快速測試板在飲用水微生物檢測中的應用

□ 汪 新 浙江方圓檢測集團股份有限公司

微生物快速檢測技術(shù)在應用中主要劃分為兩種。其一就是在傳統(tǒng)微生物檢測中，改良培養(yǎng)方式及鑒定手段，簡化樣品的處理，包括微生物快速測試板及試劑盒等多種方法。其二就是借助生物工程、遺傳學及熒光法等諸多高科技，能夠直接對微生物細胞及代謝物特異化進行微生物檢測，如PCA以及ATP熒光法等。這兩類方法，第一種方法能夠有效簡化操作步驟，在一定程度上有效提升了檢測的整體特異度及敏感度，在一定程度上縮短了檢測時間，增加了一定的檢測成本。第二種方法的優(yōu)點就是無須培養(yǎng)或只需較短的培養(yǎng)時間，具體的檢測時間縮短，配置部分精密儀器及具備一定經(jīng)驗的檢測人員。

1 微生物檢測在水質(zhì)檢測方面的現(xiàn)狀

我國的《生活飲用水衛(wèi)生標準》中所規(guī)定的常規(guī)微生物指標，包括總大腸菌群、菌落總數(shù)以及大腸埃希氏菌。在開展飲用水的微生物檢測過程中，應當確保生物檢測處于無菌環(huán)境下，在完成對檢測實驗室的常規(guī)消毒步驟之后，需要重視培養(yǎng)基的配置，完成多種藥劑混合后的消毒處理。在快速微生物檢測過程中，根據(jù)水質(zhì)的檢測情況，采用快速測試板檢測具有經(jīng)濟實用、快速優(yōu)勢，適合運用于水質(zhì)檢測中。

2 快速測試板的檢測原理及操作方法

2.1 快速測試板的檢測原理

微生物快速測試板是一種事先制備好的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品，含有標準的營養(yǎng)培養(yǎng)基及吸水凝膠。培養(yǎng)基有效結(jié)合了酶及底物反應的特異性和菌落顏色的可視化信息，可以在自然環(huán)境中檢測和鑒定不同的微生物個體，還可以對混合生長的多種微生物進行檢測。此種顯色培養(yǎng)基是一類利用微生物自身代謝產(chǎn)生的酶與相應顯色底物反應顯色的原理來檢測微生物的新型培養(yǎng)基。這些相應的顯色底物由產(chǎn)色基因和微生物部分可代謝物質(zhì)組成，在特異性酶作用下，游離出產(chǎn)色基因顯示一定顏色，直接觀察菌落顏色即可鑒定菌種。此種新型分離性培養(yǎng)基，具備較高的反應靈敏度及特異性。

2.2 快速測試板的操作步驟

采取快速檢測板檢測方法，有效減去了水樣的處理、實驗室及使用設備的消毒以及培養(yǎng)基制備等較為煩瑣的步驟。在完成水樣采集之后，在無菌條件下，在實驗面上放置微生物測試板，揭開上層膜，采用消過毒的吸管，抽取1 mL的飲用水水樣，將其緩慢靜滴至紙片上，緩慢覆蓋上層膜，在靜置10 s之后培養(yǎng)基凝固。將測試片疊在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)。依照相應的微生物檢測項目具體需求，按照既定的時間及培養(yǎng)溫度加以培養(yǎng)。最后能夠鑒定具體的菌落顏色及特點。

3 微生物快速測試板實際運用

將快速測試板測試方法運用于某公司的水質(zhì)檢測工作中，針對400份水樣完成了四種菌體的分批檢測，并且針對5%的水樣，完成了精密度試驗及對比傳統(tǒng)檢測方法試驗。

依照《生活飲用水標準檢驗方法》GB/T5750.12-2006，借助平皿計數(shù)法完成菌落總數(shù)檢測，將水樣置于37 ℃營養(yǎng)瓊脂的有氧條件下共計48 h，得出1 mL水樣中所存在的菌落總數(shù)，能夠直接用眼睛觀察。菌落的總數(shù)測試板應用原理，與國際標準測試方法一致。取出1 mL的水樣，實驗前將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基涂抹于測試板之上，后添加脫氫酶指示劑TTC，菌落在測試片上呈現(xiàn)紅色，從而有效縮短計數(shù)時間，同時，還能夠提升計數(shù)效果。

3.1 總大腸菌群檢測

總大腸菌群主要指的是在一群在37 ℃培養(yǎng)24 h后，能發(fā)酵乳糖并產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭陰性無芽孢桿菌。依照生活飲用水的檢測指標方法，針對總大腸菌群的具體監(jiān)測方法包括：濾膜法、多管發(fā)酵法以及酵底物法。

3.2 耐熱大腸菌群檢測

通過提升該菌群的培養(yǎng)溫度，從而有效區(qū)分處于自然溫度環(huán)境下的大腸菌群，以及糞便中的大腸菌群。耐熱大腸菌群即在44.5 ℃溫度下，仍然存活的大腸菌群。生活飲用水的具體檢測方法中，針對耐熱大腸菌群的檢測方法，主要包括兩種：濾膜法及多管發(fā)酵法。

3.3 大腸埃希氏菌檢測

該種菌體通常也被稱為大腸桿菌，能夠在人體內(nèi)產(chǎn)生病原體生成病原性，極易導致嬰幼兒及牲畜腹瀉。因此，應當更進一步檢測大腸桿菌及耐熱大腸菌群。

4 結(jié)語

水資源逐步匱乏的情況下，飲用水微生物檢測工作開展尤為重要?？焖贉y試板運用于飲用水微生物檢測中更好克服了培養(yǎng)基批次不同、配制條件不同及操作人員不同等問題，且整體檢測操作也較為簡單，方便攜帶，方便取樣，同時，還省時省力，加快了飲用水微生物的檢測速率，提升了檢測準確性。