì)期

本次進(jìn)口佐劑制作的疫苗易分層。

國(guó)產(chǎn)佐劑制作的疫苗建議保質(zhì)期1年；進(jìn)口佐劑制作的疫苗建議保質(zhì)期為6個(gè)月。4℃低溫保存。

牛、雞等遇到疫苗分層的情況都可搖勻后繼續(xù)使用，但魚(yú)出現(xiàn)了不吸收的現(xiàn)象，虹鱒魚(yú)背鰭注射疫苗處出現(xiàn)針孔擴(kuò)大、紅腫，繼而腐爛的現(xiàn)象，死亡率20%左右，已分層的疫苗能否應(yīng)用于魚(yú)類免疫要繼續(xù)觀察。

（3）注射位置

本溪縣金宥利虹鱒魚(yú)養(yǎng)殖場(chǎng)，于2016年9月中旬，通過(guò)背鰭注射虹鱒魚(yú)免疫滅活疫苗虹鱒魚(yú)種5000尾，經(jīng)過(guò)半年多的觀察，2017年7月份成活率達(dá)70%左右，雖然高于不注射虹鱒滅活免疫疫苗虹鱒魚(yú)種的成活率，但低于同期胸鰭注射虹鱒免疫滅活疫苗魚(yú)種成活率的20%左右，說(shuō)明疫苗胸鰭體腔注射比背鰭注射效果理想。2017年9月的疫苗保質(zhì)期試驗(yàn)，也是胸鰭注射效果明顯好于背鰭注射。魚(yú)類血液循環(huán)為開(kāi)放式的，胸鰭基部體腔注射，抗原進(jìn)入機(jī)體后，能充分的與血液中的免疫球蛋白（即抗體）結(jié)合，注射效果好。

（4）注射前麻醉

無(wú)論魚(yú)種、種魚(yú)注射疫苗前必須麻醉，麻醉是為了減少因注射對(duì)魚(yú)類產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)造成的傷害。我們采用的是乙二醇苯醚麻醉劑，注意合理用量及麻醉時(shí)間。劑量小麻醉時(shí)間長(zhǎng)，但加大劑量要掌握好度。建議一是虹鱒魚(yú)注射后用一次消毒殺菌劑；二是100kg水用乙二醇苯醚5mL，種魚(yú)適當(dāng)加量。

2.關(guān)于滅活免疫疫苗應(yīng)用

（1）虹鱒母源免疫有效

試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示種魚(yú)注射IHN滅活免疫疫苗后，采的卵到魚(yú)種培育成活率比同期沒(méi)有注射疫苗的種魚(yú)采的卵培育到魚(yú)種的成活率可高60%左右，證明虹鱒魚(yú)免疫滅活疫苗母源免疫有效。

（2）虹鱒魚(yú)種注射規(guī)格

虹鱒魚(yú)齡越小對(duì)IHN病毒越敏感，一般2月齡左右幼魚(yú)最易感染，且病程急，發(fā)病后死亡率高達(dá)50%～100%；野生幼魚(yú)感染后也會(huì)發(fā)?。怀婶~(yú)一般不發(fā)病，但可攜帶病毒。所以我們選擇30g左右虹鱒進(jìn)行疫苗注射。此時(shí)注射虹鱒滅活免疫疫苗，免疫效果更好。

（3）虹鱒免疫程序設(shè)定

虹鱒IHN免疫滅活疫苗的設(shè)定免疫程序是，在虹鱒種魚(yú)育卵期前為其注射虹鱒IHN免疫滅活疫苗，在母源免疫魚(yú)卵培育的虹鱒魚(yú)種長(zhǎng)到30g左右時(shí)，第二次為其注射虹鱒IHN免疫滅活疫苗，確保生產(chǎn)商品魚(yú)的成活率。試驗(yàn)達(dá)到了預(yù)期效果，證明我們?cè)O(shè)定的免疫程序合理、有效。

（4）疫苗的有效期初步確認(rèn)

2015年10月中旬注射虹鱒魚(yú)免疫滅活疫苗的虹鱒魚(yú)種，長(zhǎng)至2017年3月，體重達(dá)到1500g左右時(shí)爆發(fā)了IHN，死亡率40%，初步確認(rèn)本次IHN虹鱒免疫滅活疫苗的免疫有效期為18個(gè)月。

（4）預(yù)防魚(yú)病減少用藥

注射疫苗的虹鱒魚(yú)種或種魚(yú)一個(gè)月內(nèi)不能服用其它的口服漁用藥，否則影響免疫效果。