“瘦肉精”現(xiàn)場快速檢測技術(shù)研究進(jìn)展

劉映雪，王 虎

（遼寧省畜產(chǎn)品安全監(jiān)察所，遼寧 沈陽 110003）

人們生活水平日益提高，對食品安全的關(guān)注愈發(fā)強(qiáng)烈，2011年央視曝光雙匯“瘦肉精”事件后，對“瘦肉精”的專項(xiàng)整治工作推到一個前所未有的高度?！笆萑饩笔铅履I上腺受體激動劑類化合物的統(tǒng)稱，包括鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺等10余種物質(zhì)，用于治療支氣管哮喘、慢性支氣管炎和肺氣腫等疾病，有促生長、減少脂肪含量、提高瘦肉率等功效。食用含有“瘦肉精”的食物對人體有害，主要危害是出現(xiàn)肌肉震顫、心慌、戰(zhàn)栗、頭疼、惡心、嘔吐等癥狀，對高血壓、心臟病、甲亢和前列腺肥大等疾病患者危害更大，可導(dǎo)致死亡。

使用“瘦肉精”屬于違法行為，世界各國法規(guī)禁止將“瘦肉精”用于畜禽養(yǎng)殖，因“瘦肉精”價格低廉、效果顯著，有不法分子鋌而走險，使用“瘦肉精”的新聞報道依然出現(xiàn)。如何快速準(zhǔn)確的檢測“瘦肉精”成分，通過現(xiàn)場檢測快速篩查成為一項(xiàng)重要的監(jiān)督手段。本文將對“瘦肉精”現(xiàn)場快速檢測技術(shù)進(jìn)行綜述。

1 “瘦肉精”現(xiàn)場快速檢測的概念

短時間內(nèi)出具體檢測結(jié)果的行為稱之為快速檢測，“瘦肉精”現(xiàn)場快速檢測技術(shù)主要是通過現(xiàn)場收集動物尿液（豬尿、牛尿、羊尿），不需要樣品前處理，利用快速檢測試紙條進(jìn)行檢測。

2 “瘦肉精”現(xiàn)場快速檢測的意義

“瘦肉精”現(xiàn)場快速檢測是監(jiān)管人員的重要監(jiān)督手段，能在現(xiàn)場及時發(fā)現(xiàn)可疑問題，迅速采取措施，大大提高監(jiān)督工作效率，對保障食品安全有著重要意義?！笆萑饩爆F(xiàn)場快速檢測能夠提高實(shí)驗(yàn)室檢測的針對性及準(zhǔn)確率，能夠快速篩查出可疑樣品，有針對性的采集樣品，既能提高監(jiān)督效率，提升實(shí)驗(yàn)室工作效率，又能降低實(shí)驗(yàn)室樣品檢測費(fèi)用。“瘦肉精”現(xiàn)場快速檢測是實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測的有益補(bǔ)充。實(shí)驗(yàn)室受限于儀器設(shè)備、人員、時間等因素，對樣品檢測數(shù)量、速度有極大的限制，利用現(xiàn)場快速檢測，增加樣品檢測數(shù)量，擴(kuò)大食品安全控制范圍?，F(xiàn)場快速檢測出陽性的樣品送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)一步檢測，既能提高監(jiān)督覆蓋面，又減輕了實(shí)驗(yàn)室的工作壓力。

3 “瘦肉精”現(xiàn)場快速檢測技術(shù)種類

“瘦肉精”現(xiàn)場快速檢測技術(shù)主要為免疫層析技術(shù)，包括膠體金免疫層析技術(shù)和熒光微球免疫層析技術(shù)。

3.1 膠體金免疫層析技術(shù)

免疫層析技術(shù)是出現(xiàn)于20世紀(jì)80年代初期的一種獨(dú)特的免疫分析方式，以條狀纖維層析材料為固相，通過毛細(xì)作用使樣品溶液在層析條上泳動，通過抗原抗體結(jié)合的免疫反應(yīng)原理，層析過程中免疫復(fù)合物被富集或截留在層析材料的一定區(qū)域（檢測線），通過酶反應(yīng)或直接運(yùn)用可目測的標(biāo)記物（如膠體金）而得到直觀的實(shí)驗(yàn)結(jié)果（如檢測線出現(xiàn)不同顏色的條帶）；游離標(biāo)記物越過檢測線，達(dá)到與結(jié)合標(biāo)記物自動分離之目的。免疫層析技術(shù)常見的目測標(biāo)記載體有膠體金、乳膠、膠體硒等，運(yùn)用最成功的標(biāo)記物為膠體金。

目前，所建立的瘦肉精膠體金免疫層析檢測法存在缺陷。膠體金免疫層析法中，當(dāng)標(biāo)記物膠體金顆粒集聚到一定量時，能觀察到膠體金的紅色條帶，檢測靈敏度低，難以達(dá)到國家要求。不同的材料基質(zhì)效應(yīng)明顯，樣本背景干擾較大，易產(chǎn)生假陽性結(jié)果。采用肉眼判讀，當(dāng)檢測線顯色比較模糊時，可能引起誤判或漏判，檢測結(jié)果難以保存。結(jié)果沒有數(shù)據(jù)顯示且不能與物聯(lián)網(wǎng)相結(jié)合，所測結(jié)果難以進(jìn)入國家食品安全數(shù)據(jù)庫。

市面上檢測瘦肉精的膠體金檢測卡大致可以分為兩類：一類是定性檢測，其中基于消線法判斷的檢測卡一般靈敏度為2～5ppb，基于比色法判斷的檢測卡靈敏度為1～2ppb；一類是定量檢測卡，定量檢測范圍在0.3～10ppb，IC50為0.5～1ppb。定量檢測需要通過小型的膠體金讀取儀進(jìn)行結(jié)果讀取。膠體金檢測卡的特點(diǎn)是單份測定、簡單、快速、不需任何儀器設(shè)備、用肉眼觀察結(jié)果、經(jīng)濟(jì)實(shí)用、容易被基層掌握并大面積推廣。檢驗(yàn)實(shí)踐中，膠體金檢測卡被廣泛應(yīng)用于基層大量的篩查工作。

3.2 熒光微球免疫層析技術(shù)

熒光微球是直徑為0.01～10微米的采用較長熒光半衰期的稀土離子作為標(biāo)記物來制備的包裹熒光物質(zhì)的微球，表面連接有活性基團(tuán)，熒光過程是主動的過程，熒光強(qiáng)度依賴于供能的強(qiáng)度，即樣品熒光信號強(qiáng)度與激發(fā)信號強(qiáng)度成正比，采用高強(qiáng)度的光源可增強(qiáng)熒光物質(zhì)的靈敏度。再加上在二氧化硅納米微球中摻雜了量子產(chǎn)率較高的熒光染料，產(chǎn)生比膠體金大10倍以上的光信號，提高了檢測靈敏度。熒光微球提供了化學(xué)和機(jī)械穩(wěn)定性的保護(hù)屏障，減少所摻雜染料受到外界環(huán)境的干擾，提高光穩(wěn)定性，不易被光降解或漂白。比膠體金顯色更穩(wěn)定。對二氧化硅納米熒光微球表面進(jìn)行修飾，通過共價鍵與抗體結(jié)合，比膠體金與抗體的物理吸附法更穩(wěn)定。二氧化硅納米熒光微球顯色穩(wěn)定，不會隨著粒徑變化而改變。熒光微球試紙條對動物血液和尿液等基質(zhì)有較強(qiáng)的抗干擾性能。目前，市面上瘦肉精的熒光微球定量免疫層析檢測卡檢測范圍為0.05～5ppb，IC50為0.1～0.3ppb。

4 “瘦肉精”現(xiàn)場快速檢測在研技術(shù)

“瘦肉精”現(xiàn)場快速檢測在研技術(shù)主要是時間分辨免疫層析檢測技術(shù)。時間分辨熒光微球基于鑭系元素［如Eu（III）］標(biāo)記物制備的，時間分辨熒光免疫方法與傳統(tǒng)熒光分析方法相比具有獨(dú)特的優(yōu)勢。時間分辨指在延遲時間的幫助下區(qū)分有用的熒光信號和非特異性背景熒光。具有更大的斯托克斯位移（超過150納米）和更長的熒光壽命（長達(dá)1毫秒）的鑭系元素標(biāo)記的時間分辨熒光免疫測定可以減少非特異性熒光信號的干擾，獲得高靈敏度。時間分辨免疫層析試紙條在定量檢測瘦肉精時具有優(yōu)勢。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方法具有最低的LOD、最寬的線性范圍、最少的抗體探針和抗原用量和最短的檢測時間。確證分析該試紙條的檢測結(jié)果與商業(yè)ELISA試劑盒和LC～MS/MS分析結(jié)果具有顯著的相關(guān)性和一致性，表明該檢測方法的可靠性。食品安全領(lǐng)域，時間分辨免疫層析試紙條作為免疫層析方法中的新型標(biāo)記物有廣泛的應(yīng)用價值。該試紙條的檢測需要使用時間分辨熒光讀取儀進(jìn)行結(jié)果讀取。

5 前景展望

膠體金檢測試紙條操作簡單、快速、不用任何儀器設(shè)備、肉眼即可觀察結(jié)果以及較高性價比等特點(diǎn)被基層現(xiàn)場快速檢測工作中大量使用，受環(huán)境、溫度、人員操作等因素影響較大，易產(chǎn)生假陰性、假陽性甚至失效。結(jié)果的穩(wěn)定性不夠決定了膠體金試紙條只可應(yīng)用于初步大范圍大面積的篩查工作，無法推廣應(yīng)用到更深層次。熒光微球免疫層析技術(shù)穩(wěn)定性、抗干擾性、結(jié)果準(zhǔn)確率均要好于膠體金免疫層析技術(shù)，其操作復(fù)雜、結(jié)果讀取不便、成本較高等因素，導(dǎo)致在基層推廣應(yīng)用不利，在保證穩(wěn)定性、結(jié)果準(zhǔn)確率的基礎(chǔ)上進(jìn)一步優(yōu)化技術(shù)、控制成本，可進(jìn)一步進(jìn)行推廣普及。時間分辨免疫層析技術(shù)可媲美商業(yè)ELISA試劑盒和LC～MS/MS分析結(jié)果的穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性、靈敏度等優(yōu)點(diǎn)，將成為定量檢測“瘦肉精”成分的獨(dú)特優(yōu)勢。

綜上所述，現(xiàn)有“瘦肉精”現(xiàn)場快速檢測技術(shù)的日益成熟，“瘦肉精”大量篩查工作中發(fā)揮的作用不容小覷。但“瘦肉精”現(xiàn)場快速檢測技術(shù)仍需進(jìn)一步提升，市場上仍需穩(wěn)定性高、抗干擾性高、結(jié)果準(zhǔn)確率高、性價比高的檢測技術(shù)出現(xiàn)。